Regulación de la reparación de los cortes de doble cadena en el ADN: papel de la nedilación de proteínas

Abstract

Las roturas de doble cadena del ADN son las lesiones más citotóxicas que pueden ocurrir en el ADN. Pueden ser reparadas por diferentes mecanismos y para la supervivencia celular se requiere un control preciso de ellos. En esta tesis se ha caracterizado y validado un nuevo sistema de reparación denominado See-Saw reporter (SSR) que mide el balance entre la ruta de reparación por unión de extremos no homólogos (NHEJ) y la reparación por recombinación homóloga (HR), siendo por tanto una herramienta que permite encontrar y caracterizar nuevos factores implicados en la regulación de las rutas de reparación de los DBSs. De hecho, se ha determinado el flujo de trabajo para la realización de un escrutinio con una librería de esiRNA del genoma completo usando este sistema. Así mismo, se ha analizado el efecto en el balance NHEJ/HR de una minilibrería de inhibidores con potencial terapéutico y se ha puesto de manifiesto el papel principal que tiene la nedilación de proteínas en la elección de la ruta de reparación mediante la utilización del inhibidor de la nedilación MLN4924. La inhibición de la nedilación cambia el perfil normal de reparación hacia un aumento en la reparación por recombinación homóloga. Además hemos comprobado que la nedilación dependiente de RNF111 y UBE2M inhibe la resección del ADN mediada por CtIP y BRCA1 y, por tanto, la recombinación homóloga. Por otro lado, hemos comprobado que las denedilasas COP9 signalosoma y NEDP1 son necesarias para la resección del ADN y también modulan el equilibrio NHEJ/HR. Finalmente hemos concluido que la nedilación no sólo afecta al equilibrio entre la reparación por NHEJ y la HR sino que también controla el balance entre las diferentes rutas de reparación por HR. Por tanto, el estado de nedilación de las proteínas tiene un gran impacto en la manera en la que las células humanas responden a las roturas en el ADN.