Caracterización de un subcompartimento proteolítico en el retículo endoplásmico de condrocitos

Abstract

LOS CONDROCITOS DE POLLO EN CULTIVO SINTETIZAN EL PROTEOGLICANO AGRECAN COMO UN PRECURSOR DE 370 KDA QUE ES GLICOSILADO Y SECRETADO AL MEDIO DE CULTIVO CON UNA VIDA MEDIA DE 30 MINUTOS. HEMOS DEMOSTRADO CON ESTUDIOS METABOLICOS QUE UNA FRACCION DEL PRECURSOR DE AGRECAN SUFRE UN PROCESO DEGRADATIVO ORIGINANDO UN INTERMEDIARIO DE 190 KDA QUE APARECE INMEDIATAMENTE DESPUES DE QUE EL PRECURSOR SEA SINTETIZADO. ESTE FENOMENO, DEPENDIENTE DE LA TEMPERATURA ( 20GRADOS C), ES INHIBIDO POR CIERTOS INHIBIDORES DE PROTEASAS COMO LEUPEPTINA Y PMSF. SIN EMBARGO, LA DEGRADACION NO FUE AFECTADA AL TRATAR LAS CELULAS CON BREFELDINA A O CON AGENTES LISOSOMOTROPICOS. LOS PRECURSORES DE AGRECAN DETECTADOS POR INMUNOFLUORESCENCIA SE LOCALIZARON DENTRO DE UN SUBCOMPARTIMENTO DEL RETICULO ENDOPLASMICO. EL ANALISIS DE FRACCIONES SUBCELULARES DE LOS CONDROCITOS INDICARON QUE LOS INTERMEDIARIOS DE DEGRADACION SE CONCENTRABAN EN UN SUBCOMPARTIMENTO LISO DEL RETICULO ENDOPLASMICO. EL PROCESO DEGRADATIVO FUE DEPENDIENTE DE LA CONCENTRACION DE CA2+ Y DEL ESTADO REDOX DEL RETICULO. EL TRATAMIENTO DE LAS CELULAS CON AGENTES O CONDICIONES QUE ALTERAN LA TASA DE DEGRADACION DE LOS PRECURSORES DE AGRECAN TALES COMO INHIBIDORES DE PROTEASA, BAJA TEMPERATURA O DTT, TAMBIEN MODIFICARON LA RETENCION DE ESTAS MOLECULAS EN EL SUBCOMPARTIMENTO DEL RETICULO.

ESTOS RESULTADOS INDICAN QUE UNA FRACCION SIGNIFICATIVA DEL PRECURSOR DE AGRECAN DE 370 KDA ES CONDUCIDA A UN COMPARTIMENTO LISO DEL RETICULO ENDOPLASMICO DONDE ES DEGRADADA.