Bases moleculares de la resistencia a fosfomicina e implicación de las subpoblaciones con sensibilidad disminuida en su actividad in vitro.

Abstract

El interés global que existe actualmente, en recuperar antibióticos antiguos para el tratamiento de infecciones causadas por microorganismos multirresistentes, es fruto de la escasez de alternativas terapéuticas con las que contamos para hacer frente a este tipo de bacterias. La multirresistencia a antibióticos es un problema de salud pública internacional, y el poder rescatar herramientas eficaces como son los antibióticos antiguos, fosfomicina entre ellos, es una de las estrategias propuestas por organismos internacionales como la OMS o el ECDC para hacer frente a este problema. El objetivo de esta tesis doctoral es evaluar la contribución a la resistencia a fosfomicina de los genes implicados en el transporte intracelular de dicho antibiótico, en un entorno genético controlado, así como demostrar el impacto de las diferencias en el inóculo inicial de los métodos de sensibilidad para la determinación de la CMI a fosfomicina. Para ello se construyó una colección isogénica de mutantes de deleción simple (ΔglpT, ΔuhpT, ΔcyaA y ΔptsI) y doble deleción (ΔglpT-uhpT, ΔglpT-cyaA, ΔglpT-ptsI, ΔuhpT-cyaA, ΔuhpT-ptsI, ΔptsI-cyaA), donde se evaluó su sensibilidad a fosfomicina a la vez que se determinó la frecuencia de aparición de en dicha colección. Por otro lado, se determinó la CMI a fosfomicina de una colección de 220 asilados clínicos de E. coli y K. pneumoniae mediante dilución en agar y microdilución controlando el inóculo inicial de ambas técnicas y se analizaron los acuerdos de categoría clínica ente ambas. Los resultados de este trabajo ponen de manifiesto, que las mutaciones que causan pérdida de función de los genes codificantes para los transportadores de fosfomicina (uhpT, glpT), así como de los principales genes relacionados con la regulación de su entrada en la bacteria (cyaA y ptsI), no alcanzan valores de CMI de fosfomicina considerados como resistentes aplicando los puntos de corte de sensibilidad antibiótica de CLSI. Además, únicamente las combinaciones de dobles deleciones, que implican la inactivación del transportador UhpT, presentan CMIs a fosfomicina consideradas como resistentes aplicando los puntos de corte de CLSI o EUCAST. Por otro lado, se concluyó que la CMI a fosfomicina no es un buen predictor de la actividad de este antimicrobiano frente a E. coli y K. pneumoniae, debido a que pequeñas variaciones en la concentración del inóculo inicial utilizado para realizar los test de sensibilidad causan discrepancias entre las distintas técnicas de sensibilidad, debido a que la tasa de frecuencia de aparición de mutantes resistentes a fosfomicina observada es alta. Este hecho aumenta la probabilidad de introducir mutantes resistentes en el propio inóculo inicial durante la realización de las técnicas de sensibilidad y hace poco reproducibles estas técnicas