Análisis topográfico de proliferación celular y diferenciación en el carcinoma gástrico

Abstract

Los carcinomas gástricos han sido divididos en dos tipos histológicos principales: diferenciado e indiferenciado (o intestinal y difuso), basados en la formación de glándulas. Ambos tienen diferentes características epidemiológicas y están relacionados con diferentes vías patogénicas. Las formas diferenciadas, derivan de células epiteliales gástricas que han desarrollado metaplasia intestinal (incompleta y/o completa), los indiferenciados se originan a partir de un epitelio, generalmente del fondo de la foveola, nativo o aparentemente normal. La mayoría de las formas diferenciadas muestra un fenotipo intestinal, especialmente el tipo incompleto de metaplasia. Pero con el desarrollo de métodos analíticos de histoquímica e inmunohistoquímica de mucinas, algunos timos bien diferenciados, se corresponden con un fenotipo gástrico, y otros muestran un fenotipo de metaplasia intestinal completa. En principio, los carcinomas gástricos se desarrollan en el seno de la mucosa y luego invaden el componente submucoso hasta la muscular propia/serosa. Durante este trayecto las neoplasias, modifican su estructura e incluso su historia natural. Estos cambios los marcan la heterogeneidad tumoral que se caracteriza por la presencia de subpoblaciones celulares que difieren entre sí, en algunos atributos fenotípicos: tasa de crecimiento, capacidad de invadir y metatizar, etc. Los mecanismos responsables de la heterogeneidad tumoral son: Las células neoplásicas son genéticamente inestables y parecen ser responsables ciertos genes supresores. Los tumores evolucionan potenciando los subclones más apropiados para cada ¿medio ambiente¿. Al principio, predominarán las células con especial capacidad para entrar en ciclo celular. Las características que definen la heterogeneidad tumoral (expresión genética y proliferativa) han sido bien documentadas. Algunos autores han estudiado las bases genéticas de los CG y han sugerido que un importante factor en la oncogénesis es la inestabilidad genética, así personas con inestabilidad microsatélite su genoma tienen mayor tendencia a acumular alteraciones genéticas y mayor posibilidad para una célula normal se transforme en neoplásica. No son tan claros los estudios topográficos del tumor y la expresión del fenotipo de mucinas. Solo algunos trabajos hablan de estas características en piel, vejiga y colon. Los cambios progresivos del comportamiento proliferativo neoplásico conforme el tumor crece y se desarrollan, son debidos directamente a la heterogeneidad en la cinética tumoral. En los casos donde el crecimiento en el tiempo puede establecerse por planos topográficos de infiltración pueden ser estudiados desde una perspectiva espacial o topográfica. Cabría esperar que la distribución de las células proliferativas marcaran una potencial estructura y una diferenciación que podría ser observada en los sectores más superficiales, mientras que las fases ulteriores se corresponderían a los sectores profundos, donde no debería verse tal diferenciación. Los acontecimientos secuenciales histopatológicos y molecular no son bien conocidos en la carcinogénesis colorrectal, no ocurre lo mismo en lo referente al estómago, donde existen diferentes compartimentos topográficos con diferentes estructuras, funciones y poblaciones celulares. Este hecho dificulta el conocimiento de la carcinogénesis gástrica y su comportamiento en la evolución pronostica y tratamiento. Sabiendo que la clasificación más usada internacionalmente corresponde a aquella descrita por Lauren y dado que resulta complicada una nueva clasificación, es por lo que seguimos utilizando la misma, con apoyo para el estudio de otras características. Los objetivos del presente estudio consisten en: Definición y clasificación de subtipos con diferenciación organoide en el carcinoma gástrico. Caracterización de la proliferación celular ligada al Ki-67 por compartimentos topográficos con la intención de verificar si el componente o compartimento superficial representa la fase precoz de progresión tumoral, con mayor índice de proliferación que el componente o compartimento profundo. Estudio de la correlación de las características topográficas de proliferación y fenotipo de mucinas con la expresión de proteínas tipo mlh1 y msh2, para conocer, y si es posible, sugerir, pautas citogenéticas con impacto biológico. Se han seleccionado, con carácter retrospectivo, durante el periodo comprendido entre 1994 y 2001, 104 casos (52 varones y 52 mujeres), no consecutivos de carcinoma gástrico, procedentes de los Servicios de Gastroenterología, Cirugía Digestiva y Anatomía Patológica del Hospital Universitario ¿Virgen Macarena¿ de Sevilla (España). Para el estudio histopatológico se utilizó el tejido incluido en parafina. Las muestras procedían de resecciones quirúrgicas. De los 104 casos, 68 correspondían a tumores músculo-invasivos y 36 estaban limitados a la mucosa y submucosa. Todas las piezas quirúrgicas fueron incluidas en parafina en su totalidad. De los bloques seleccionados, se realizaron un total de 20 cortes seriados de 4 micras, cada uno se tiñó con las distintas técnicas; Hematoxilina-Eosina, AAPAS, HID-AA, CEA, MUC5AD, CD-10, Mlh1, Msh2, ox-red-ConA; según un orden preestablecido, de tal modo que para la evaluación de los resultados, pudiésemos valorar los mismos campos microscópicos con las distintas técnicas utilizadas. Los cromógenos utilizados fueron indistintamente 3,3¿ tetraclorohidrato de diaminobencidina (DAB), 4-Cloro-1-Nartol, Fostatasa alcalina y 9-amino-etilcarbazol. Como referencia de proliferación celular se valoró el índice mitótico, siguiendo el método descrito en la valoración cuantitativa. En los diferentes cortes se realizó, a nivel celular, una evaluación del índice mitósico (HE) (media aritmética, desviación típica), tanto por campo microscópico como por celularidad tumoral y, además, evaluación del antígeno dependiente del ciclo celular (Ki-67/MIB-1). Todos los datos fueron procesados mediante el paquete estadístico SPSS (Chicago, IL) para Windows, versiones 7 y 9. Se realizó un estudio univariante con la finalidad de encontrar diferencias significativas entre: 1) Compartimentos tumorales (superficial y profundo), para variables de proliferación celular. 2) La inmunoexpresión de mlh1 y msh2 en compartimentos tumorales y 3) La relación entre el fenotipo de mucinas y la expresión de las oncoproteínas antes indicadas. Las diferencias se consideraron significativamente estadísticas cuando p<0.005. Las conclusiones del estudio fueron: En los CG se definen dos compartimentos (biológicos y topográficos): Por encima de la muscular propia con proliferación celular elevada, expresión no defectuosa de mlh1/msh2 y diferenciación organizativa que sugieren una correlación fisiológica conservada y daño genético reparable. Por debajo, con proliferación celular disminuida, expresión defectuosa de mlh1/msh2 y ausencia de diferenciación organizativa que sugieren una fase avanzada del desarrollo tumoral y daño genético no reparable. La pérdida física de la diferenciación fenotípica se correlaciona con la presencia de nuevas poblaciones celulares que no tienen esta capacidad de organización, si bien conservan la funcional. El reconocimiento de la estructura organizativa puede ser un marcador de diagnóstico precoz, sobre todo en las formas difusas de CG, donde no se reconocen lesiones histológicas precursoras de malignidad.