Aislamiento, purificación y caracterización de los alérgenos presentes en la semilla de lupinus albus (altramuz)

Abstract

El problema principal que nos encontramos al estudiar la alergia alimentaria al Lupinus albus, es que los alérgenos mayores no están identificados y son desconocidos, esto ocasiona que no hayan las herramientas correctas para poder abordar e intentar solucionar la sintomatología del paciente. En nuestro caso concreto, la alergia al altramuz es frecuente en la población ya que está siendo utilizada su harina en la elaboración de productos de pastelería y en comidas preparadas. En esta Tesis se ha pretendido ampliar el conocimiento en el campo de la alergia alLupinus albus, para ello hemos realizado el extracto total de altramuz a partir del cual hemos extraído los diferentes grupos de proteínas conocidas: las albúminas, las globulinas, las glutelinas, las prolaminas y la profilina, mediante distintas técnicas cromatográficas. Además, subdividimos en 11 clases más el grupo de las globulinas, era el que se presentaba en mayor proporción dentro de las semillas del altramuz. A partir de los diferentes subclases, vimos que el grupo de las albúminas era el más alérgico, y en concreto su proteínas de 97 kDa, la lipooxigenasa, le seguía las prolaminas con sus proteínas de 70 y 50,2 kDa y por últimos las globulinas de 49,8 kDa (vicilina) y de 82,9 kDa (convicilina), estas proteínas pueden considerarse como alérgenos mayores. Al someter los alérgenos del estudio a altas temperaturas, vimos que únicamente el extracto de las prolaminas conservaba su alergenecidad, aunque esta era algo menor, por otro lado también en este grupo el que mantiene mejor sus características alergénicas al ser sometido a la acción de diversos enzimas proteolíticos, es decir, sus alérgenos son termoestables y resistentes a la acción enzimática digestiva. Otra línea de investigación fue la de determinar las posibles reacciones cruzadas entre el altramuz y distintas especies y comprobamos que dentro de su misma familia la reactividad cruzada era bastante elevada, es decir, existe una alta similitud entre los alérgenos presentes en las semillas del altramuz y el cacahuete tostado, la soja, el garbanzo, la judía verde y la lenteja. También encontramos reactividad cruzada al realizar los estudios con especies de otras familias como era el caso del olivo, la grama y el girasol. Quisimos demostrar si las reacciones cruzadas que se dan sobretodo entre especies de distintas familias era protagonizadas por las profilinas, ya que se conocen que son proteínas altamente conservadas durante la evolución, para ellos realizamos estudios entre la profilina del altramuz y las del olivo, la grama y el girasol y comprobamos que en la mayoría de los casos era así, la proteína responsable de las reacciones cruzadas entre estas especies estudiadas era la profilina.