Papel de los microARNs en el diagnóstico del carcinoma hepatocelular relacionado con el virus de la hepatitis B y su papel en la regulación del ADN circular covalente cerrado en pacientes con hepatitis B crónica en la zona gris

Abstract

Antecedentes: La infección por el virus de la hepatitis B (VHB) sigue siendo un problema de salud pública mundial, destacando como el principal factor de riesgo del carcinoma hepatocelular (CHC). La mayoría de los pacientes con hepatitis B crónica (HBC) se encuentran en alguna de las 5 fases de la historia natural del VHB definidas por la Asociación Europea para el Estudio del Hígado (EASL) en 2017, pero algunos individuos no encajan en ninguno de los estados inmunes habituales y se consideran estar en la “zona gris (ZG)”. El ADN circular covalente cerrado (ADNccc) juega un papel clave en el ciclo de vida del virus y no puede ser eliminado por las terapias actuales. Además, la cuantificación del ADNccc no es fácil de generalizar debido a la naturaleza invasiva de la biopsia hepática. La creciente evidencia indica que los microARNs (miARNs) podrían regular la expresión del ADNccc intrahepático, participar en el diagnóstico y la historia natural de la enfermedad. Objetivos: (1) Realizar un metaanálisis para evaluar la precisión diagnóstica de miARN circulante como biomarcador no invasivo en el diagnóstico precoz del CHC relacionado con el VHB (CHC-VHB). (2) Explorar los marcadores subrogados no invasivos para ADNccc intrahepático en pacientes con hepatitis B crónica en la zona gris (HBC-ZG). (3) Explorar el papel regulador de los miARNs en la expresión del ADNccc en pacientes con HBC-ZG, establecer una red de interacción miARN-ARNm y proporcionar una base teórica para encontrar nuevas dianas terapéuticas. Materiales y métodos: Después de una revisión sistemática de los estudios relevantes, se combinaron la sensibilidad, la especificidad, la razón de verosimilitud positiva (PLR) y negativa (NLR), la odds ratio de diagnóstico (DOR) y el área bajo la curva (AUC) para diagnosticar el CHC-VHB. Se realizó un análisis de metarregresión y un análisis de subgrupos para explorar la heterogeneidad y se utilizó el gráfico en embudo de Deeks para evaluar el sesgo de publicación. Se incluyeron un total de 13 pacientes con HBC-ZG. Se cuantificaron el ADNccc intrahepático y los marcadores séricos de actividad virológica (incluido el ARNpg-VHB, ADN-VHB, cuantificación del HBsAg, ALT y AST). Las correlaciones entre el ADNccc intrahepático y los marcadores séricos de actividad virológica se analizaron mediante la prueba de correlación de Spearman. Se consideró estadísticamente significativa cuando p < 0,05. Según el nivel de expresión de ADNccc intrahepático, 13 pacientes con HBC-ZG se dividieron en grupo de referencia (n = 7) con ADNccc < 1 copia/cel y grupo de control (n = 6) con ADNccc ≥ 1 copia/cel. Se aislaron miARNs y ARNm de tejido hepático, y su expresión se analizó mediante Affymetrix GeneChipTM miRNA 4.0 Assay y ClariomTM S Assay, Human, respectivamente. Se utilizó el software R para analizar la expresión diferencial (ED) de miARNs y ARNm, |logFC| > log1,5 y el valor p < 0,05 se establecieron como valor de corte. A continuación, se realizaron los análisis de enriquecimiento de las vías GO, KEGG y GSEA. Además, las interacciones miARN-ARNm se adquirieron a partir de miRTarBase, y se empleó cytoscape para construir la red de miARN-ARNm. Se calcularon el coeficiente de correlación de Pearson (r) y su valor p. Se consideró que la correlación entre miARN-ARNm diana era fuerte cuando el coeficiente era r < - 0,7 y el valor p < 0,01. Resultados: En el metaanálisis actual se incluyeron 19 artículos que incluyen 32 estudios. La sensibilidad, especificidad, PLR, NLR, DOR y AUC generales fueron 0,83 (IC 95%: 0,79 - 0,87), 0,78 (IC 95%: 0,73- 0,83), 3,9 (IC 95%: 3,0 - 4,9), 0,21 (IC 95%: 0,16 - 0,27), 18 (IC 95%: 12 - 27) y 0,88 (IC 95%: 0,85 - 0,91), respectivamente. El análisis de subgrupos muestra que el uso de los clusters de miARN junto con un aumento del tamaño de muestra pueden mejorar la precisión diagnóstica. Además, no hay sesgo de publicación. En pacientes con HBC-ZG, se vieron correlaciones significativas entre los niveles séricos de ARNpg-VHB, ADN-VHB y cuantificación del HBsAg con ADNccc intrahepático (r = 0,790, p = 0,001, r = 0,660, p = 0,013, y r = 0,730, p = 0,004, respectivamente). Se cribaron un total de 19 ED miARNs que consisten en 7 ED miARNs up-regulados y 12 down-regulados, y 340 ED ARNm que consisten en 180 up-regulados y 160 down-regulados. Los términos GO más enriquecidos estaban relacionados con el proceso biológico del virus, como la regulación del ciclo de vida viral, la regulación del proceso viral y la regulación de la replicación del genoma viral. El análisis de enriquecimiento de la vía KEGG sugirió que estos objetivos predichos estaban vinculados con la hepatitis B. Finalmente, se estableció una posible red reguladora de miARN-ARNm basada en los resultados del análisis de correlación de expresión, entre los cuales miR-4295 - ZNF224 mostró una correlación relativamente alta. Conclusión: Los miARNs circulantes (especialmente el miR-125b) podrían servir como un biomarcador no invasivo potencial en el diagnóstico precoz de pacientes con CHC-VHB. Existe una correlación significativa entre el ARNpg-VHB sérico y el ADNccc intrahepático en pacientes con HBC-ZG, lo que indica que el ARNpg-VHB sérico es un potencial biomarcador subrogado fiable del ADNccc intrahepático. La disminución de la expresión de miR-4295 en pacientes con HBC-ZG con bajo nivel de ADNccc está relacionada con el aumento de la expresión de ZNF224, que está involucrado en el proceso biológico de la replicación del virus y la regulación del ciclo de vida. Nuestros hallazgos pueden proporcionar nuevos objetivos potenciales para el tratamiento de HBC. En el futuro, se necesitan más experimentos para verificar nuestros hallazgos.