Análisis de proteínas relacionadas con estrés oxidativo en saliva y suero de enfermos de Parkinson idiopático

Abstract

La fisiopatología de la Enfermedad de Parkinson idiopática (EPi) está relacionada con diversos procesos oxidativos. Esta tesis se basa en la investigación de diferentes sustancias que se hallan en saliva y suero y que participan en dichos procesos. A continuación, se expone un resumen de cada uno de los tres estudios llevados a cabo. Estudio de la deshalogenasa tipo 1 en saliva y suero de enfermos de Parkinson idiopático. Las enzimas deshalogenasas (DEHAL) no han sido estudiadas en los enfermos de Parkinson, y podrían estar relacionadas con los efectos de estrés oxidativo de la enfermedad. La enzima DEHAL tipo 1 (DEHAL1) es una deshalogenasa y una nitrorreductasa, actuando como enzima multifuncional redox. Se expresa en tejidos relacionados con la Enfermedad de Parkinson (EP) donde se detectan depósitos de α- sinucleína (αSyn) de neuronas positivas a tirosina hidroxilasa (TH). En este trabajo, se ha estudivado la presencia de la enzima DEHAL1 en suero y saliva. Es un estudio observacional, analítico tipo casos-controles en el que se han valorado 25 pacientes con EPi y 25 controles, se ha incluido información demográfica y características motoras y no motoras y se han empleado técnicas de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). Los resultados indican que la enzima DEHAL1 salival se relaciona con la sanguínea (proporción ~1:250) y, además, en los pacientes, se correlaciona de modo inverso con escalas clínicas de la EP. De este modo, cuanto menores son los niveles de DEHAL1 en saliva, mayor es la gravedad de la enfermedad, tanto en su vertiente motora como global (valorado por las escalas Unified Parkinson`s Disease Rating Scale [UPDRs] y Hoehn-Yahr respectivamente). De hecho, los niveles de DEHAL1 salival en sujetos con enfermedad avanzada (grados 2,5 a 4 de Hoehn-Yahr) son significativamente menores que los sujetos con grados tempranos (grados 1 a 2) o sujetos control. Por tanto, los resultados indican que los niveles de la enzima decrecen con el curso de la enfermedad y se relacionan con su sintomatología. Por tanto, ha de existir una progresiva reducción 28 funcional de la enzima que podría influir en el desarrollo de la EP, probablemente en fenómenos de estrés halogenativo/nitrativo, localizados en las glándulas salivares. Se sabe que estos dos tipos de estrés oxidativo participan en la EP, y las glándulas salivares cada vez tienen un papel más importante en la patogenia de la enfermedad. Estudios sobre α-sinucleína nativa y nitrada en saliva y suero, y su relación con características clínicas en la enfermedadE de Parkinson idiopática. La αSyn es un posible biomarcador de la EP. Hemos valorado el contenido de αSyn en suero y saliva, y cómo los niveles de αSyn se relacionan con las características clínicas en cohortes de EPi. En este trabajo se han valorado 56 pacientes con EPi (40 muestras de suero y 27 de saliva) y 20 controles (20 muestras de cada biofluido), y se ha incluido información demográfica y características motoras y no motoras. Se han empleado técnicas bioquímicas de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) y de inmunotransferencia o western blotting. Los resultados indican que a) los niveles totales de αSyn sérica no se correlacionan con ninguna característica clínica de la enfermedad, b) los niveles en suero y saliva de αSyn no se correlacionan significativamente entre sí, c) los niveles totales de αSyn salival se correlacionan positivamente con las puntuaciones de UPDRS total y motor (p <0.01), y d) los niveles totales de αSyn salival son significativamente más bajos en pacientes que presentan algún síntoma no motor (n=15; p<0,0001 respecto a los que no presentan, n=12); los síntomas no motores más frecuentes en los pacientes con EPi fueron el estreñimiento (n=7) y la depresión (n=5). En conclusión, los niveles séricos de αSyn carecen de utilidad para distinguir características clínicas o para predecir el diagnóstico de EP. Sin embargo, el nivel total de αSyn salival es un biomarcador de fácil acceso que podría ser útil para discernir las características clínicas y evolutivas de la enfermedad, así como la presencia de síntomas no motores, principalmente estreñimiento y depresión. 29 Estudio de melanina, tirosinasa humana y lactoperoxidasa en saliva y suero de enfermos de Parkinson idiopático. Los núcleos pigmentados del cerebro contienen neuromelanina, que parece participar en la patogenia de la EP, pero se desconoce el contenido de la melanina no neuronal (melanina propiamente dicha) en suero y saliva y su papel en la EPi; igual ocurre con otras sustancias como las enzimas sintetizadoras de melanina, tirosinasa humana (hTyr) y lactoperoxidasa (LPO). De esta manera, los objetivos de este estudio fueron investigar las relaciones entre la melanina no neuronal, la hTyr y la LPO en suero y saliva, así como su relación con las características clínicas en la EPi. Es un estudio observacional, analítico tipo casos-controles en el que se han valorado 42 pacientes con EPi (25 muestras de suero y 21 de saliva) y 20 controles (20 muestras de cada biofluido), se ha incluido información demográfica y características motoras y no motoras y se han empleado técnicas de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). Los resultados indican que se detecta melanina, hTyr y LPO en suero y saliva en todos los sujetos, tanto pacientes como controles, sin diferencias entre los grupos. En cuanto a las correlaciones clínicas, solo se observa que las concentraciones de hTyr sérica y melanina salival se correlacionan inversamente con la duración de la enfermedad (p<0,01), sin ninguna correlación con otra variable clínica. Estos marcadores proteicos no se correlacionan entre sí. En conclusión, la melanina, la hTyr y la LPO están presentes en suero y saliva tanto en pacientes de EPi como controles. Los niveles séricos y salivares de estos marcadores carecen de utilidad para distinguir características clínicas o para predecir el diagnóstico de EPi. Solamente la melanina salival y la hTyr sérica podrían ser indicadores periféricos de la duración de la EPi.