Estudio electroforético de las proteínas del L.C.R.

Abstract

En el presente trabajo se realiza un estudio de las proteínas del L.C.R. mediante la electroforesis en papel. Siguiendo el orden establecido previamente desarrollamos con brevedad las bases y fundamentos de dicha técnica, así como un resumen histórico de los autores que iniciaron el estudio de estos problemas y de los sucesivos pasos o jalones que se marcan claramente en la evolución de los mismos. El material que hemos utilizado en este trabajo han sido 110 muestras de L.C.R. pertenecientes a otras tantas personas que han acudido durante estos dos últimos años a los distintos servicios de la Escuela Profesional de Neurología y Neurocirugía de esta Facultad. La técnica seguida por la obtención de la separación electroforética sobre el papel de las distintas fracciones proteicas del L.C.R. han sido fruto de una investigación y elaboración personal mediante la cual se ha seleccionado y desarrollado el método de concentración y diálisis del L.C.R. a través de una membrana de colodión, contra suero fisiológico, por medio de la ultrafiltración al vacío, por considerarla como la más idónea, apta y menos costosa y compleja, permitiendo en fin, que la electroforesis de las proteínas del L.C.R. pueda ser una realidad en toda clínica neurológica, dejando de ser exclusiva de laboratorios especializados. Del total de casos estudiados, 10 de ellos pertenecían a persona que consideramos como normales tras una selección muy rigurosa, y estudio clínico neurológico y analítico del L.C.R. mediante las investigaciones de laboratorio ya clásicas. Con los resultados obtenidos por la aplicación de la electroforesis en papel a estos 10 L.C.R. se practicó un estudio estadístico, determinando así los valores medios, desviación y error standard, logrando con gran aproximación el proteinograma raquídeo normal, es decir, el valor medio normal para cada una las distintas fracciones proteicas y cociente albumina globulina del L.C.R. pertenecientes a las personas del medio ambiente en que nos desenvolvemos. Se realizó un estudio analítico del proteinograma raquídeo normal bajo tres aspectos distintos: Descripción de las diversas fracciones proteicas encontradas en los 10 casos examinados. Estudio de las diferencias existentes entre los proteinogramas normales del suero sanguíneo y del L.C.R., comparando sus distintos porcentajes. Así mismo hemos establecido una comparación entre los resultados hallados por nosotros y considerados como normales y los obtenidos por los investigadores que más se han preocupado en estos problemas, con indicación además de la técnica seguida por cada uno de ellos para consecución de sus estudios electroforéticos del L.C.R. Hemos aplicado la técnica descrita de electroforesis en papel a 1000 muestras de L.C.R. pertenecientes a personas afectas de diversas enfermedades neurológicas. Se han determinado en primer lugar los porcentajes de las distintas fracciones proteicas en cada uno de los L.C.R. examinados, con exposición de las curvas y tiras electroforéticas representativas de cada una de las afecciones neurológicas estudiadas. Se procedió a continuación a estudiar los resultados obtenidos mediante unos comentarios generales, destacando seguidamente los valores conseguidos para cada entidad nosológica en particular, comparándolas con los descritos en la bibliografía mundial. Finalmente se ha establecido una clasificación de los diversos tipos de curvas electroforéticas que se pueden obtener, en el L.C.R. relacionando así mismo cada uno de los tipos descritos con las afecciones neurológicas en las que se presentan, con el consecuente valor clínico que ello puede tener. El estudio de todo este material ha permitido comprobar una serie de alteraciones en el espectro proteico del L.C.R. de muchas enfermedades, en líquidos que por otra parte presentaban una marcada normalidad ateniéndonos exclusivamente a los resultados analíticos clásicos, alteraciones que nos permiten aportar datos de gran interés e importancia para el diagnóstico precoz, y diferencial de esas afecciones neurológicas, así como para el criterio de su evolución y curación, o bien, para conocer con más profundidad la intimidad bioquímica de su patogenia. CONCLUSIONES 1. La realización de la electroforesis en papel del L.C.R. hace necesaria la obtención previa de una muestra del mismo desmineralizada y con una concentración proteica 100 veces superior a su valor normal. (0,20 gr. Por mil a 2 gr.%). La concentración y desmineralización del L.C.R. puede ser conseguida simultáneamente, como hemos demostrado, mediante ultrafiltración al vacío a través de un tubo de colodión que nosotros mismos elaboramos y en el que al mismo tiempo se realiza la diálisis contra una solución de suero fisiológico. 2. La cantidad inicial de L.C.R. necesaria es de 5 c.c. para obtener una muestra con las condiciones adecuadas para acometerla a la electroforesis en papel, de 0,05 c.c. En caso de L.C.R. patológico cuyo contenido en proteínas totales está incrementando, la cantidad del mismo necesaria para su posterior concentración y diálisis puede ser aún menor, estando por lo tanto en relación inversamente proporcional el contenido proteico del L.C.R. y la cantidad que se necesita del mismo a fin de obtener la muestra adecuada con la concentración deseada. 3. Este método de concentración y de diálisis simultánea, descrito, por su rapidez, costo mínimo, falta de complejidad y escasa cantidad de L.C.R. inicial necesario, si lo comparamos con el necesitado en otras técnicas, permite su realización en cualquier laboratorio y la consiguiente aplicación de la electroforesis en papel a las proteínas del L.C.R. a la clínica diaria. 4. Los valores medios normales del proteinograma raquídeo de la población existente en el medio ambiente en que nos desenvolvemos, obtenido mediante el estudio estadístico de los resultados logrados en el examen de 10 L.C.R. pertenecientes a personas que se consideraron como normales tras una selección rigurosa son los siguientes: Prealbumina 3,7 – 5,1% Albumina 51,1 – 54,1% Globulina Alfa 1 5,6 – 6,6% Globulina Alfa 2 7,3 – 9,1% Globulina Beta 13,3 – 14,3% Globulina Tau 4,3 – 5,5% Globulina Gamma 9,3 – 10,5% Cociente A/G 1,1 – 1,3 5. En todos nuestros exámenes electroforéticos de L.C.R. normales hemos encontrado una fracción de débil concentración velocidad de emigración superior a la de la albumina y por consiguiente de inferior peso molecular no existente en el suero sanguíneo que se denomina Prealbumina, fracción V o X, y cuyos valores máximos y mínimos obtenidos han sido 5,2% y 3,1% respectivamente, siendo el valor medio de 4,4%. Igualmente, entre las fracciones Beta y Gamma hemos hallado constantemente en los L.C.R. normales la presencia de otra fracción proteica que como la anterior no existe en el suero, denominada fracción Tau, y cuya individualidad de las fracciones adyacentes es aún discutida. En nuestros 10 casos normales, la constante y clara presencia de esta fracción entre las globulinas beta y gamma, permite establecer un paralelismo entre ella y la prealbumina y conferirle a estas fracciones un marcado carácter de especificidad del L.C.R. Los valores máximos y mínimos determinados por nosotros han sido de 6,3% y 4,2% respectivamente y el valor medio de 4,9%. No hemos encontrado en los casos normales examinados relación alguna entre la cantidad de proteínas totales de L.C.R y los porcentajes de las fracciones prealbumina y Tau. 6. Estudiando comparativamente los resultados de las electroforesis en papel de las proteínas del suero y del L.C.R. llegamos a las siguientes conclusiones. La proporción de Albumina es menor, en un orden del 10% aproximadamente, en el L.C.R. que en el suero sanguíneo, considerando ambos líquidos biológicos como normales. Los valores porcentuales máximo y mínimo fueron 55,5% y 50,0% respectivamente y el medio 52,6%. Encontramos una mayor proporción de la globulina beta en el L.C.R. casi 1 ½ veces más que en el suero, dato en favor del carácter cerebrogenico de esta globulina. Los valores máximo y mínimo fueron 14,6% y 13,1% respectivamente y el medio 13,8%. El porcentaje de la fracción gamma está disminuido en el L.C.R., del orden de 0,5 veces aproximadamente, con relación al suero sanguíneo. El valor máximo obtenido fue 11,0%, el mínimo 9,1% y el valor medio 9.9%. El valor del cociente A/G que en el suero es de 1,5 disminuye en el L.C.R. en el que el valor medio hallado es 1,2 estando comprendidos dentro de los límites de la más estricta normalidad los valores entre 1,1 y 1,3. 7. Se ha aplicado la técnica de la electroforesis en papel a 100 L.C.R. patológicos pertenecientes a otras tantas personas afectas de diversas enfermedades neurológicas, y cuyas edades oscilaban entre 1 mes y 69 años. El 60% de las muestras estudiadas pertenecían a sujetos varones y el 40% restante a sujetos hombres. Un número considerable de las fracciones proteicas en estos 100 exámenes identificadas muestran porcentajes que se encuentran dentro de los límites de la normalidad. 8. La electroforesis en papel de las proteínas del L.C.R. contribuye al diagnóstico diferencial de las diversas causas etiológicas de las atrofias cerebrales, complementando el estudio neuroencefalográfico. En los casos estudiados se presenta un claro aumento de la globulina beta en las atrofias de causa degenerativa, una marcada elevación de la albumina y del cociente A/G en las debida a procesos vasculares, mientras que en las atrofias ya establecidas, los valores electroforéticos son normales. El estudio electroforético representaría una visión dinámica del proceso atrófico, que estaría en evolución, mientras que el neumoencefalográfico es el estudio estático de esas lesiones en un momento dado. Amos métodos, pues, se complementan. 9. Asimismo, este método de investigación contribuye al diagnóstico diferencial de las hidrocefalias obstructivas y comunicantes que muestran respectivamente aumento muy marcado d las fracciones Beta y Albumina respectivamente. 10. La electroforesis en papel de las proteínas del L.C.R. tiene una gran importancia para el diagnóstico precoz y diferencial de las meningitis TBC, debido a las alteraciones del espectro proteico, disminución de la Albumina y aumento de la globulina gamma. Estas alteraciones son de gran interés igualmente en los criterios de evolución y curación de estas afecciones. 11. La globulina Beta se encuentra aumentada en todos aquellos procesos neurológicos que se acompañen de destrucción de tejido cerebral, sobre todo en los de carácter degenerativo, datos ambos en favor del discutido carácter cerebrogenico de esta globulina, así como en los procesos que producen una marcada hipoxia o anoxia cerebral. 12. La globulina gamma se muestra claramente elevada en los procesos infecciosos-inflamatorios, sobre todo de tipo crónico como Neurolues, Meningitis TBC, Esclerosis múltiples y leucoenfalitis desmielinizantes, careciendo en esta última de experiencia personal. 13. En las hemorragias subaracnoideas, el L.C.R. presenta una curva electroforética de aspecto muy similar a la del suero con ausencia de las fracciones prealbumina y Tau, así como otras alteraciones en el resto de ellas, como aumento de albumina globulina gamma y disminución de la fracción beta. El cuadro electroforético varía además individualmente según la proporción de sangre mezclada con el L.C.R. 14. El estudio del grupo de las globulinas alfa muestra un aumento a vasos bastante evidente y marcado en los L.C.R. pertenecientes a personas con tumores del Sistema Nervioso o afectas de hernias discales. 15. Existe una clara diferencia entre los perfiles o curvas electroforéticas de la arterioesclerosis cerebral, que se acompaña de un gran aumento de albumina, consecuencia de la alteración de la permeabilidad de la barrera hematoencefálica y el cuadro agudo en ella frecuentemente presentado de trombosis cerebral en el que la fracción elevad aes la globulina beta, como consecuencia de la destrucción de tejido cerebral y de la formación en el mismo de dicha globulina. 16. En el resto de las afecciones neurológicas estudiadas debido al insuficiente número de casos examinados o a la inespecificidad de los resultados logrados, los valores conseguidos y los datos obtenidos no pueden ser considerados como definitivos. 17. Se propone una clasificación personal de las curvas electroforéticas de las proteínas del L.C.R. en la que se relacionan los predominios de las distintas fracciones con las diversas entidades nosológicas neurológicas en las que aparecen, con el consiguiente valor aplicativo a la clínica de la misma. Se establecen 6 tipos de curva electroforética: Tipo I o Normal Tipo II con predominio de la Albumina Tipo III con predominio de las globulinas alfa Tipo IV con predominio de la fracción beta Tipo V con predominio de la globulina gamma Tipo VI o mixto, con ausencia o disminución muy marcada de las fracciones prealbumina y Tau. 18. Finalmente a la vista de todo lo anteriormente expuesto, llegamos a la conclusión de que el examen mediante la electroforesis en papel de las proteínas del L.C.R. aporta datos de gran importancia a la clínica neurológica, máxime cuando en muchas afecciones de la misma el estudio analítico clásico de este líquido biológico no presenta alteraciones de ningún carácter, debiendo por lo tanto esta técnica de investigación convertirse en un método analítico de gran interés a considerar en el estudio de las afecciones del Sistema Nervioso, y en las que sin duda alguna creemos que en la resolución de muchos de sus ahora intrincados problemas, ocupará en el futuro un lugar muy destacado, resolución a la que esperamos y deseamos haber contribuido con nuestro modesto esfuerzo personal.