Estudios funcionales de las pirofosfatasas inorgánicas de saccharomyces cerevisiae y organismos fotosintéticos

Abstract

Obje tivos de la Te s is Doctoral 1. Expresar funcionalmente la pirofosfatasa soluble (sPPasa) de la Familia II de Moorella thermoacet ica (MtPPasa) en el eucariota modelo Saccharomyces cerev isiae. 2. Analizar funcionalmente la secuencia del promotor del gen IPP1 que codifica Ipp1p, la sPPasa mayoritaria de Saccharomyces cerev isiae. 3. Reproducir en Saccharomyces cerev isiae el escenario metabólico del PPi de organismos fotosintéticos, mediante la co-expresión de una pirofosfatasa de membrana y variantes de Ipp1p con localización núcleo-citoplásmica alterada. 4. Analizar las implicaciones funcionales y fisiológicas de la distribución núcleo-citoplásmica de la sPPasa Ipp1p de Saccharomyces cerev isiae. 5. Estudiar el efecto de la salinidad y tipo de metabolismo (auto- , mixo- o heterotrófico) sobre los niveles de actividad y proteína de las PPasas solubles y de membrana (mPPasas) de diferentes especies de microalgas eucarióticas, tanto marinas como dulceacuícolas. 6. Obtener cepas mutantes de la microalga modelo Chlamydomonas reinhardt ii con la expresión de su H+-PPasa alterada, y evaluar el papel de esta mPPasa en la respuesta fisiológica a condiciones de estrés (salinidad) y a cambios metabólicos (auto- , mixo- o heterotofía). 7. Expresar funcionalmente diferentes mPPasas (H+-PPasas y Na+-PPasas) en la cianobacteria modelo Synechocyst is sp. PCC6803 y verificar si confieren tolerancia a salinidad. 8. Identificación y clonación de genes de nuevas Na+-PPasas de microalgas marinas de diversos grupos taxonómicos (Prasinofíceas, Bacillariofíceas, Rodofíceas). Caracterizar funcionalmente las mPPasas de microalgas marinas, tanto en su organismo nativo como mediante su expresión heteróloga en Saccharomyces cerev isiae.