Estudio experimental de los aloinjertos cutáneos en rata Wistar bajo la influencia de ciclosporina A y azatioprina

Abstract

Dados los antecedentes expuestos a esta introducción, en el momento presente, la profilaxis y tratamiento del rechazo siguen siendo problemas difíciles de resolver. El objetivo de la inmunosupresión utilizada para el trasplante, es asegurar la supervivencia del injerto sin riesgos indebidos para el paciente. Sin embargo, la inmunosupresión, tal como se utiliza hoy en día, dista mucho de este ideal. Las complicaciones debidas a la inmunosupresión son corrientes y pueden poner en peligro, incluso, la vida del paciente. El riesgo de la inmunosupresión queda potenciado en el momento de aplicar una terapia antirrechazo. El paciente ya está inmunodeprimido y el diagnóstico del rechazo va seguido por un aumento en el tratamiento esteroideo y, a menudo, por la edición de algunas otras medidas terapéuticas. Esto ha servido para ensayar protocolos alternativos de inmunosupresión. Se precisa un mejor régimen inmunosupresor generalizado que proporciona mejores índices terapéuticos, o bien, preferiblemente, un tratamiento que induzca una falta de respuesta inmunológica del receptor donante. En 1962, se utilizó por primera vez la azatioprina como inmunosupresor en un trasplante, y desde entonces se ha convertido en el agente inmunosupresor estándar en el trasplante. La ciclosporina A se comercializó en noviembre de 1983, y ha ocupado el lugar de preferencia de intensa investigación e interés en trasplante e inmunología celular. Los injertos cutáneos han sido los más utilizados en el estudio del rechazo. No precisan ser cubiertos por ningún tipo de apósito (hecho que puede interferir la biología del injerto). Mediante la inspección directa se puede precisar mejor y más exactamente el momento y evolución del rechazo, y los estudios histopatológicos repetidos sobre el injerto se pueden realizar con mayor facilidad. Dado que ya existen trabajos sobre la valoración de la efectividad de ambas drogas, tanto en trasplantes experimentales como en humanos, en el presente trabajo, nos hemos propuesto estudiar un aspectos parcial de la inmunidad del trasplante: el estudio morfológico e histopatológico de la reacción de aloinjerto cutáneo en la Rata Wistar bajo la influencia de la ciclosporina A y la Azatioprina. También hemos querido comparar la influencia de la administración de la primera dosis cinco días antes del trasplante y continuado después de él con la mima, con la primera dosis administrada inmediatamente después del trasplante, y nuestro tercer objetivo es comparar la influencia del sexo con respecto a donante y receptor de injerto: trasplantado, macho-macho, hembra-hembra y macho-hembra. Se expone un estudio experimental en la Rata Wistar, para el cual hemos empleado 274 ratas y con un peso de 200 grs. aproximadamente, sometidas a las mismas condiciones ambientales y de alimentación, procedentes de dos líneas genéticas diferentes a fin de evitar consanguinidad entre donante y receptor, a las que se realizó trasplante cutáneo de piel total. Hemos estudiado un aspecto parcial de la inmunidad del trasplante: el estudio morfológico e histopatológico de la reacción del aloinjerto cutáneo bajo la influencia de la ciclosporina y azatioprina. También hemos comparado la influencia de la administración de la primera dosis cinco días antes del trasplante y continuando después de él con la misma, con la primera dosis administrada después del trasplante, y por último estudiando la influencia del sexo con respecto a donante receptor del injerto: trasplantado macho-macho, hembra-hembra y macho-hembra. Los hallazgos morfológicos, se obtuvieron, considerando al injerto rechazado cuando ha sido totalmente expulsado o destruido, determinando este momento mediante la inspección diaria del trasplante. Los hallazgos histopatológicos, se obtuvieron, mediante biopsias periódicas a los tres, siete y doce días, en las que se obtuvo piel del animal receptor y piel el injerto con sus respectivos lechos, y la zona de unión de ambos. En los animales que murieron o perdieron el injerto espontáneamente, se realizaron biopsias en otros plazos de tiempo. Los animales que por algún motivo murieron, les fue practicada la autopsia, estudiándolas sistemáticamente además de los injertos cutáneos, el bazo y las glándulas suprarrenales. También fueron estudiados anatomopatológicamente otros órganos, tales como hígado, pulmón, etc. Los resultados se obtuvieron, valorando los hallazgos morfológicos, hallazgos histopatológicos, hallazgos de las necropsias de los animales muertos y otras observaciones complementarias. Finalmente se exponen las conclusiones obtenidas de la interpretación de los resultados. CONCLUSIONES: 1. El injerto de piel homologa en la Rata Wistar va seguido de un fenómeno inmunológico, denominado “reacción de homoinjerto cutáneo”, que conduce al rechazo del trasplante. Desde el punto de vista macroscópico, el injerto aparece duro, oscuro, apergaminado sin tendencia a cicatrizar en los bordes y comienza a levantarse de su lecho hasta que se desprende totalmente dejando al descubierto un lecho más o menos epitelizado. 2. La supervivencia del homoinjerto cutáneo, puede ser aumentada cuando se utilizan inmunosupresores químicos exclusivamente, sin emplear otros procedimientos que modifiquen la inmunidad del trasplante. Sin embargo, el aumento de supervivencia conseguida con el empleo de una droga inmunosupresora aislada es escaso. 3. La administración de la droga antes de la realización del trasplante proporciona mejores resultados que cuando se administra la primera dosis de la misma después del trasplante. 4. En nuestra experiencia, en sentido decreciente los mejores resultados se obtienen con la ciclosporina A, administrada desde cinco días antes del trasplante. Tanto la azatioprina administrada cinco días antes del trasplante como la ciclosporina A administrada inmediatamente después del trasplante han dado prácticamente los mismos resultados, y en último lugar la azatioprina administrada inmediatamente después del trasplante. De tal suerte que el aumento de supervivencia de los homoinjertos cutáneos puede ser un procedimiento para valorar la efectividad de agentes inmunosupresores. 5. Del análisis de la supervivencia media de los homoinjertos en el conjunto de los animales tratados con inmunosupresores en relación con diversos factores considerados aisladamente, pude establecerse: a. Sexo del receptor: no parece influir de modo decisivo, aunque la supervivencia media del homoinjerto es ligeramente superior en los animales macho que en los animales hembra. b. Igualdad o diferencia de sexo entre donante y receptor: la supervivencia del injerto es mayor cuando ambos animales son de sexo opuesto en los grupos tratados con inmunosupresores, en cambio en los animales no tratados del grupo control la supervivencia fue mayor cuando ambos animales fueron del mismo sexo. 6. El examen histológico o histopatológico en los injertos cutáneos, es un procedimiento adecuado para seguir la evolución de los trasplantes. a. Las diferencias histopatológicas entre las reacciones de homoinjertos cutáneos en ratas Wistar no tratadas y en animales sometidos a tratamiento con drogas inmunosupresoras, son más bien de tipo cuantitativo que cualitativo, y también de tipo cronológico en cuanto a la aparición de los hallazgos. b. En los homoinjertos pertenecientes a animales con inmunosupresores, se observa un retraso evolutivo en el desarrollo de los acontecimientos histológicos, en relación con los homoinjertos pertenecientes a animales del grupo control. c. En algunas biopsias procedentes de animales tratados con inmunosupresores, se observan colonias de gérmenes o extravasaciones hemáticas, que bien pueden deberse a efectos secundarios de las drogas o a manipulaciones operatorias o post-operatorias. d. Las biopsias sucesivas sobre un mismo injerto pueden modificar su biología y aumentar el riesgo de infección, pudiendo originar interpretaciones erróneas de los resultados. Por otra parte, las biopsias sobre injertos diferentes pueden conducir a hallazgos muy dispares como consecuencia de las diferencias biológicas individuales, dificultando la interpretación de los resultados. La investigación anatomopatológica de estos órganos puede ayudar a la interpretación de los resultados. 7. El empleo de agentes inmunosupresores, cuya finalidad fundamental es la prolongación de la supervivencia de los homoinjertos, puede producir efectos secundarios no deseados que conducen la aparición de complicaciones de importancia variable pero, a veces mortales. Entre las complicaciones observadas, las dependientes del empleo de inmunosupresores: a. Azatioprina. Puede originar complicaciones variadas: predisposición a infecciones o agravación de las mismas, manifestaciones hemorrágicas, trastornos digestivos (sobre todo diarrea), pérdida de peso. b. Ciclosporina A. Manifestaciones hemorrágicas, temblores, hipertrofia gingival, anafilaxis. En orden a la aparición de efectos secundarios derivados del empleo de inmunosupresores, la incidencia es máxima con el empleo de azatioprina y mínima para la ciclosporina A. 8. En dos de los animales las complicaciones observadas pueden etiquetarse, con reservas, como de naturaleza puramente inmunológica, debidas a enfermedad de injerto-contra-huésped. Las causas de muerte más frecuentes en los animales tratados son las complicaciones infecciosas. 9. No todas las complicaciones tienen su origen en el empleo de drogas, sino que incluyen también otros factores: asepsia poco rigurosa, errores en la técnica quirúrgica, etc. aún cuando estas complicaciones pueden agravarse por el empleo de inmunosupresores. 10. Hemos observado dos modalidades de rechazo del homoinjerto: un rechazo acelerado o rápido y un rechazo lento, dependiendo probablemente de la disparidad genética entre donante y receptor. El aspecto y dimensiones del lecho del homoinjerto inmediatamente después del producir el rechazo, depende del tiempo de supervivencia del mismo, de la modalidad del rechazo y, en ocasiones de la droga empleada para demorarle. 11. Las drogas empleadas interfieren el normal proceso de cicatrización de los lechos de homoinjertos rechazados, retrasando su curación. Este efecto es máximo para la azatioprina y mínimo para la ciclosporina A. La cicatrización de los lechos de los homoinjertos rechazados se produce de dos modalidades: reducción concéntrica y reducción asimétrica o lineal, originando una cicatriz puntiforme o lineal respectivamente. La cicatrización de los lechos del homoinjerto y del autoinjerto, en los casos en que este se necrosa y desprende, se realiza en periodos de tiempo ligeramente menores para el lecho del autoinjerto. Este cicatriza generalmente según la modalidad descrita como reducción concéntrica. 12. Autoinjertos: Los Autoinjertos en la rata Wistar, al revés de lo que sucede con los homoinjerto, son bien tolerados, siendo incorporados a su lecho. Sin embargo, en determinadas circunstancias, su evolución puede ser desfavorables y el injerto se necrosa y se desprende.