Método simplificado para el estudio morfológico por microscopía óptica y microscopía electrónica de barrido de actinomicetos halófilos

Abstract

Se propone una técnica simplificada para el estudio, tanto por microscopía óptica como electrónica de barrido, de actinomicetos halófilos, aislados de ambientes hipersalinos del sur de México y de España. Los actinomicetos fueron cultivados en medio sólido para el cultivo de microorganismos halofílicos MH y mantenidos a 37°C durante una semana. Previamente a su incubación, fueron colocados fragmentos de cubre objetos estériles, que se introducían en un ángulo de 45° en el agar del medio. Luego eran retirados y eran prelavados con una solución de sales conteniendo 10% de NaCl y 2% de MgS04 y, en seguida, fijados en una solución con glutaraldehido al 2,5%, luego lavados y deshidratados en una serie de etanol (70 al 100%). A continuación las muestras eran, o bien coloreadas por técnicas de Gram o de Kinyoun para alcohol-ácido resistencia, o procesadas para ser observadas en un microscopio electrónico de barrido JEOL-JSM 6300. Con esta técnica simplificada se pudo observar detalles morfológicos tintoriales de estos microorganismos, así como su bien preservada morfología celular externa al microscopio de barrido, observándose las formas filamentosas con la presencia de sus adornos celulares externos, tales como esporas, y la presencia de unas estructuras cristalinas de diversas formas, arreglos y tamaños.

It is a simplified technique that proposes the morphological studies of Halophilic Actinomycetes isolated from hypersaline environments in Southern Mexico and Spain, by combining light microscopy with scanning electron microscopy. For cultivating the halophilic microorganisms, the Actinomycetes were inoculated onto a solid medium (MH), and incubated at 37ºC for one week. Prior to incubation, fragments of sterile coverslips were introduced at a 45º angle in the agar medium. Later, these coverslip fragments were retrieved and washed in a salt solution containing 10% NaCl and 2% MgSO4. Afterwards they were fixed in a 2.5% glutaraldehyde solution and then washed and dehydrated through an ethanol series (70 to 100%). These samples were stained by either Gram or Kinyoun methodology. Alternatively, some of the coverslip fragments were processed for observation using a Jeol-JSM 6300 scanning electron microscope. Through these simplified techniques, the tinctorial and morphological details were preserved. The cellular morphology was observed by scanning electron microscopy. By these methods, some details of the filamentous organisms were observed including external cellular components such as spores and unusual crystalline structures exhibiting different forms, arrangements and sizes.