Estudio de variantes genéticas asociadas a esofagitis eosinofílica

Abstract

1. Introducción: La EoE es una enfermedad inflamatoria crónica, en cuyo origen existe una alteración de la regulación de la respuesta inmune del huésped frente a la microbiota y a otros antígenos intraluminales (especialmente alergenos alimentarios) en sujetos susceptibles genéticamente, produciéndose alteraciones en la función y regulación del sistema inmune innato y adaptativo, así como una disfunción de la barrera epitelial que daría lugar al proceso inflamatorio y posterior remodelado de este epitelio esofágico. 2. Hipótesis y Objetivos: La hipótesis de este proyecto de investigación es que determinadas variantes de los genes TSLP, TLR3. TLR4, FOXP3 y FLG pueden influir en la susceptibilidad a padecer EoE y repercutir en los distintos fenotipos (modos de expresión clínica) de esta enfermedad. 3. Objetivos: 1. Evaluar la asociación de variantes en los genes TSLP, TLR3, TLR4, FOXP3 y FLG con la susceptibilidad a desarrollar EoE en la población española. 2. Evaluar la asociación de las variantes de los genes TSLP, TLR3, TLR4, FOXP3 y FLG con las comorbilidades alérgicas asociadas a la EoE. 4. Material y Métodos: Pacientes y controles: Se incluyeron un total de 218 pacientes adultos de raza caucásica diagnosticados de EoE, 131 pacientes del área sanitaria del HUVR (Sevilla) y 87 del área sanitaria del Hospital General de Tomelloso (Ciudad Real) y 376 donantes de médula ósea sanos de raza caucásica. Para evitar los efectos de confusión de las asociaciones genéticas investigadas con otras afecciones, se excluyeron pacientes EoE que tenían otras afecciones autoinmunes (es decir, enfermedad celíaca, diabetes mellitus y trastornos tiroideos). Fenotipado de los pacientes: A todos los pacientes se les realizó una entrevista con el objetivo de detectar comorbilidades atópicas (rinitis, asma, dermatitis atópica) y un estudio alergológico, pruebas de punción cutánea (SPT) con un panel de 17 aeroalérgenos y 22 alimentos de origen animal y vegetal, con el objetivo de detectar comorbilidades atópicas (rinitis, asma, dermatitis atópica) y clasificar a los pacientes en dos fenotipos principales (atópicos y no atópicos). Estudio genético: Se seleccionaron 27 polimorfismos de un sólo nucleótido (SNP) en cinco genes candidatos previamente identificados como relevantes para la fisiopatología EoE en base a su función en la respuesta inmune innata (TLR3, TLR4, FOXP3, FLG y TSLP). Se utilizó la base de datos del proyecto HapMap para seleccionar los Tag SNPs (tSNPs) con frecuencia del alelo minoritario (MAF) igual o superior al 0,05 en población CEU, que nos permitieran capturar en cada una de las regiones el 100% de los SNPs con r2>0,8. De acuerdo con las reglas anteriores, se seleccionaron 27 tSNP que nos permitieron capturar 52 SNP. El genotipado se realizó utilizando TaqMan® SNP Genotyping Assays en un LightCycler. Para verificar la reproducibilidad y precisión inter-experimental, el 8% de las muestras se duplicaron. Se impuso en el análisis una tasa de control de calidad de muestra del 90% y una tasa de éxito de genotipado de SNP del 90%. 5. Resultados: Se encontraron diferencias significativas en las frecuencias alélicas y haplotípicas en 5 tSNP ubicados en el locus TSLP y un tSNP ubicado en el locus TLR3, demostrándose una asociación estadística positiva con EoE. Se analizaron las interacciones entre los loci TLR3 y TSLP. Los individuos TLR3+/TSLP– y TLR3–/TSLP+ mostraron una susceptibilidad significativamente reducida a EoE en comparación con los individuos TLR3–/TSLP– (OR=0,66, p=0,036 y OR=0,23, p=0,00014, respectivamente). Asimismo, los individuos TLR3+/TSLP+ mostraron una menor susceptibilidad de desarrollar EoE (OR=0.16, p=0.0001). Sin embargo, la ganancia de interacción atribuida a la combinación de ambos genes fue negativa (IG= –4,52%), lo que indica redundancia o efecto independiente. Además, se encontró que el locus TLR3 estaba asociado con la sensibilización a aeroalérgenos y alimentos en pacientes con EoE (OR=9,67, pc=0,025 y OR=0,53, pc=0,048, respectivamente). No se encontraron diferencias significativas en el resto de los genes estudiados (TLR4, FOXP3 y filagrina). 6. Conclusiones: - Se describe por primera vez en la literatura una asociación del gen TLR3 con la susceptibilidad a padecer EoE. - Demostramos, también por primera vez la replicación de la asociación del gen TSLP con susceptibilidad a la EoE, en una población europea. - En el estudio de interacción de ambos genes (TLR3y TLSP) demostramos que las interacciones de ambos genes tienen redundancia o efectos independientes en la susceptibilidad de desarrollar EoE. - Describimos por primera vez en la literatura, que variantes en el gen TLR3 están estadísticamente asociadas con sensibilización a los aeroalérgenos y a los alimentos, sugiriendo la posibilidad de que estas variantes puedan actuar como marcadores de los diferentes endotipos de la EoE.