Transporte de Glicil-Sarcosina por células aisladas del epitelio intestinal de pollo

Abstract

Se ha realizado un estudio sobre el transporte de dipeptidos en enterocitos de pollo y sus propiedades se han comparado con las del transporte de azucares. Los resultados muestran que: 1) Las células aisladas fueron capaces de acumular glicil-sarcosina (GLY-SAR) contra un gradiente de concentración. Esta captación fue máxima a pH 6,0 e inhibida por la eliminación del Na+ del medio de incubación y por la ouabaina. 2) La captación de GLY-SAR no fue afectada por la metionina y fue inhibida competitivamente por la carnosina, con una Ki de 12 mm. 3) En el transporte de GLY-SAR existen al menos dos componentes: uno saturable y otro no saturable. La constante aparente de transporte del componente saturable fue 8mm y la velocidad máxima 31 nmol/mg proteína/minuto. 4) El ionoforo de H+, FCCP, inhibió tanto la entrada de 3-omg como la de GLY-SAR. 5) El amiloride, conocido inhibidor del sistema de intercambio Na+-H+, estimulo la captación de 3-OMG e inhibió la de GLY-SAR, siendo su efecto mayor a pH 7,4. 6) La monensina revertió el efecto del amiloride sobre ambos sustratos. 7) En células deplecionadas de ATP, la acumulación transitoria de GLY-SAR fue máxima al imponer un gradiente de H+ y un potencial de membrana. En resumen, el transporte de GLY-SAR depende del gradiente electroquímico de H+, siendo su dependencia del Na+ indirecta, por su efecto sobre la salida de H+. También estudiamos el transporte de GLY-SAR en células aisladas de ciego proximal y de recto, observando que en estos tramos intestinales también existe un sistema de transporte especifico para GLY-SAR, con las mismas características observadas en el yeyuno, ya que fue inhibido al eliminar el Na+ del medio de incubación, estimulado a pH 6,0 e inhibido por el amiloride. Dada la importancia de la absorción de dipéptidos en la nutrición proteica y la disparidad de opiniones respecto al gradiente iónico responsable de dicha absorción nos pareció interesante estudiar el transporte del dipéptido glicil-sarcosina en células aisladas de intestino de pollo, de acuerdo con el siguiente plan de trabajo: 1. Evaluación del grado de hidrólisis de Gly-Sar. Aunque hemos elegido este dipéptido por ser muy resistente a la hidrólisis por las peptidasas intestinales, estudiaremos en primer lugar la posible hidrólisis tanto intracelular como extrecelular de dicho dipéptido. 2. Estudio y caracterización del sistema de transporte de Gly-Sar en enterocitos de pollo. Para ello se estudiará la cinética de transporte, la inhibición por sustratos análogos y la influencia de distintos gradientes iónicos. 3. Flujos de salida de Na desde enterocitos precargados con Na22. Con el fin de conocer si la entrada de Gly-Sar está o no acoplada al Na+. 4. Entrada de Gly-Sar en enterocitos deplecionados de ATP. Con el objeto de estudiar el papel del gradiente de Na+, de H+ y del potencial de membrana. 5. Transporte de Gly-Sar por células aisladas de ciego proximal y de recto. En la mayoría de los experimentos de transporte se estudiará paralelamente la captación de 3-OMG, con el fin de poder comparar las características del transportador de Gly-Sar con las ya conocidas del transportador de azúcar.