Acción del péptido intestinal vasoactivo a través de su receptor sobre la actividad adenilciclasa y proteinquinasa en células mononucleares sanguíneas humanas

Abstract

El péptido intestinal vasoactivo (VIP) está considerado como un neurotransmisor de acción local. Es por esto que al VIP que se encuentra circulando libremente por el plasma, no se le ha dado más valor que el de ser un resto que ha “rebosado” del espacio sináptico. Por otro lado, el mecanismo de acción del péptido sólo se ha estudiado en diversas especies animales, siendo muy difícil extender su estudio al hombre debido a la complejidad que representa la obtención del material de trabajo. Con estas ideas básicas, se plantea el objetivo del presente trabajo desde una doble vertiente: 1. Estudiar un modelo celular no inervado capaz de reconocer al péptido y dar de, este modo, una posible explicación fisiológica a la presencia de VIP circulante en plasma. 2. Utilizar, al mismo tiempo, un modelo celular humano y que sea de muy fácil acceso. Para ello se utiliza como modelo células mononucleares de sangre periférica humana. El medio de estudiar el mecanismo de acción del VIP es a través de una batería de experiencias que incluye: a) Estudio del receptor de membrana. b) Activación del sistema adenil ciclasa. c) Activación de proteínas quinasas. CONCLUSIONES 1. La unión del 125I-VIP a células mononucleares de sangre periférica humana depende de la concentración celular, temperatura, tiempo y pH de incubación. En el presente trabajo las condiciones óptimas de incubación se consiguen a 15ºC, pH 7,5 y concentración celular de 1,5 x 106 cel/ml, en las que la degradación del trazador y del receptor se minimizan, consiguiendo una unión estable y duradera. 2. La unión del trazador al receptor es reversible, teniendo lugar la disociación según una cinética de segundo orden, que indica la existencia de las poblaciones de receptores, que tienen respectivamente 20 y 90 min de tiempo de media disociación. 3. El VIP nativo compite con el trazador a concentraciones del mismo orden de las fisiológicas (3 x 10-11M), siendo la constante de disociación global de 0,4 x 10-9 M VIP. La representación de Scatchard permite distinguir dos tipos de receptores: uno de alta afinidad (Kd = 0,14 x 10-9m) y baja capacidad de unión (8 fmol/106 cel) y, otro, de baja afinidad (80 x 10-9M) y mayor capacidad de unión (800 fmol/106 cel). 4. El receptor de VIP es específico para él. De otros péptidos utilizados solo la secretina compite con el trazador, pero con una afinidad 400 veces menor. 5. El VIP también estimula la producción de AMPc en células mononucleares, proporcionalmente a la concentración celular y dependiendo del tiempo, temperatura y pH de incubación. En el presente trabajo las condiciones óptimas se consiguen a una concentración celular de 0,5 x 106 cel/mel, a 15ºC y pH 7,5, en las que se consigue una producción de AMPc estable y duradera, 6. La producción de AMPc depende de la concentración de VIP. Se produce un aumento significativo sobre los niveles basales a concentraciones de VIP tan bajas como 3 x 10-11 M. La activación máxima se produce a 10-9 M de un péptido, y el 50% de activación se consigue a 0,1 x 10-9 M. 7. La producción de AMPc a través del receptor de Vip es específica para este péptido. Solo la secretina podía aumentar la producción de AMPc pero con una potencia 7.000 veces menor. 8. El VIP produce una activación de proteínas quinasas en células mononucleares que depende del tiempo de incubación, obteniéndose una actividad máxima a los 15 min. 9. La activación de proteínas quinasas depende de la concentración del péptido, obteniéndose una activación significativa a concentración tan baja como 3 x 10-11 M. la máxima activación se consigue a 10-9M, y el 50% a 0,06 x 10-9M. 10. En el estudio de las diferentes subpoblaciones celulares presentes en la preparación de mononucleares, solo los enriquecidos en linfocitos B ligaban 125I-VIP y aumentaban la producción de AMPc en presencia del péptido. Las preparaciones enriquecidas en linfocitos T, monocitos y los hematíes eran completamente incapaces de realizar ninguna de las dos posibilidades. 11. En resumen, existe un sistema receptor efector que reconoce concentraciones plasmáticas fisiológicas de VIP en una de las estirpes celulares de la preparación de mononucleares sanguíneas, como son los linfocitos B.