Genética de la asimilación del nitrato en "Azotobacter vinelandii"

Abstract

Los resultados obtenidos en esta tesis se pueden resumir en los siguientes puntos: 1) Las enzimas nitrato reductasa y nitrito reductasa están reguladas genéticamente ... siendo inducibles por nitrato y en menor medida por nitrito y reprimibles por amonio. 2) La actividad nitrato reductasa es mayor en células cultivadas con una fuerte aireación que con agitación. 3) El cambio de las células de un medio agotado o semiagotado a uno de refresco produce una subida inespecífica de ambas reductasas. 4) Las enzimas nitrato y nitrito reductasa son muy estables manteniéndose activas incluso en ausencia de los sustratos y presencia de amonio. 5) El amonio reprime más eficientemente a ambas reductasas cuando la fuente de carbono es rica siendo necesaria una menor concentración de amonio y alcanzándose niveles más bajos de actividad cuando la fuente de carbono es pobre que cuando es rica. 6) Existe algún gen cuyo producto modula la represión por amonio de la nitrato reductasa y la nitrito reductasa haciéndola menos eficiente cuando las células están en presencia de una buena fuente de carbono. La perdida por mutación de esta función hace que Azotobacter vinelandii reprima siempre a ambas reductasas como si estuviera en presencia de una fuente de carbono pobre. 7) El producto del gen ntrC es necesario para la expresión de la nitrato reductasa y la nitrito reductasa. 8) La nitrato reductasa y la nitrito reductasa están correguladas y sus genes próximos en el cromosoma. Estos hechos unido a la existencia de mutantes presuntamente polares nos llevan a proponer la existencia de un operon que incluya a los genes estructurales de ambas enzimas.El objeto de esta Tesis ha sido estudiar la genética de la asimilación de nitrato en la bacteria Azotobacter vinelandii. Se han abordado los siguientes puntos:1) Estudio fisiológico de la asimilación de nitrato en estirpes silvestres.2) Obtención de una amplia colección de mutantes afectados en la asimilación de nitrato.3) Clasificación de dichos mutantes en distintos grupos atendiendo a diferentes fenotipos y a la complementación con cósmicos que llevas genes reguladores ya descritos.4) Caracterización fisiológica de los distintos grupos de mutantes.5) Construcción de una genoteca y complementación con esta de los mutantes obtenidos.