Gosálvez Berenguer, JaimeSánchez Martín, Fernando2025-01-152025-01-152024-10-30Dorado Silva, M. (2024). El fluido folicular y las células del cúmulo como moduladores de la calidad de los gametos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.https://hdl.handle.net/11441/166696Las Técnicas de Reproducción Asistida (TRA) proporcionan ayuda a las parejas para superar los problemas que en cada caso les impiden conseguir el embarazo de manera natural. En el laboratorio, y con el fin de mejorar los resultados reproductivos, se realiza una estimulación hormonal para inducir la producción de varios óvulos a la vez para poder trabajar en el laboratorio de fecundación in vitro. La punción folicular consiste en aspirar el líquido de la cavidad antral del folículo, donde se encuentra el óvulo. Este líquido llamado “fluido folicular” (FF) se trata en el laboratorio donde se localizan y aíslan los ovocitos. Los ovocitos recuperados tras la punción folicular están rodeados de células de la granulosa formando un cúmulo(CCs). Durante la utilización de TRA es muy frecuente obtener múltiples embriones que son viables para la transferencia. Por esta razón, es muy importante poder evaluar la calidad de los ovocitos que actualmente es muy limitada, para así establecer correlaciones con la calidad embrionaria y sobre todo con el logro final de niños nacidos vivos. En general, la evaluación morfológica visual, es la herramienta disponible más utilizada para la selección de embriones previa a su transferencia. Esta técnica es la que se utiliza de forma rutinaria para identificar cuál de los embriones reviste el mayor potencial para establecer un embarazo. El FF y las CCs, en la práctica clínica diaria, son desechados. Por ello y por la estrecha relación que tienen con el ovocito, los hacen candidatos a estudiarlos porque pueden ser representativos del estado fisiológico del ovocito. El daño en el ADN es un hecho muy común al que todas las células están expuestas en múltiples procesos durante su vida útil. Por tanto, el daño que presenten estas CCs puede inducir a una reducción de las tasas de fertilización y la posibilidad de embarazo dado que se genera una pérdida de funcionalidad en la relación esperada entre las CCs y el ovocito. En nuestro estudio encontramos diferencias significativas en la fragmentación del ADN de ovocitos no fertilizado (CCDFI) y fertilizados de ovocitos y entre el CCDFI de los embriones que fueron descartados y los que se desarrollaron aptos para transferencia o criopreservación. Por otro lado, la caracterización del perfil transcriptómico en CCs es un procedimiento no invasivo, se han propuesto revisar las expresiones diferenciales de ARNm de varias proteínas en CCs como potenciales predictores de la competencia ovocitaria. En nuestro trabajo, encontramos que la sobreexpresión del gen GPX3 puede ser un potencial marcador de mal pronóstico de implantación. La presencia de FF en el momento y lugar de la fertilización sugiere que también puede desempeñar un papel importante en lo que respecta a la fisiología de los espermatozoides (capacitación) en la preparación para la reacción de acrosoma y la fertilización. Existen evidencias que muestran que el daño en el DNA en células somáticas o en el mismo espermatozoide, afectan a la viabilidad celular y a los resultados reproductivos. El mecanismo por el cual el FF ejerce sus efectos beneficiosos sobre la preservación de la integridad del ADN espermático es poco conocido, pero parece que es capaz mitigar el estrés oxidativo, que es una de las principales causas del daño del ADN espermático. Hemos valorado la capacidad prooxidante y antioxidante del FF. Por otra parte, las DNasas del plasma seminal parecen causar daño al ADN espermático. En nuestros estudios hemos demostrado que el FF es capaz de inhibir la actividad de las DNasas del plasma seminal cuando coincubamos FF y plasma seminal. Finalmente, incubamos ADN genómico con FF y no tuvo efectos sobre su integridad, por tanto, parece que el FF carece o tiene inhibida la actividad de la DNAsa.application/pdf167 p.spaAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internationalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccess