Miranda Vizuete, AntonioCabello Pardos, JuanColino Lage, Hildegard2025-06-242025-06-242025-03-14Colino Lage, H. (2025). Estudio de la regulación de la dinámica de localización subcelular de HLH-30: evidencia de un mecanismo dependiente de redox. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.https://hdl.handle.net/11441/174617Los factores de transcripción TFEB y TFE3 son los principales reguladores de la inducción de la autofagia y la biogénesis lisosomal en mamíferos. En condiciones de crecimiento basal, la fosforilación de un residuo de serina clave, S211 en TFEB y S321 en TFE3, por la quinasa mTORC1, permite la interacción física con las proteínas 14-3-3, dando como resultado su secuestro en el citoplasma. En situaciones de estrés, la desfosforilación de TFEB/TFE3 altera la unión a las 14-3-3, permitiendo la translocación nuclear de los factores de transcripción y la inducción de la expresión de sus genes diana. En Caenorhabditis elegans HLH-30 es el ortólogo de TFEB/TFE3, y, al igual que lo descrito en mamíferos, muestra una localización citoplasmática en condiciones basales, translocándose al núcleo en situaciones de estrés para dar lugar a la activación de la transcripción. Sin embargo, a pesar de lo mucho que se conoce sobre la regulación de TFEB/TFE3, la modulación de la dinámica subcelular y la transactivación de HLH-30 aún no se han estudiado. En este trabajo hemos demostrado que la retención citoplasmática de HLH-30 depende de su residuo de serina de la posición 201, de tal forma que, cuando este residuo está mutado a un residuo de alanina no fosforilable, HLH-30 muestra una localización nuclear constitutiva. A su vez, hemos identificado las proteínas FTT-2 y PAR-5, ortólogos en C. elegans de las 14-3-3 de mamíferos, como mediadores de la retención citoplasmática de HLH-30 en condiciones basales. En cuanto a la translocación nuclear, a pesar de que se ha descrito que DAF-16 y HLH-30, ambos factores de transcripción que regulan la respuesta a estrés, se asocian para formar un complejo y cooperar en la activación de varias respuestas del organismo, demostramos que DAF-16 no es necesario para la translocación nuclear de HLH-30 en situación de estrés. Por otra parte, hemos podido determinar que la importina IMB-2, que asiste la entrada al núcleo de DAF-16, también participa en la translocación nuclear de HLH-30. Una vez en el núcleo, HLH-30 regula la autofagia, la resistencia a diferentes tipos de estrés y modula la longevidad del nematodo C. elegans. No obstante, nuestros datos indican que, la localización nuclear de HLH-30 por sí sola no es suficiente para desencadenar la respuesta transcripcional. Por último, estudios previos muestran que estreses como el ayuno o la infección por Staphylococcus aureus, entre otros, inducen una rápida acumulación nuclear de HLH-30, la cual es mantenida mientras el estrés persiste, a excepción de la exposición a maleato de dietilo donde HLH-30 inicialmente se transloca al núcleo, pero pasadas 3 horas del inicio del tratamiento, presenta una localización mayoritariamente citoplasmática. El maleato de dietilo es un agente alquilante que causa estrés oxidativo al disminuir los niveles de glutatión celular, lo cual indica que HLH-30 presenta una regulación redox. Este tipo de regulación ha sido descrita para otros factores de transcripción, pero no antes para HLH-30. En este trabajo hemos esclarecido que el efecto transitorio en la localización subcelular de HLH-30, observado por la exposición a maleato de dietilo, es debido a la capacidad del compuesto para disminuir el glutatión disponible en el medio y no por un efecto general de la alteración de la homeostasis redox. Además, hemos identificado la cisteína de la posición 191 de FTT-2, regulador de la retención citoplasmática de HLH-30, como principal residuo regulador de la respuesta redox-dependiente del maleato de dietilo. En resumen, este trabajo proporciona una primera descripción de la dinámica de localización subcelular de HLH-30 en C. elegans, así como su regulación dependiente de mecanismos redox.application/pdf179 p.spaAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internationalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccess