Tesis Doctoral
Caracterización fenotípica y terapia génica del ratón Prpf31A216P/+
Autor/es | Aramburu del Boz, Ana María |
Director | Díaz Corrales, Francisco Javier
Montero de Espinosa Escoriaza, Ignacio Bhattacharya, Shomi S. |
Departamento | Universidad de Sevilla. Departamento de Medicina |
Fecha de publicación | 2015-12-10 |
Fecha de depósito | 2016-04-22 |
Resumen | El término Retinosis Pigmentaria (RP) engloba a un grupo de enfermedades hereditarias de la retina, caracterizadas por una degeneración progresiva de los fotorreceptores, que comienza con la muerte celular de los bastones ... El término Retinosis Pigmentaria (RP) engloba a un grupo de enfermedades hereditarias de la retina, caracterizadas por una degeneración progresiva de los fotorreceptores, que comienza con la muerte celular de los bastones seguidos de los conos, resultando una discapacidad visual que puede llegar a ser absoluta. Es una condición muy heterogénea, tanto fenotípica como genéticamente. En conjunto, este grupo de trastornos de la retina, representa la forma hereditaria más común de discapacidad visual en el hombre, con una prevalencia estimada de 1 de cada 3.000 a 1 de cada 5.000 personas en el mundo. Para el estudio de la patología molecular de la enfermedad y la formulación de futuras terapias, se han sido diseñados modelos de ratón apropiados. La estrategia utilizada para la generación de mutantes PRPF31 fue la utilización de un constructo recombinante por mutagénesis dirigida que podría dar lugar a dos tipos de modelos de ratón. El primero es un modelo de mutación puntual que imita el cambio de patógenos A216P identificado en una de las familias con RP11. La homología entre el ratón y las proteínas PRPF31 humanas es del 99% y el aminoácido en posición 216 está altamente conservado en todas las especie. El vector que porta la mutación puntual en el exón 7 (A216P) fue desarrollado de tal manera que dos sitios loxP flanquean el exón 7, lo que permite la eliminación de este fragmento con la recombinasa Cre. El modelo de ratón knock-in ya ha sido analizado hasta la edad de 12 meses. Hasta el momento se han observado algunos cambios en la histología de la retina como vacuolización y acúmulo de material amorfo entre el epitelio pigmetario y la membrana de Bruch. Realizamos terapia génica en el ratón Prpf31A216P/+ knock-in mediante inyección subretinana con el vector AAV2 portando el trasgen PRPF31. Realizamos seguimiento de los animales durante 6 meses y logramos una adecuada expresión del gen a nivel del epitelio pigmentario de los ratones. Sin embargo no observamos mejoría de la visión espacial ni recuperación de la amplitud de la onda c. En estudios histológicos visualizamos infiltrados de células similares a macrófagos en el sitio de la inyección, donde se observó que la capa de fotorreceptores presentaba un aspecto atrófico con pocas capas de núcleos en la capa nuclear externa de la retina. Sin embargo con el uso de vectores no virales se observó recuperación de la visión espacial y disminución de la atrofia de la retina en el seguimiento a un mes. Esto es una prueba de concepto de que la terapia génica utilizando PRPF31 podría tener un efecto terapéutico en el manejo de esta distrofia retiniana. |
Cita | Aramburu del Boz, A.M. (2015). Caracterización fenotípica y terapia génica del ratón Prpf31A216P/+. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla. |
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