2024-03-28T09:32:32Zhttps://idus.us.es/oai/requestoai:idus.us.es:11441/903772019-11-20T19:05:58Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-11-20T19:05:58Z
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1987-10-15
García Galera, E. (1987). Efecto de la tiroidectomía y administración de distintas dosis de L-T4 sobre actividades ATPasa y fosfodiesterasa de cerebro, hígado y adenohipofisis en rata. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90377
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Efecto de la tiroidectomía y administración de distintas dosis de L-T4 sobre actividades ATPasa y fosfodiesterasa de cerebro, hígado y adenohipofisis en rata
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2023-01-30T11:55:20Z
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2022-11-18
Alonso Bellido, I.M. (2022). Papeles no apoptóticos de las caspasas en la neurogénesis hipocampal y el desarrollo embrionario de la microglía. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/142112
Debido al aumento de la esperanza de vida, existe cada vez una mayor prevalencia de enfermedades neurodegerativas que, junto con su frecuente etiología desconocida, puede llegar a ser un problema socioeconómico y sanitario de alta importancia. Por ello, todos los esfuerzos actuales se están centrando en la búsqueda de dianas biológicas que permita, al menos, mejorar la calidad de vida de los pacientes y, evitar el avance de estas enfermedades. Cada vez son más las evidencias de la implicación de la activación sostenida de la microglía, las células inmunes del cerebro, en el desarrollo de estas patologías neurodegenerativas.
Por todo esto, nuestro grupo, además de estudiar mecanismos de control de la función microglial, tiene también como objetivo el estudio de las funciones más allá de la apoptosis de las Caspasas, clásicamente asociadas a esta función de muerte. Entre las funciones no apoptóticas, se ha identificado el papel de estas proteínas como moduladoras de la función microglial, y con ello, una posible herramienta de control para regular la activación de la microglía.
Con estos precedentes, el objetivo principal de este estudio fue investigar dos modelos murinos carentes de Caspasa 8 y de Caspasa 3, con el planteamiento específico de estudiar qué papel jugaban dichas proteín cinasas en el desarrollo embrionario de la microglía y en la neurogénesis hipocampal adulta, respectivamente.
El desarrollo embrionario es un periodo de potente recambio celular, en el que, para garantizar la correcta homeostasis, no solo es necesaria la formación de nuevas células y conexiones, sino también mantener activas las vías de muerte. Es ahí, donde entra en juego la Caspasa 8, no solo en el inicio de la vía extrínseca de la apoptosis si no también en la regulación de la necroptosis, otra vía de muerte reconocida fisiológica. Más allá de los papeles pro-apoptóticos de la Caspasa 8, queda claro su función pro-supervivencia debido a que su ausencia genera, de media, la muerte en la etapa embrionaria E10.5. Tras corroborar las evidencias publicadas en los sujetos carentes de Caspasa 8, procedimos a estudiar el estado de la microglía, obteniendo un descenso significativo de los niveles de microglía tanto homeostática como reactiva a E13.5. Los datos mostrados hacen pensar que no es debido a un problema de migración desde el saco vitelino, sino que todo apunta a un problema en la supervivencia y proliferación, no solo de la microglía sino de las neuronas.
La neurogénesis hipocampal adulta (NHA) es un proceso implicado en numerosas enfermedades neurodegenerativas. Muchos investigadores han descrito la microglía como un componente clave en la regulación de la formación y migración de nuevas neuronas a lo largo de la corriente migratoria rostral. El segundo objetivo principal de este trabajo es identificar el papel de la Caspasa 3 en las funciones microgliales relacionadas con la neurogénesis.
Para abordar este estudio, se utilizaron ratones mutantes condicionales de Caspasa 3 en la línea celular de microglía. Con esta herramienta, queríamos dilucidar el papel de esta proteína en la función microglial en el hipocampo, la principal región donde tiene lugar la neurogénesis adulta. Tras la supresión de la Caspasa 3 en la microglía, los ratones mutantes mostraron una reducción de la microglía en el hipocampo, mostrando una morfología menos activa. Mediante el análisis de imágenes de alta resolución, también observamos una reducción de la capacidad fagocítica de la microglía carente de Caspasa 3. Además, encontramos una reducción de las neuronas neurogénicas en los ratones knockout de Caspasa 3. El análisis conductual mediante pruebas de reconocimiento de objetos y de laberinto en Y mostró una alteración de la memoria y el aprendizaje en ausencia de la Caspasa 3 microglial. En conjunto, estos resultados mostraron el papel esencial de la Caspasa 3 en la función microglial y destacan el papel relevante de este fenotipo microglial específico en el mantenimiento de la NHA en el hipocampo.
Por todo ello, podemos seguir aportando nuevas pruebas de las funciones más allá de la apoptosis de estas proteín quinasas y con ello, esperanzadoras herramientas que nos permitan controlar la activación microglial y las consecuencias de las enfermedades a las que se ha ido asociando.
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Papeles no apoptóticos de las caspasas en la neurogénesis hipocampal y el desarrollo embrionario de la microglía
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oai:idus.us.es:11441/1072012022-01-24T06:50:06Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2021-04-16T09:08:04Z
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2021-01-20
Muñoz Castro, C. (2021). Implicación de la disfunción glial en la evolución de la patología en pacientes de Alzheimer. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/107201
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un proceso neurodegenerativo que cursa con un deterioro
progresivo de las funciones cognitivas, llegando a ser una enfermedad altamente incapacitante.
Actualmente, uno de los principales retos biomédicos a los que se enfrenta nuestra sociedad es
el desarrollo de terapias que frenen o, al menos, retrasen la progresión de esta patología. Los
continuos fracasos terapéuticos, basados principalmente en la hipótesis de la cascada amiloide,
han promovido el desarrollo de hipótesis alternativas en las que la respuesta inmune, tanto
central (mediada por microglía y astrocitos) como periférica, desempeña un papel fundamental
en el desarrollo de la enfermedad. En esta línea, planteamos definir la firma molecular de
microglía y astrocitos en pacientes de Alzheimer, así como caracterizar su heterogeneidad
morfológica, regional y funcional, y, además, determinar si se produce infiltración de células
inmunes periféricas en el sistema nervioso central de dichos pacientes. Para ello, hemos
empleado técnicas bioquímicas, transcriptómicas y de imagen en muestras post mortem de
hipocampo y corteza frontal de pacientes de Alzheimer, así como estudios in vitro y en modelos
animales con patologías amiloide y neurofibrilar.
Nuestros resultados en humanos reflejan que, en la corteza frontal se produce una acumulación
de Aβ más severa y temprana que en el hipocampo. En ambas regiones existe una degeneración
importante de neuronas PV+, probablemente mediada por la patología Tau y el sistema del
complemento. También observamos que la respuesta microglial es distinta en las dos regiones
estudiadas; en la corteza frontal de pacientes de Alzheimer no se produce, como en el
hipocampo, una disminución en la población microglial, pero sí una alteración hacia un fenotipo
activo que podría estar mediado por formas de Aβ. Con relación a los astrocitos, proponemos
que las especies solubles de Aβ y/o Tau participan en el desarrollo de un fenotipo disfuncional,
que se manifiesta con un perfil transcripcional reactivo e hipometabólico. Como consecuencia,
la protección astroglial es menor, y se activa la respuesta del complemento, reforzando la
hipótesis de que la disfunción astroglial podría estar implicada en las deficiencias sinápticas y la
neurodegeneración asociadas a la EA. Para profundizar en la firma molecular de microglía y
astrocitos en la EA, hemos desarrollado una novedosa aproximación experimental que nos ha
permitido estudiar, por primera vez, hasta 17 marcadores gliales diferentes en una misma
sección de tejido de pacientes de Alzheimer, de forma cuantitativa, con elevada resolución, y sin
perder la celularidad, morfología y distribución espacial. Por otra parte, demostramos que en el
parénquima cerebral de pacientes de Alzheimer se produce infiltración de CDM. Esta infiltración
está asociada a una patología más severa, y parece ser consecuencia de diversos factores, entre
los que destacamos la alteración en la función glial y vascular, el reclutamiento a través del eje
CCL2/CCR2 y la transmigración a través de la BHE.
En conclusión, proponemos que en pacientes de EA se produce una importante disfunción glial,
caracterizada por un aumento en la respuesta reactiva y neurotóxica, pero sobre todo por una
disminución en las funciones homeostáticas y protectoras. Este hecho podría facilitar junto a
otros factores, la infiltración de CDM. Por tanto, postulamos que la disfunción glial es un
mecanismo patogénico fundamental en la EA, y una potencial herramienta terapéutica.
Alzheimer’s disease (AD) is a neurodegenerative process which gradually leads to a decline in
cognitive functions, becoming a highly disabling disease. Currently, one of the main biological
challenges our society is facing is the development of new treatments, to stop, or, at least, slow
this pathology progression. The continuous therapeutic failures, based mainly on the amyloid
hypothesis, have promoted the development of an alternative hypothesis in which the immune
response, central (mediated by microglia and astrocytes) and peripheral, plays a pivotal role in
the development of the disease. In this sense, we aim to define microglia and astrocytes´
molecular signature and characterize their morphological, regional and functional heterogeneity
in AD patients, and, furthermore, to determine if there is infiltration of peripheral immune cells
in the central nervous system of these patients. In order to acknowledge this, we have used
biochemical, transcriptomic and imaging techniques in postmortem hippocampus and frontal
cortex samples of AD patients, in vitro studies and Aβ and Tau transgenic models.
Our results in humans demonstrate an earlier and more severe Aβ accumulation in frontal cortex
than in hippocampal areas. Both regions show significant degeneration of PV+ neurons, which
could be mediated by Tau pathology and the complement system. Moreover, we observed that
the microglial phenotype depends on the brain region we study. In the frontal cortex of AD
patients, unlike the hippocampus, there is no decrease in the microglial population, which is
shifted towards an active phenotype, that could be mediated by Aβ species. In relation to
astrocytes, we propose that soluble forms of Aβ and/or Tau participate in the development of a
dysfunctional phenotype, manifested by a reactive and hypometabolic transcriptional profile.
Consequently, astrocyte protection is milder and the complement system cascade is activated,
thus reinforcing the hypothesis that astrocyte dysfunction may be implicated in synaptic
deficiencies and neurodegeneration associated with AD. To delve into the molecular signature
of microglia and astrocytes in AD, we have developed a novel experimental approach that allows
us, for the first time, to study quantitatively and with high resolution, up to 17 different astrocyte
markers, in the same histological section of AD patients without losing cellularity, morphology
and spatial distribution. On the other hand, there is infiltration of monocytes-derived cells
(MDC) in AD brain parenchyma. This MDC entry is clearly associated with a more severe
pathology and occurs because of several factors, among which we can highlight vascular and
glial function alteration, recruitment through the CCL2 / CCR2 axis and transmigration through
the BBB.
In conclusion, we propose that AD courses with a significant glial dysfunction, characterized by
an increase in the reactive and neurotoxic response, but mainly by a decrease in homeostatic
and protective functions. This dual role could facilitate and allow, in the presence of other
factors, the infiltration of MDC. Thus, we postulate glial dysfunction as a fundamental
pathogenic mechanism in AD and a potential therapeutic tool.
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Implicación de la disfunción glial en la evolución de la patología en pacientes de Alzheimer
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oai:idus.us.es:11441/1152542024-02-14T13:30:49Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2021-07-06T12:13:23Z
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2021-04-30
Romero Molina, C. (2021). Variaciones de la respuesta microglial según el contexto patológico en la Enfermedad de Alzheimer. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/115254
La Enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo progresivo e irreversible que conlleva un deterioro de las funciones cognitivas, afectando a 35 mill de personas a nivel mundial. Las lesiones histopatológicas principales son las placas seniles (placas de Abeta) y los ovillos neurofibrilares (agregaciones intracelulares de Tau). Además, se registra pérdida neuronal y un proceso neuroinflamatorio mediado por las células gliales (astrocitos y microglía). Los continuos fracasos terapéuticos, principalmente enfocados en la hipótesis de la cascada amiloide, señalan la necesidad de identificar nuevas dianas terapéuticas. Recientes análisis genéticos han demostrado que ciertos polimorfismos en genes implicados en la función microglial aumentan el riesgo de padecer la EA, resaltando la importancia de la neuroinflamación en la patología. Dado que el papel de la microglía en la progresión de la enfermedad no se conoce con exactitud, el objetivo de este trabajo es caracterizar la variabilidad fenotípica y funcional de la microglía en la EA. Para ello, hemos utilizado modelos celulares y animales y muestras de pacientes de Alzheimer. En los diferentes ensayos, hemos empleado técnicas bioquímicas, transcriptómicas, metabolómicas, de imagen y de citometría de flujo.
Nuestros resultados muestran que, en presencia de patología Abeta, la microglía se activa y rodea las placas amiloides. Sin embargo, en presencia de patología Tau, la microglía adquiere bien un fenotipo degenerativo (regiones hipocampales del cerebro de pacientes y ensayos in vitro con fracciones solubles procedentes de animales ThyTAU22), o bien un fenotipo reactivo (modelo TAU P301S), que depende del grado de fosforilación y agregación de las formas de Tau. Centrándonos en la microglía activa, hemos identificado que adquiere un fenotipo asociado a neurodegeneración y un metabolismo oxidativo, mediado por TREM2. Este metabolismo aerobio es esencial para sustentar una activación microglial crónica, y se altera por una disminución de la disponibilidad de oxígeno o pérdida de función de TREM2. En modelos murinos, la hipoxia impide la activación microglial, lo que implica un empeoramiento de la patología Abeta, pero una mejora de la tauopatía, sugiriendo que la microglía podría presentar un papel dual. Sin embargo, en muestras de enfermos de Alzheimer, la hipoxia conlleva una disfunción microglial que incrementa la patología neuronal, otorgando a estas células un papel más beneficioso que perjudicial. Con el objetivo de estudiar la progresión de la enfermedad en un contexto de disfunción microglial, hemos desarrollado un modelo murino doble transgénico que nos permite realizar una ablación reversible de células microgliales. Hemos realizado una caracterización inicial del modelo, evaluando la eficacia de depleción, la posterior capacidad de repoblación y la activación microglial tras periodos agudos y crónicos de depleción. La elevada capacidad de recambio microglial murina nos lleva a cuestionarnos su validez como un modelo que mimetice la disfunción microglial en humanos, pero permite valorar la progresión de la patología de Alzheimer en un contexto de renovación microglial.
Por tanto, proponemos que el metabolismo oxidativo microglial, mediado por TREM2, es fundamental para la activación crónica de estas células. En pacientes de Alzheimer, distintas alteraciones génicas y/o problemas vasculares podrían comprometer la respuesta microglial y originar un fenotipo distrófico. En conclusión, en cerebros de pacientes de Alzheimer podría existir una elevada variabilidad en la respuesta microglial dependiendo del grado de desarrollo de las patologías Abeta y Tau y de otras comorbilidades de los pacientes. Todo ello debe ser tenido en cuenta a la hora de proponer nuevas dianas terapéuticas más eficaces.
Alzheimer’s Disease (AD) is an irreversible neurodegenerative disorder which leads to cognitive impairment and behavioural alterations, and affects 35 mill people worldwide. It is characterized by an accumulation of amyloid plaques (mainly formed by Abeta) and neurofibrillary tangles (aggregates of Tau protein), by a neuronal loss and by neuroinflammation. Due to the treatment failure registered in the last decades, new therapeutic targets need to be proposed. Recent genetic analysis have associated certain polymorphisms in genes related to microglial function to a higher risk of developing AD, which has highlighted the importance of neuroinflammation in this disease. However, microglial role in the progression of AD is far from been elucidated. Then, our objective is to characterize microglial phenotype and function in AD. To this aim, we have employed cellular and mouse models and human AD samples. We have performed biochemistry, transcriptomic, metabolomic, imaging and flow cytometry techniques.
Our results show that, in presence of Abeta pathology, microglia acquire a reactive phenotype and surround Abeta plaques. In presence of Tau pathology, microglia acquire either a dystrophic (in the hippocampus AD patients and in vitro assays after treatment with soluble fractions from ThyTAU22 mice) or an active phenotype (in the mouse model TAU P301S), depending on the levels of Tau phosphorylation and aggregation. Focused on active microglia, we have identified an inflammatory and neurodegenerative-related phenotype based on an oxidative metabolism, TREM2-mediated. Aerobic metabolism is essential for microgliosis and alterations in TREM2 or in oxygen levels impair microglial response. In mouse models, a reduction in microglial reactivity leads to a worsen of Abeta pathology, but to an amelioration of Tau pathology, suggesting a dual role for microglia. In contrast, in human AD samples, hypoxia impairs microglia response to Abeta plaques, which worsens the neuronal pathology, pointing a protective role for microglial cells. With the purpose of evaluating AD progression in a context of microglial dysfunction, we have developed a double-transgenic mouse model that allows us to reversibly deplete microglial cells. We have characterize the efficacy of the model and microglia repopulation and activation capacities under short and long periods of depletion. The high murine microglia repopulation capacity conducted us to re-evaluate the validity of the model as a microglia dysfunction model but led us to characterize AD progression in a context of continuous microglia replacement.
In short, we propose that oxidative metabolism, TREM2-mediated, is essential for microglial chronic activation. In AD patients, genetic alterations or vascular problems may compromise microglial metabolism and response, leading to a dystrophic phenotype. Then, there is a wide microglial variability depending on the grade of development of Abeta and Tau pathologies and other patient’s comorbidities. All this needs to be taken into account when proposing new and more accurate therapeutic targets.
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Variaciones de la respuesta microglial según el contexto patológico en la Enfermedad de Alzheimer
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oai:idus.us.es:11441/889322024-02-13T08:45:46Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-09-04T09:50:38Z
2019-09-04T09:50:38Z
2019-07-19
Romero Rueda, M.d.G. (2019). Desarrollo de una metodología de aplicación y lectura de parche cutáneo estandarizado para el diagnóstico y manejo de la alergia a las proteínas de la leche de vaca no IgE mediada. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/88932
El presente trabajo de investigación surgió de la necesidad de la creación de un
plan de cuidados protocolizado y estandarizado que guíe la práctica, ante una prueba
diagnóstica (el parche cutáneo estandarizado) tanto a los profesionales sanitarios como
a los responsables de los pacientes en el ámbito pediátrico (padres o tutores) que
trabajan conjuntamente, para la detección de un tipo de alergia a proteínas de leche de
vaca (APLV), concretamente la no mediada por la IgE favoreciendo la eficacia,
efectividad y eficiencia de la prueba y así hacer un diagnóstico precoz y evitar las
complicaciones asociadas a este tipo de alergia y disminuyendo la probabilidad de
reacciones negativas en la prueba de provocación oral.
El objetivo de este trabajo es la elaboración de un protocolo de cuidados sobre
el uso del parche cutáneo en el diagnóstico de la APLV no IgE mediada dirigido al
personal sanitario y a los padres/tutores de los pacientes.
Se incluyeron en el estudio a 119 pacientes con edades comprendidas entre los
0 y 10 años a los que se le aplicó el dispositivo de parche cutáneo para el estudio de la
APLV no IgE mediada en base a una sintomatología asociada de APLV no IgE mediada.
Se ha llevado a cabo un estudio cualitativo, observacional, longitudinal, prospectivo,
descriptivo, no aleatorizado.
Elaboración de un protocolo de actuación para realizar la prueba de parche
cutáneo en donde se estableció la cronología de aplicación del parche al paciente, la
metodología de uso y lectura del dispositivo y se describió las pautas a tener en cuenta
tanto para el personal sanitario como para los padres/tutores del paciente.
Este estudio demuestra que el parche cutáneo empleado es eficaz para el
diagnóstico de la APLV no IgE mediada y que la prueba de provocación oral se puede
hacer con una mayor seguridad tras un resultado negativo del parche cutáneo
estandarizado implicando a los responsables de los pacientes en el proceso.
spa
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Desarrollo de una metodología de aplicación y lectura de parche cutáneo estandarizado para el diagnóstico y manejo de la alergia a las proteínas de la leche de vaca no IgE mediada
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oai:idus.us.es:11441/827492024-02-13T09:06:52Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-02-08T11:34:46Z
2019-02-08T11:34:46Z
2019-01-25
Mauro Lizcano, M. (2019). Papel del metabolismo de la glutamina en el control de la sensibilidad a trail de células tumorales de mama.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/82749
Desde su descubrimiento en 1995, TRAIL ha sido considerado como un ligando de muerte capaz de inducir selectivamente apoptosis en un amplio rango de células tumorales sin afectar a las células normales. Sin embargo, en estos años se ha observado que muchas células tumorales y especialmente de tumores de mama, muestran resistencia a este ligando de muerte. La causa de esta resistencia es diversa y puede producirse tanto a nivel extracelular, previo a la inducción de la señalización de TRAIL en el interior celular, como a nivel intracelular, por bloqueo de las rutas de señalización. Trabajos previos indicaban que la combinación de TRAIL con otros tratamientos que afectan al metabolismo tumoral podía ser una buena estrategia para vencer la resistencia de células tumorales de mama.
La glutamina juega un papel importante en el metabolismo de las células tumorales a través de su contribución a la homeostasis redox, la bioenergética, la síntesis de macromoléculas y la señalización. Los cánceres de mama triple negativos (TNBC) son altamente metastásicos y están
asociados con un mal pronóstico. Este tipo de cánceres todavía representan un reto importante en su tratamiento, siendo la quimioterapia convencional la única opción terapéutica. Curiosamente, diferentes estudios han demostrado que las células TNBC son dependientes de la glutamina exógena para su supervivencia y crecimiento. En este sentido, se han propuesto inhibidores del transporte y metabolismo de la glutamina como potenciales terapias
antitumorales. En esta tesis hemos demostrado que la privación de glutamina produce un aumento de la expresión de los receptores TRAIL‐R2/DR5 y una bajada de los niveles de la proteína antiapoptótica FLIP en células TNBC, seguido de una sensibilización a la apoptosis inducida por TRAIL. La quinasa GCN2, cuya activación ocurre en respuesta a la falta de aminoácidos, es
responsable de la inducción de la expresión de TRAIL‐R2 a través de una vía de señalización que implica a los factores de transcripción ATF4 y CHOP. Por el contrario, la bajada de los niveles celulares de FLIP tras la privación de glutamina en TNBC se produce por un mecanismo independiente de GCN2, en el que tiene lugar una inhibición general de la síntesis de proteínas,
como consecuencia de la falta de aminoácidos no esenciales. Aunque el aumento de la expresión de los niveles de TRAIL‐R2 mediante la activación de la ruta de GCN2 puede contribuir a la sensibilización a TRAIL, los resultados obtenidos mediante interferencia de ARN demuestran que
la reducción de los niveles de cFLIP es el evento responsable de la marcada sensibilización de las células TNBC a la apoptosis inducida por TRAIL tras privación de glutamina. Además, nuestros resultados demuestran que la inhibición farmacológica de las transaminasas aumenta los niveles de TRAIL‐R2 en membrana e inhibe la expresión de FLIP, sensibilizando a las células TNBC a TRAIL. Este último dato junto a otros obtenidos mediante el silenciamiento de enzimas clave implicadas en el metabolismo de la glutamina han permitido determinar la implicación de dicho metabolismo en la regulación de los niveles de FLIP y en la sensibilización a TRAIL. Por otro lado, la actividad glutaminasa de la enzima L‐asparraginasa (L‐ASNasa), utilizada en terapia antitumoral de leucemia linfática aguda, produce la sensibilización a TRAIL en las células TNBC. Los resultados obtenidos muestran que la L‐ASNasa provoca efectos similares a la privación de glutamina como son el aumento de los niveles de TRAIL‐R2 y la bajada de FLIP en las células TNBC. Por último, se ha llevado a cabo un estudio del papel del metabolismo de la glutamina en la sensibilidad de las células iniciadoras del cáncer de mama triple negativo, población responsable
de la resistencia a las terapias convencionales y de la reaparición de los tumores. Los resultados obtenidos demuestran que este tipo de células también es dependiente de la glutamina extracelular para mantener la resistencia a TRAIL. Todos estos datos indican que el metabolismo de la glutamina podría ser una diana antitumoral en combinación con la activación de los receptores proapoptóticos de TRAIL en TNBC.
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Papel del metabolismo de la glutamina en el control de la sensibilidad a trail de células tumorales de mama.
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oai:idus.us.es:11441/985292021-08-09T06:25:40Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-06-30T12:00:23Z
2020-06-30T12:00:23Z
2020-03-06
García Domínguez, I. (2020). Implicación de las caspasas-3 y -8 en el trastorno del espectro autista y la enfermedad de Parkinson. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/98529
El trastorno del espectro autista (TEA) y la enfermedad de Parkinson (EP) son dos
desórdenes neurológicos que presentan elevada prevalencia con un coste socioeconómico
importante y una fuerte carga para los pacientes y sus familiares, por lo que sus causas son
un importante objeto de estudio. Estos dos desórdenes tienen en común la implicación del
sistema dopaminérgico (DAérgico).
Se ha demostrado que las caspasas asesinas, entre ellas caspasa-3 y caspasa-8, tienen
otras muchas funciones aparte de su conocida participación en fenómenos de apoptosis. Así,
por ejemplo, nuestro grupo es el primero en demostrar que a nivel neuronal las caspasas
asesinas juegan un importante papel en el neurodesarrollo y en la homeostasis neuronal del
sistema DAérgico.
Con estos antecedentes, en el presente trabajo se han estudiado dos modelos animales
delecionados en caspasa-3 o caspasa-8 en el linaje catecolaminérgico; Caspasa 3f/d TH-IRESCre (Caspasa 3 floxeado/delecionado Tyrosine hydroxylase-internal ribosomal entry
sequence) y Caspasa 8f/d TH-IRES-Cre, para así dilucidar el papel de estas caspasas en la
funcionalidad y desarrollo del sistema DAérgico, así como su posible implicación en el TEA y
la EP.
Nuestro estudio muestra importantes alteraciones en las vías DAérgicas para ambos
modelos animales, principalmente en la vía nigro-estriada, aunque se presumen posibles
cambios en las vías mesolímbica y mesocortical. Además, los animales carentes de caspasa3 y caspasa-8 presentan rasgos fenotípicos muy acordes con el TEA, principalmente a nivel
conductual, así como aspectos bioquímicos de este desorden que, de hecho, podrían
justificar sus síntomas principales. Por ello, concluimos que la carencia de caspasa-3 o
caspasa-8 en el linaje catecolaminérgico podría dar lugar a un modelo animal que mimetice
algunas características biomoleculares y conductuales de esta enfermedad, completando los
estudios existentes hasta ahora en cuanto a modelos animales para el TEA.
Por otro lado, la muerte de las neuronas DAérgicas es la principal característica
neuropatológica de la EP y la principal causante de sus síntomas. Además, existen evidencias
de apoptosis extrínseca e intrínseca y de la implicación de las caspasas-3 y -8 durante la
enfermedad. Para nuestro estudio se utilizó un modelo animal sub-agudo de EP por
tratamiento con la neurotoxina 1-metil-4-fenil,6-tetrahidropiridina (MPTP), que induce la
muerte apoptótica DAérgica. Teniendo en cuenta la participación de las caspasas asesinas en
la apoptosis de las neuronas DAérgicas que acontece a la EP y en la regulación de fenómenos de muerte celular, se postuló que la ausencia de las caspasas-3 y -8 en el linaje
catecolaminérgico, podría proteger frente a la muerte neuronal DAérgica tras el tratamiento.
Nuestro estudio muestra cómo la ausencia de caspasa-3 o caspasa-8 no protege frente a la
depleción DAérgica tras el tratamiento, ya que los fenómenos de muerte celular continúan
desarrollándose. De hecho, la ausencia de caspasa-3 parece ser especialmente perjudicial,
ya que la muerte neuronal en estas condiciones se desvía a necrosis, con fenómenos
inflamatorios asociados importantes, junto a una mayor degeneración neuronal DAérgica. La
ausencia de caspasa-8 sin embargo, no produce cambios en la degeneración, ya que se
desarrollan fenómenos de apoptosis intrínseca, normales en el modelo, evitando la respuesta
inflamatoria.
Autism spectrum disorder (ASD) and Parkinson's disease (PD) are two neurological
disorders that produce an important socioeconomic impact and a heavy burden for both
patients and their families. These two disorders have in common the involvement of the
DAergic system.
It has been shown that killer caspases, including caspase-3 and caspase-8, have many
other functions apart from their involvement in apoptosis phenomena. For example, our study
is the first one to address that killer caspases play an important role in the development and
the homeostasis of the DAergic system.
Considering this background, we studied two knock-out (KO) animal models in the
catecholaminergic lineage (Caspase 3
f/d TH-IRES-Cre and Caspase 8
f/d TH-IRES-Cre) to
elucidate the role of these enzymes in the functionality of the DAergic system and their possible
implication in ASD and PD.
Our study shows important alterations in DAergic pathways in both animal models, mainly
in the nigro-striatal pathway, although possible changes in the mesolimbic and mesocortical
pathways are presumed. In addition, animals lacking caspase-3 and caspase-8 showed robust
phenotypic features congruent with ASD, mainly behavioural, although we also observed
biochemical aspects of this disorder that could justify their main symptoms. Therefore, we
conclude that caspase-3 or caspase-8 depletion in the catecholaminergic lineage could lead to
an animal model that mimics biomolecular and behavioural aspects of the disease.
On the other hand, the death of DAergic neurons is the main neuropathological
characteristic of PD and the main cause of its motor symptoms. Likewise, there is evidence of
extrinsic and intrinsic apoptosis with the involvement of caspase-3 and -8 during the disease.
For our study, we used a sub-acute MPTP model of PD in strains lacking caspase-3 and -8,
which caused permanent symptoms of the disease by inducing death of DAergic neurons in
the SN. Taking into account the involvement of killer caspases in the apoptosis phenomena
and in the regulation of cell death, it was postulated that the absence of either caspase-3 or -
8 in the catecholaminergic lineage could protect against DAergic depletion. However, our study
shows that absence of caspase-3 or caspase-8 does not protect against DAergic depletion after
MPTP treatment, due to other cell death phenomena continue in development. In fact, the
absence of caspase-3 seems to be especially detrimental, since in these conditions neuronal
death switch to necrosis, with important associated inflammatory phenomena along with
greater DAergic degeneration. On the contrary, caspase-8 absence does not produce changes
in neuronal degeneration, since an intrinsic apoptotic occurs, although avoiding the
inflammatory response.
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Implicación de las caspasas-3 y -8 en el trastorno del espectro autista y la enfermedad de Parkinson
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oai:idus.us.es:11441/478892024-02-13T22:22:08Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2016-10-21T07:18:29Z
2016-10-21T07:18:29Z
1984-12-21
Hervás Morón, M. (1984). Los citocromos b-564 de mitocondrias y b-559 de cloroplastos como sistemas transductores de energía redox en ácido - base en la respiración y en la fotosíntesis. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/47889
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/47889
En este trabajo se ha tratado de profundizar en el posible papel en la transducción de la energía del citocromo b-564 de la cadena respiratoria, así como del citocromo b-559 de la cadena fotosintética.
Para ello, se ha realizado un estudio potenciométrico y espectrofotométrico de ambos citrocromos, tratando de confirmar la existencia de estos citrocromos en dos formas de potencial, así como el hecho de que son realmente una única proteína.
Se ha estudiado el efecto de distintos tratamientos que afectan al metabolismo energético, y en particular a la síntesis de ATP, sobre el estado redox y la proporción en las dos formas de potencial de estos citocromos. Así mismo, se ha realizado un estudio del comportamiento de estos citocromos respecto al pH.
En el caso del citocromo b-564 de mitocondrias de levadura, se ha aislado el complejo III del que forma parte, estudiándose este citocromo en el complejo aislado, así como cuando éste ha sido incorporado en vesículas artificiales de lípidos.
En el caso del citocromo b-559 se han realizado estudios tratando de relacionar la interconversión entre las dos formas de potencial con la capacidad de translocación de protones por vesículas tilacoidales.
La localización de estos dos citocromos de tipo “b” en sitios de fosforilación, así como su peculiar comportamiento hacen de ellos candidatos idóneos para llevar a cabo el acoplamiento entre la energía redox y ácido-base en estos sitios de acoplamiento.
spa
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Los citocromos b-564 de mitocondrias y b-559 de cloroplastos como sistemas transductores de energía redox en ácido - base en la respiración y en la fotosíntesis
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2016-10-11T10:57:13Z
2016-10-11T10:57:13Z
1983-10-01
Santa María Pérez, C. (1983). Alteraciones morfofuncionales provocadas en el riñón e hígado de rata tras la administración del pesticida atrazina. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/47387
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/47387
Los Pesticidas o Plaguicidas han supuesto un gran adelanto en la Agricultura, sin embargo, y ya que su utilización es cada día más frecuente, se hace obligatorio un conocimiento más profundo de los mismos encaminado sobre todo a determinar la posible toxicidad que de una forma directa o indirecta puede tener sobre la humanidad.
Aunque se han descrito numerosos casos de intoxicaciones agudas por estos productos son más frecuentes las intoxicaciones crónicas, debido a su estabilidad en el medio ambiente y alimentos y a la facilidad con que se acumulan en los tejidos humanos.
Existe no obstante, hoy en día poca información sobre los efectos tóxicos que producen la mayoría de los pesticidas y la repercusión de su acumulación en el organismo sobre estados fisiológicos y patológicos.
Por todo ello, y dado que Sevilla es la segunda provincia de España en cuanto a la utilización de Plaguicidas (252), se está llevando a cabo en el Instituto de Investigaciones Científicas “Rector González García” trabajos sobre el efecto de pesticidas a distintos niveles, tanto sobre vegetales, estudiando las modificaciones del índice mitótico en las células meristemáticas, como en animales, dilucidando la acción de diversos pesticidas sobre los distintos órganos.
El presente trabajo estudia las alteraciones en riñón e hígado producidas por la atrazina, herbicida que en la actualidad está teniendo un gran auge en Agricultura. Actúa sobre los vegetales inhibiendo la fotosíntesis, si bien, sus efectos tóxicos sobre mamíferos son aún poco conocidos. Se sabe que tiene tendencia a acumularse principalmente en el tejido renal y hepático.
En este sentido y con objeto de aportar nuevos datos sobre su toxicidad hemos evaluado las alteraciones morfofuncionales de este pesticida a diversas dosis subletales sobre los órganos dosis subletales sobre los órganos de excreción y metabolización por excelencia.
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Alteraciones morfofuncionales provocadas en el riñón e hígado de rata tras la administración del pesticida atrazina
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oai:idus.us.es:11441/331662024-02-14T09:19:21Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2016-01-22T14:13:31Z
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2016-01-15
Jiménez Muñoz, S. (2016). Efectos de la acumulación del péptido Beta amiloide en tejido cerebral de ratones PS1xAPP modelos de la Enfermedad de Alzheimer. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/33166
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/33166
Esta enfermedad se ha convertido en el tercer problema de salud más
grave en los países desarrollados (detrás de los accidentes cardiovasculares y el cáncer). Existen alrededor de 800.000 enfermos diagnosticados en España y 45 millones a nivel mundial. Aunque parezca imposible, estas cifras sufrirán un incremento en el futuro debido al aumento progresivo de la esperanza de vida actual, al envejecimiento de la población, de forma que se pronostica que en el año 2050 unos 115 millones de personas en el mundo se encontrarán afectadas por esta enfermedad. Por todo esto la EA es un gran problema de salud pública, agravado por el elevado coste económico, sanitario y social que supone el cuidado de un enfermo de EA. Esta enfermedad se caracteriza por unos rasgos anatómico patológicos distintivos. Por un lado están las alteraciones macroscópicas, entre las que podemos encontrar: atrofia cortical severa, adelgazamiento de las circunvoluciones y ensanchamiento de los surcos, engrosamiento de las meninges, dilatación de las cavidades ventriculares, disminución del bulbo olfatorio y pérdida de peso y volumen cerebral; y por otro las microscópicas, que incluyen: son los agregados proteicos extracelulares en forma de placa del péptido β-amiloide, los ovillos neurofibrilares intraneuronales de la proteína TAU hiperfosforilada, la disminución del número de sinapsis y la degeneración neuronal en las áreas cerebrales afectadas. Es de vital importancia el estudio de cómo surge y progresa la patología de EA, para poder identificar posibles dianas terapéuticas que permita el desarrollo de fármacos que impidan, o al menos retrase, la progresión de la enfermedad. Para tal fin se han desarrollado los modelos animales de la Enfermedad de Alzheimer. En los últimos años se están desarrollando mucho de estos modelos, y aunque ninguno de ellos reproduce la totalidad de la patología de EA observada en humanos, están proporcionando una valiosa información sobre la patogénesis de la misma. Nuestro trabajo se desarrolla con el modelo transgénico PS1M146L/APPSL (las formas mutadas de los genes humanos presenilina y de la proteína precursora del péptido β-amiloide, mutaciones detectadas en casos de Alzheimer familiar). Atendiendo a la hipótesis inflamatoria, que propone que ésta contribuye a la patogénesis inicial de la EA hemos caracterizado la respuesta microglial en el hipocampo de estos animales, en relación con la aparición y acumulación del péptido β-amiloide y de sus distintas especies (ya sea en placas extracelulares insolubles, o de las formas oligoméricas solubles que pueden difundir por todo el parénquima). Nuestros datos muestran una coexistencia espacio-temporal de la activación de la microglía con la acumulación de placas extracelulares (desde edades
tempranas), pero también con el inicio de la aparición y acumulación de las formas solubles de Aβ (a edades más avanzadas), generando ambas formas de Aβ un fenotipo de activación totalmente antagónicos en las células microgliales. El estudio ha continuado con la evaluación del efecto que tiene las fracciones solubles extracelulares (fracciones S1) obtenidas de la corteza de los ratones PS1xAPP de distintas edades sobre la vía pro supervivencia PI3K-Akt- GSK-3β. Las fracciones S1 de animales jóvenes, en las cuales aún no se detectan formas oligoméricas solubles del péptido Aβ, activan esta ruta generando un ambiente neuro-protector; mientras que las fracciones S1 de animales viejos las inhiben, haciendo más vulnerables a las neuronas. Teniendo en cuenta la importancia de estas formas solubles de Aβ, hemos realizado estudios de los protocolos actuales que se llevan a cabo para su determinación en tejidos post mortem, ya que es importante poder evaluar correctamente la presencia fisiología de los mismos en el parénquima cerebral. Para terminar hemos realizado un tratamiento crónico con Litio en nuestro modelo PS1xAPP, a edades tempranas, incluso antes de que comience la patología de Aβ (3 meses) para su posible uso como terapia preventiva en personas con riesgo de padecer EA, o con deterioro cognitivo leve.
spa
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
Enfermedad de Alzheimer
Efectos de la acumulación del péptido Beta amiloide en tejido cerebral de ratones PS1xAPP modelos de la Enfermedad de Alzheimer
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oai:idus.us.es:11441/834112024-02-13T20:11:30Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-02-22T16:16:10Z
2019-02-22T16:16:10Z
1972-07-13
Sanz Nicolás, P. (1972). Fraccionamiento de fitohemaglutininas procedentes de leguminosas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/83411
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Fraccionamiento de fitohemaglutininas procedentes de leguminosas
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2017-12-21T08:43:03Z
2017-12-21T08:43:03Z
2014-12-15
García Martínez, J. (2014). Respuestas fúngicas a señales ambientales: Funciones de las proteínas CarO, OpsA, CutA y AcyA en Fusarium fujikuroi. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/67893
20769361
The ascomycete fungus Fusarium fujikuroi (Gibberella fujikuroi MP-C) produces secondary metabolites of biotechnological interest, such as gibberellins, bikaverin, and carotenoids. Production of these metabolites is regulated by nitrogen availability and, in a specific manner, by other environmental signals, such as light in the case of the carotenoid pathway. A complex regulatory network controlling these processes is recently emerging from the alterations of metabolite production found through the mutation of different regulatory genes. In the chapter 1 of this Thesis, we show the effect of the targeted mutation of the acyA gene of F. fujikuroi, coding for adenylyl cyclase. Mutants lacking the catalytic domain of the AcyA protein showed different phenotypic alterations, including reduced growth, enhanced production of unidentified red pigments (probably fusarubin), reduced production of gibberellins and partially derepressed carotenoid biosynthesis in the dark. The phenotype differs in some aspects from that of similar mutants of the close relatives F. proliferatum and F. verticillioides: contrary to what was observed in these species, ¿acyA mutants of F. fujikuroi showed enhanced sensitivity to oxidative stress, but no change in resistance to heavy metals or in the ability to colonize tomato tissue, indicating a high versatility in the regulatory roles played by cAMP in this fungal group. Survival of microorganisms in natural habitats depends on their ability to adapt to variations in osmotic conditions. In Chapter 2, we provide novel data on the molecular mechanism used by F. fujikuroi to overcome hyperosmotic stress. The research group formerly described the gene cut-1 of Neurospora crassa, encoding a protein of the haloacid dehalogenase family with an unknown function in the osmotic stress response. Here we report on the functional analysis of cutA, the cut-1 ortholog of F. fujikuroi. cutA mRNA levels increased transiently after exposure to 0.68 M NaCl and were reduced upon return to normal osmotic conditions; deletion of the gene resulted in a partial reduction in tolerance to osmotic stress. ¿cutA mutants contained much lower intracellular levels of glycerol than the wild-type, and did not exhibit the glycerol increase that follows an hyper-osmotic shock, as expected from the high osmolarity glycerol (HOG) response. cutA is linked and divergently transcribed with the putative glycerol dehydrogenase gene gldB, which showed the same regulation by osmotic shock. The intergenic cutA/gldB regulatory region contains putative stress-response elements conserved in other fungi, and both genes shared other regulatory features, such as induction by heat shock and by illumination. Photoinduction was also observed in the HOG response gene hogA, and was lost in mutants of the white collar gene wcoA. Previous data on glycerol production in Aspergillus spp. and features of the predicted CutA protein lead us to propose that F. fujikuroi produces glycerol from dihydroxyacetone, and that CutA is the enzyme involved in the synthesis of this precursor by dephosphorylation of dihydroxyacetone-3P.
The last Chapter of this Thesis is focused on the study of Fusarium rhodopsins, membrane-embedded photoreceptors using retinal as chromo-phore, found in all major taxonomic kingdoms. Rhodopsins play well-known functions in different biological systems, but their roles in fungi remain unknown. The filamentous fungus Fusarium fujikuroi contains two putative rhodopsins, CarO and OpsA. The gene carO is light-regulated, and the predicted polypeptide contains all conserved residues required for proton pumping. We aimed to elucidate the expression and cellular location of the fungal rhodopsin CarO, its presumed proton pumping activity and the possible effects of such function on F. fujikuroi growth. In electrophysiology experiments we confirmed that CarO is a green-light driven proton pump. Visualization of fluorescent CarO-YFP expressed in F. fujikuroi under control of its native promoter revealed higher accumulation in spores (conidia) produced by light-exposed mycelia. Comparative germination analyses of conidia from a carO- mutant and its carO+ control strain showed a faster development of light-exposed carO- germlings. In conclusion, CarO is an active proton pump, abundant in light-formed conidia, whose activity slows down conidia germination and early hyphal development under light. Interestingly, CarO-related rhodopsins are typically found in plant-associated fungi, where green light dominates the phyllosphere. Our data provide the first reliable clue on a possible biological function for a fungal rhodopsin.
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Metabolismo microbiano
Hongos
Genética molecular
Respuestas fúngicas a señales ambientales: Funciones de las proteínas CarO, OpsA, CutA y AcyA en Fusarium fujikuroi
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oai:idus.us.es:11441/951712024-02-14T20:16:20Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-04-14T14:25:48Z
2020-04-14T14:25:48Z
1995-03-06
https://hdl.handle.net/11441/95171
Hemos estudiado el efecto que la asimilación de n y el estrés salino produce sobre el transporte fotosintético de e- y la asimilación de c en hojas de cebada y guisante. Se han analizado las modificaciones en la actividad fotosintética producidas tras el suministro de distintas fuentes de n a través de la corriente de transpiración de las hojas así como la influencia del cultivo en distintas fuentes de nitrógeno y en estrés salino sobre el desprendimiento neto de o2, la fijación neta de co2 y la actividad fosfoenolpiruvatocarboxilasa. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que: 1) el suministro de nitrato, pero no de amonio, estimula el desprendimiento de o2 a co2 y luz saturantes, lo cual indica que la asimilación de nitrato utiliza poder asimilatorio fotosintético y estimula el flujo no-cíclico de e-. 2) el suministro de nitrato (o amonio) a la hoja, estimula la fijación de co2 a luz saturante y disminuye la sensibilidad a malato de la pepc, indicando un aumento en la capacidad fotosintética por estimulación del flujo de carbono hacia la vía glucolítica. 3) el cultivo en amonio o nitrato amonico como fuente de n aumenta la fijación de co2, respecto al cultivo con nitrato. Las plantas cultivadas con amonio, presentan asimismo, menor actividad pepc. El aumento en la fijación de co2 observado, se debe probablemente al aumento en la translocación de carbohidratos desde la hoja hacia la raíz, liberando a la fijación de co2 de la inhibición por productos finales. 4) el cultivo en estrés salino disminuye la capacidad fotosintética por distintos factores. Así, en la var. "athos" que es mas sensible al estrés salino que la var. "hassan", las lesiones se manifiestan primariamente a nivel de los fotosistemas, mientras que en la var. "hassan" no parece existir daño a este nivel
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Influencia de la asimilación de nitrógeno y el estrés salino sobre la capacidad fotosintética en cebada
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oai:idus.us.es:11441/924352024-02-15T07:52:01Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-01-29T08:00:45Z
2020-01-29T08:00:45Z
2019-12-20
García Revilla, J. (2019). The role of Galectin-3 in the pathogenesis of Parkinson's Disease. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/92435
En 1817, James Parkinson describió por primera vez un conjunto de síntomas motores en el
ensayo titulado “Shaking Palsy” (Parálisis temblorosa). Este conjunto de síntomas fue
posteriormente renombrado como Enfermedad de Parkinson (EP). Durante estos dos siglos, los
avances en la investigación de la EP han revelado un papel fundamental para la proteína
neuronal α-sinucleína (αSyn). Esta proteína, cuyas funciones fisiológicas están aún por
determinar, forma inclusiones citoplasmáticas características de la EP llamadas Cuerpos de
Lewy. Junto a la aparición de estos Cuerpos de Lewy, la EP se caracteriza por la degradación
específica de la substancia nigra, un área dopaminérgica del mesencéfalo cerebral involucrada
en el control del movimiento. En la actualidad, las diversas hipótesis sobre la etiología de la EP
no están logrando transformarse en mejores tratamientos o un diagnóstico más temprano, por
ello, la búsqueda de nuevas moléculas implicadas en el origen y la progresión de la EP se revela
indispensable para desarrollar nuevas estrategias terapéuticas. Recientemente se ha
relacionado a la proteína Galectina-3 (Gal3) con los Cuerpos de Lewy en cerebros post-mortem.
Gal3 es una proteína de unión a galactósidos sin actividad catalítica y expresada principalmente
por células de la microglía, las células inmunes del sistema nervioso central, en procesos
neuroinflamatorios.
En la presente tesis doctoral, tratamos de describir el papel de Gal3 en la patogénesis de la EP
basándonos en muestras post-mortem, in vitro e in vivo. En estudios humanos post-mortem,
hemos podido asociar esta proteína al proceso de agregación que da lugar a los Cuerpos de
Lewy. Los estudios in vitro nos han permitido detallar los procesos de agregación de αSyn y
captación neuronal de Gal3. Por su parte, hemos desarrollado un modelo in vivo de
sobreexpresión de αSyn humana durante 6 meses en ratones salvajes y carentes de Gal3 (Gal3
knockout).
Nuestros resultados confirman la presencia de Gal3 en muestras post-mortem tanto de
pacientes con Demencia de Cuerpos de Lewy como de EP. Como observación relevante, hemos
relacionado la presencia de Gal3 preferentemente con acumulaciones menos densas de αSyn
pero no con los Cuerpos de Lewy. Igualmente, hemos descrito un papel fundamental de Gal3
durante el proceso de agregación de αSyn in vitro, donde Gal3 bloquea y revierte dicho proceso
de agregación. Además, hemos demostrado que las neuronas son capaces de incorporar Gal3
del medio extracelular y que esta Gal3 se une rápidamente a las acumulaciones de αSyn. Por
último, nuestras observaciones in vivo corroboraron estos datos, demostrando un gran impacto
de la deleción de Gal3 en el modelo animal de sobreexpresión de αSyn humana mediada por
adenovirus. Los animales carentes de Gal3 desarrollaron un mayor número de agregados de
αSyn, pero no mostraron neurodegeneración de la substancia nigra ni desarrollaron síntomas
motores, lo que supone que la deleción de Gal3 no solo preservó la supervivencia de las
neuronas dopaminérgicas sino también preservó su funcionalidad. Asimismo, hemos identificado la aparición de un fenotipo microglial basado en los marcadores TNFα, Trem2 y
MerTK que podría ser específico en la EP. Este fenotipo se ve abolido en ausencia de Gal3, lo
que pone de manifiesto la importancia de esta proteína en la activación microglial asociada a
neurodegeneración.
En definitiva, nuestro trabajo demuestra un importante papel de Gal3 en la patogénesis de la EP
y en la viabilidad de las neuronas dopaminérgicas. Los datos que se muestran sugieren que Gal3
está inherentemente relacionada al proceso de agregación de αSyn, su toxicidad y al proceso
neuroinflamatorio que desencadena.
In 1817, James Parkinson described a serial of motor symptoms in the essay Shaking Palsy. These
symptoms were later renamed as Parkinson’s Disease (PD). In the following two centuries after
the discovery of the disease, knowledge has being accumulated and pointing out a pathological
role of the neuronal protein α-synuclein (αSyn). This protein can form intracytoplasmic inclusion
called Lewy body along and dopaminergic degeneration of substantia nigra. Both established
hallmarks of the disease. However, no hypothesis about the PD etiology has been confirmed in
terms of resulting in an effective treatments that could prevent or stop the progression of the
disease. For that reason, discovery of new molecules implied in PD development and
progression is indispensable for new investigation strategies. Recently, the inflammatory protein
Galectin-3 (Gal3) has been related to Lewy body in post-mortem studies. Gal3 is a galactosebinding
protein without known catalytic activity and expressed mostly by activated microglial
cells, the immune cell of the brain. No major expression has been detected in neurons in basal
conditions. Role of this protein in disease development is unknown.
In my thesis, we unravel the role of Gal3 in the pathogenesis of PD based on; human postmortem
identification of the protein related with Lewy body aggregation process; in vitro studies
of aggregation and neuronal uptake of Gal3; and in vivo model of αSyn overexpression for 6
months in wild type and Gal3-knockout mice.
Our results confirmed the presence of Gal3 in post-mortem samples from Dementia of Lewy
Body and PD patients. Strikingly, Gal3 accumulation was related to non-dense accumulation of
αSyn rather than dense Lewy body. Indeed, neuronal Gal3 protein expression was correlated
with lower αSyn staining. Our data showed a critical role for Gal3 in aggregation pattern of αSyn
with a marked inhibition and disruption of aggregation process in vitro. Furthermore, we
demonstrate the ability of neurons to uptake extracellular Gal3 and incorporate it to αSyn
accumulations. In vivo data followed the same pattern and demonstrated a huge impact for Gal3
deletion in our model of adenovirus-mediated overexpression (AAV5) of human αSyn. Gal3
knockout mice displayed higher number of aggregates but absence of neuronal damage and lack
of behavioural impairment meaning that not only surveillance of dopaminergic neurons were
maintained intact but also functionality of these neurons were preserved.
Our work demonstrate a role of Gal3 in PD pathogenesis and its detrimental role for
dopaminergic neurons. The present data suggest that Gal3’s predominant role is inherently
associated to the aggregation process of αSyn and inflammation in mediating neurotoxicity.
eng
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The role of Galectin-3 in the pathogenesis of Parkinson's Disease
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oai:idus.us.es:11441/904602024-02-13T08:46:07Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-11-22T16:58:20Z
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2001-06-18
Arrach, N. (2001). Biosíntesis de carotenoides en hongos: los genes carRa de Phycomyces y al-2 de Neurospora. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90460
En esta tesis se ha Clonado el gen carRA de Phycomyces sacando ventaja de su estrecho ligamiento con el gen carB y se caracterizaron a nivel molecular los mutantes que mapean dicho gen. Tambien se ha investigado la bifuncionalidad del gen al-2 de Neurospora descrito anteriormente como una sintasa de fitoeno.
Con estos resultados son cuatro los genes que determinan dos enzimas esenciales en la biosintesis de carotenoides en hongos. El gen carRA tiene a demas otras funciones reguladoras determinadas por la region A del extremo 3¿del gen. Dichas funciones estan relacionadas con la transferencia de sustratos en el complejo mutienzimatico, la regulacion por productofinal y la fotocarotenogenesis.
Los resultados obtenidos en esta tesis nos ofrecieron mas informacion sobre el origen evolutivo de las ciclasas de hongos. La alta similitud entre las ciclasas de hongos y el resto de las ciclasas heterodimericas sugiere que ambas tienen un origen comun, la ciclasas monomericas parecen tener un origen independiente.
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Biosíntesis de carotenoides en hongos: los genes carRa de Phycomyces y al-2 de Neurospora
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2019-11-22T16:40:06Z
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1980-03
Bárcenas Ruiz, J.A. (1980). Enzimas de la asimilación de amonio en la bacteria A. chroococcum. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90459
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Enzimas de la asimilación de amonio en la bacteria A. chroococcum
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2022-12-02T12:02:35Z
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2022-10-28
Orts Gómez, Á. (2022). Diseño de bioprocesos de economía circular de bioestimulantes ambientales a partir de Okara. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/140118
La tesis tiene como objetivos el desarrollo de bioprocesos de obtención de bioestimulantes ambientales mediante tecnología hidrolíticas y fermentativa a partir de un subproducto de la industria alimentaria la OKARA y su caracterización funcional.
Los nuevos productos desarrollados entran en la categoría de bioestimulantes ambientales, con aplicaciones principalmente agrícolas, estos incluyen diversas formulaciones de compuestos, sustancias y microorganismos que se aplican a plantas o suelos para regular y mejorar los procesos fisiológicos del cultivo, haciéndolos más eficientes. Los bioestimulantes actúan sobre la fisiología de las plantas a través de diferentes vías que los nutrientes para mejorar el vigor del cultivo, los rendimientos, la calidad y la vida útil/ conservación después de la cosecha
Esta tesis doctoral se compone de 4 capítulos. En el primer capítulo se realiza el diseño de los bioprocesos de obtención a partir de okara, mediante tecnología hidrolítica y fermentativa. La okara es un subproducto industrial con una interesante composición orgánica, pero su principal problema para tener una funcionalidad como bioestimulante edafológico es la baja biodisponibilidad de sus biomoleculas, especialmente de las proteínas. La valorización de este subproducto mediante su conversión en productos de alto valor añadido para su uso en agronomía se ha llevado utilizando dos tipos tecnologías biológicas: Enzimático y fermentativo, obteniéndose dos tipos de bioestimulantes
En el segundo capítulo se realiza una evaluación el potencial bioestimulante edafológico de los bioestimulantes obtenidos a partir de Okara sobre los microorganismos del suelo y, a nivel bioquímico, en particular, las actividades enzimáticas vinculadas a los ciclos biogeoquímicos, la diversidad microbiana y la influencia en la biodiversidad microbiana. Respecto a la aplicación de los productos en suelos, destaca una gran estimulación de los microorganismos edáficos tanto en el producto hidrolizado, como en el producto fermentado soluble, postulándolos como buenos candidatos para la formulación bioestimulantes agronómicos ricos en aminoácidos, péptidos y moléculas bioactivas.
En el tercer capítulo se estudiará el potencial bioestimulante de un Hidrolizado enzimático de Okara, en la biorremediación de suelos contaminados por el insecticida clorpirifos. El potencial bioestimulante será evaluado taete-a nivel de influencia en las propiedades biológicas. A partir de los
resultados obtenidos sobre el potencial de biorremediación del
bioestimulante de okara aplicado a suelos contaminados por clorpirifos se
puede concluir que: Los bioestimulantes a partir de la okara aplicados
a los suelos presentan un gran potencial para la biorremediación de suelos
contaminados por clorpirifos, aumentando considerablemente la
degradación del contaminante en los suelos. Las actividades enzimáticas en
las muestras con aplicación del bioestimulante con clorpirifos, demostró una
rápida degradación del contaminante, situándose a los 7 días la mayor tasa
de eliminación. Los mayores valores de biorremediación se obtuvieron en el
producto hidrolizado de la okara, debido su contenido en proteínas de bajo
peso molecular soluble fácilmente asimilable por los microorganismos del
suelo, siendo así una buena alternativa para la biorremediación de suelos
contaminados por clorpirifos. del suelo, y específicamente en la degradación
del xenobiótico.
Finalmente, en el capítulo 4, se evaluará la potencia bioestimulante
del Biestimulante enzimático de okara frente en el estrés ambiental por
ozono. Este revirtió la disminución inducida por ozono en parámetros
fisiológicos como tasa fotosintética neta, contenido de clorofila y evaluación
de la fluorescencia directamente en hoja, y detuvo la oxidación de
biomoléculas en hojas. Por lo tanto, los resultados de nuestro estudio
5
destacan el uso potencial de los bioestimulantes de okara, como un
protector vegetal eficaz contra el estrés oxidativo causado por el Ozono.
Así, contribuimos a los esfuerzos generales realizados en la última
década en la búsqueda de nuevos productos alternativos no químicos para
proteger los cultivos contra los daños causados por el estrés oxidativo
ambiental.
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Diseño de bioprocesos de economía circular de bioestimulantes ambientales a partir de Okara
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2019-11-20T15:37:48Z
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1974-09-23
López Barea, J. (1974). El sistema reductor de nitrato de Chlamydomonas Relahardi y su regulación. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90371
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El sistema reductor de nitrato de Chlamydomonas Relahardi y su regulación
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oai:idus.us.es:11441/1164152024-02-13T09:05:19Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690com_11441_26072col_11441_11504col_11441_11517col_11441_10998col_11441_26077
2021-07-23T09:55:20Z
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2021-04-14
Martín Reina, J. (2021). Evaluación de la influencia de la exposición laboral a fitosanitarios en mujeres que recogen verduras: posibles consecuencias sobre su salud. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/116415
Una de las misiones fundamentales de la figura del Técnico Superior de
Prevención de Riesgos Laborales es preguntarse si, en ambientes laborales donde la
exposición a distintos tipos de productos es indirecta, dicha exposición está controlada
y, lo más importante, si esta exposición indirecta no afecta a la salud de los trabajadores.
Situaciones donde hacernos esta pregunta las encontramos en diferentes campos, como
en el caso del presente estudio donde nos hemos centrado en la exposición laboral
indirecta a plaguicidas. Conocedores de la amplia normativa y documentación que ya
existe sobre la peligrosidad de la exposición directa a plaguicidas, relativa
principalmente a los trabajadores que los aplican, hemos querido extender el estudio a
los posibles efectos adversos de la exposición indirecta a plaguicidas en una población
de mujeres agrícolas que recogen verduras en el campo, a “cielo abierto”.
El objetivo principal de este estudio ha sido el de comprobar si las trabajadoras
que recogen verduras y frutas en el campo a “cielo abierto” ven alterados sus
parámetros biológicos, y en consecuencia su estado de salud, a consecuencia de la
aplicación previa de fitosanitarios en los productos recogidos. Para conseguir este
objetivo principal nos hemos apoyado en varios objetivos secundarios (hemos realizado
un análisis sobre los mecanismos tóxicos de los plaguicidas, hemos comprobado, en qué
estado se encontraban los valores clínicos, valores renales y estrés oxidativo de las
trabajadoras con las que hemos llevado a cabo el estudio, hemos validado un método
para determinar glifosato en orina, hemos determinado valores de glifosato en orina y
metales en sangre).
Entre los resultados obtenidos, cabría destacar que, las transaminasas y las
colinesterasas no se ven afectadas, sin embargo sí resultan afectados otros marcadores
como son los de estrés oxidativo, daño renal temprano y hormonas relacionadas con la
reproducción, y, es por esto que, consideramos que la normativa y protocolos españoles,
son insuficientes para garantizar la salud de las trabajadoras, así como también son
insuficientes para garantizar una fertilidad y desarrollo adecuado de la descendencia de
las trabajadoras.
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Evaluación de la influencia de la exposición laboral a fitosanitarios en mujeres que recogen verduras: posibles consecuencias sobre su salud
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2019-06-17T09:35:10Z
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2019-03-25
Sánchez Micó, M.V. (2019). Caracterización de la respuesta y función astroglial en modelos y pacientes de la enfermedad de Alzheimer.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/87454
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Caracterización de la respuesta y función astroglial en modelos y pacientes de la enfermedad de Alzheimer.
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2018-07-27T08:05:08Z
2018-07-27T08:05:08Z
2018-07-13
Carrillo Jiménez, A. (2018). Papel de la galectina-3 en la respuesta inmune y en la pérdida neuronal asociada a un modelo murino de daño cerebral traumático.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/77657
La lesión cerebral traumática (TBI) es actualmente una causa importante de muerte y discapacidad en la sociedad occidental, con una estimación de 2,5 millones de personas afectadas cada año en Europa, lo que indica la necesidad de establecer nuevos avances orientados a su prevención y tratamiento. Dentro de las primeras 24 horas después del daño se desencadena una respuesta inflamatoria, aumentando la expresión de marcadores inflamatorios, incluyendo la lectina galectina-3 y, asociada a esta neuroinflamación, una pérdida neuronal.
En este proyecto de tesis hemos usado un modelo murino de TBI mediante un impacto cortical controlado para estudiar el papel de la galectina-3 en la regulación de la respuesta inmune y neurodegeneración asociada al TBI. Con objeto de dilucidar y distinguir el papel intracelular y extracelular de la galectina-3 utilizamos ratones transgénicos con ausencia total de la galectina-3 (ratones KOGal3) y ratones de fenotipo silvestre (ratones WT) a los que se trató con anticuerpos de neutralización contra galectina-3 (ratones Ac-Gal3) con objeto de inhibir selectivamente esta proteína a nivel extracelular.
Nuestro análisis muestra un aumento significativo en la expresión de la galectina-3 en el cerebro a las 24 horas después del impacto y en el lado ipsilateral al daño exclusivamente. En estas condiciones, el grupo celular responsable de esta expresión es la microglía reactiva, la cual se encuentra invadiendo la capa degenerada de células piramidales del hipocampo. Además, detectamos la liberación de la proteína galectina-3 al espacio extracelular y de ahí al líquido cefalorraquídeo, produciéndose también la unión de esta proteína liberada al receptor TLR4. Por otra parte, se observa a corto y largo plazo una pérdida neuronal producida por el TBI en la región ipsilateral de la corteza y el hipocampo, produciéndose, tanto con la ausencia total de la galectina-3 como con la neutralización, un efecto neuroprotector frente al daño neuronal. Además, los análisis realizados sobre la población microglial revelan que la neutralización de la galectina-3 disminuye la activación de estas células y la disminución de la expresión de los marcadores proinflamatorios (IL1β, IL6 y NOS2) inducidos en la región ipsilateral al daño tras el TBI. Por otro lado, la ausencia total de la galectina-3 aumenta la expresión de marcadores antiinflamatorios (ARG1 y Ym1) y la expresión de BDNF, también inducida en la región ipsilateral tras el TBI.
Por lo que la inducción de la liberación de la galectina-3 actúa como una señal de alarma en condiciones de TBI e induce una fuerte respuesta proinflamatoria y activación microglial, a través de la activación del receptor TLR4, la cual es responsable de la progresión de la neurodegeneración producida tras el daño inicial del TBI. Además, la galectina-3 extracelular podría interaccionar con el receptor MerTK actuando como opsonina y facilitando la fagocitosis de neuronas por parte de la microglía reactiva, contribuyendo de nuevo a la pérdida neuronal. Por otro lado, parece ser que la galectina-3 intracelular es la responsable de la regulación del estado antiinflamatorio y de la expresión de BDNF inducida por el TBI.
Por lo tanto, terapias dirigidas a modular la expresión o disponibilidad de la galectina-3 dentro de las primeras 24 horas después de la lesión podrían tener un efecto potencialmente positivo en los pacientes disminuyendo el avance y secuelas neuronales asociadas y desencadenadas por el daño inicial del TBI.
Traumatic brain injury (TBI) is currently a major cause of death and disability in western society, with an estimated 2.5 million people affected each year in Europe, indicating the need to establish new advances aimed at its prevention and treatment. Within the first 24 hours after the damage an inflammatory response is triggered increasing the expression of inflammatory markers, including the lectin galectin-3, and a neuronal loss is also associated with this neuroinflammation.
The aim of this thesis project is to study the role of galectin-3 in the regulation of the immune response and neurodegeneration associated with TBI, we have used a TBI model in mice by a controlled cortical impact. In order to elucidate and to distinguish between the intracellular and extracellular role of galectin-3 we used galectin-3 knock out transgenic mice (KOGal3 mice), with total absence of the galectin-3 protein, and wild type mice (WT mice) to which were treated with neutralizing antibodies against galectin-3 (Ac-Gal3 mice) in order to selectively inhibit this protein at the extracellular level.
Our results show a significant increase in the expression of galectin-3 in the brain at 24 hours after impact and on the ipsilateral side. Under these conditions, we find that the cellular group responsible for this expression is reactive microglia, which is invading the degenerated layer of pyramidal cells of the hippocampus. In addition, we detected galectin-3 protein release to the extracellular space and, and subsequently from there to the cerebrospinal fluid, producing the binding of this released protein to the TLR4 receptor. A short and long term neuronal loss was observed in the damaged ipsilateral area in the cortex and the hippocampus, producing a neuroprotective effect against the neuronal damage produced by the TBI both with the total absence of galectin-3 and with neutralization. In addition, the analyses performed on the microglial population reveal that the neutralization of galectin-3 decreases the activation of these cells and furthermore, the expression of the proinflammatory markers (IL1β, IL6 and NOS2) induced in the damaged ipsilateral area. On the other hand, the total absence of galectin-3 increases the expression of antiinflammatory markers (ARG1 and Ym1) and the expression of BDNF, also induced in the ipsilateral area by TBI.
Thus, the induction of galectin-3 release acts as a warning signal in TBI conditions and induces a strong microglia activation and proinflammatory response, through the activation of the TLR4 receptor, which is responsible of the progression of neurodegeneration produced by the TBI-initial damage. In addition, extracellular galectin-3 could interact with the MerTK receptor acting as an opsonin and facilitating phagocytosis of neurons by mean of the reactive microglia, contributing again to neuronal loss. On the other hand, it seems that intracellular galectin-3 is responsible for the regulation of the antiinflammatory state and the expression of BDNF induced by the TBI.
Therefore, therapies focus on modulating the expression or availability of galectin-3 within the first 24 hours after the injury can have potentially a positive effect on TBI-patients by decreasing the advance of TBI-associated neuronal lost.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Papel de la galectina-3 en la respuesta inmune y en la pérdida neuronal asociada a un modelo murino de daño cerebral traumático.
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
oai:idus.us.es:11441/893082024-02-14T19:28:38Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2019-09-25T06:50:57Z
2019-09-25T06:50:57Z
2019-09-12
Inca Torres, A.R. (2019). Revalorización de los subproductos de la industria de hongos y setas comestibles. Aplicación a la obtención de productos de alto valor añadido. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/89308
La producción de setas comestibles en España, destinadas al consumo en fresco o en forma de conservas, representa entre el 7 y el 8% de la producción mundial, estimada para el año 2017 en 10.317.092 Tm. Este gran volumen de producto genera entre el 25 y el 30% de subproductos, constituido fundamentalmente por tallos y setas no comercializables, que o no se usan o mal usan, dando lugar al sistema denominado sistema lineal que se basa en la extracción de materia prima, la producción de bienes, el consumo y la generación de residuos, y como consecuencia de ello la destrucción/contaminación del medioambiente, es por ello que actualmente se está intentando cambiar este sistema de producción y consumo, adaptándolo al nuevo sistema de economía circular, el cual está enfocado hacia un sistema regenerativo desde su diseño, para mantener el valor de los recursos (materiales, agua, suelo y energía), de los productos y limitando los insumos de materias primas y energía, evitando, en lo posible, al máximo, la acumulación de residuos y sus impactos negativos sobre el medioambiente, el clima y la salud humana.
Por lo que en el presente trabajo nos hemos centrado en la revaloración de los subproductos provenientes de la industria de setas y hongos comestibles, concretamente del champiñón (Agaricus bisporus) como materia prima valorizable para la obtención de productos de alto valor para varias industrias: medico-farmacéutica, alimentaria, cosmética, química, agronómica, etc., y contribuir a la mejora y protección del medioambiente, a través de un sistema de economía circular.
La industria de las setas y hongos comestibles, generan tres tipos de subproductos: i) el compost agotado, ii) los tallos y piezas no comercializables, y iii) el líquido de escaldado en el caso de las conservas. En el presente trabajo nos hemos centrado en la revalorización de los dos últimos: tallos y elementos no comercializables, y líquido de escaldado. Tanto los tallos como el líquido de escaldado, debido a su composición [23-32% p.s., en proteínas, 65-72%, p.s., en carbohidratos, y diversas sustancias beneficiosas para la salud como ergotioneina, ergosterol (precursor de la vitamina-D2), péptidos antioxidantes, etc.], pueden constituir unas excelentes fuentes de partida para la obtención de diferentes productos potencialmente utilizables en la industria médico-farmacéutica y alimentaria como nutracéuticos, en la industria cosmética como nutricosméticos o en agronomía como biofertilizantes, e incluso pueden constituir una excelente fuente para fines biotecnológicos, tales como fuente de fermentación para la producción de quitinasas, o fuente de partida para la obtención de nano-quitina, siempre y cuando se desarrollen los procesos adecuados.
Por lo que los objetivos del presente trabajo han sido:
1. Preparación y caracterización de diferentes hidrolizados de las proteínas presentes en los subproductos del champiñón.
2. Diseño general de procesos biotecnológicos encaminados a la revalorización de subproductos derivados de la industria agroalimentaria.
3. Preparación de hidrolizados proteicos de la harina de tallos de champiñón 4. Caracterización de los hidrolizados proteicos.
- Caracterización electroforética
- Caracterización cromatográfica
- Composición aminoacídica
5. Estudio de las actividades biológicas
Actividad Antioxidante (Industria Nutracéutica)
Actividad Antidiabética (Industria Nutracéutica)
Inhibición de la actividad tirosinasa (Industria Alimentaria
6. Aplicaciones
En la industria agronómica (como biofertilizante).
Para utilizar estos subproductos de una manera efectiva, es necesario, en una primera etapa estabilizarlos en una forma fácilmente almacenable y segura, por lo que los tallos y piezas no comercializables de champiñón se ha estabilizado preparando una harina de tallo de champiñón (HTCH), mediante el secado con aire caliente (50 °C) y molino para obtener un polvo fino al que hemos almacenado en bolsas de plástico herméticamente cerradas, a 18 - 20 ºC en almacén, permaneciendo de esta manera estable al menos durante un año. El líquido de escaldado que representa un gran volumen, del orden de los 10.000 litros al día para una planta de tamaño pequeño/medio, y que habitualmente se vierte directamente a la red o a balsas para depuración, debido al elevado volumen es necesario reducirlo, lo que se logra mediante su concentración al vacío y a temperatura entre 65-70 ˚C, o mejor aún mediante osmosis inversa para evitar, en lo posible, la formación de productos de Amadori, obteniéndose un líquido de escaldado concentrado unas 10 veces (LE10X) donde los omponentes están concentrados y es fácilmente almacenable a 4 ˚C, en cámara fría, durante al menos 3 meses. Una vez estabilizados estos subproductos se ha procedido a la obtención de productos de alto valor añadido como:
La obtención de hidrolizados a partir de la HTCH para ello se prepararon mediante hidrólisis enzimática El 10% de HTCH resuspendido en agua y se ha hidrolizado en un pH-stat con control de pH, temperatura y agitación, utilizando una relación de E/S de 0.3%, con cuatro enzimas diferentes: Alcalase®, Flavourzyme®, Papaína y Bioprotease LA-450, obteniendo hidrolizados, que debido a su composición ricos en aminoácidos, oligopéptidos y péptidos potencialmente utilizables como biofertilizantes en agronomía, o como nutracéuticos en alimentación o en cosmética. Las endoenzimas, procedentes de Bacillus licheniformis: Alcalase® y Bioprotease LA-450, son las que mayor cantidad de producto solubilizan, 41,7±3.0% y 46,3±3,6%, respectivamente, mientras que la Papaína y la Flavourzyme®, mezcla predominante de exoproteasas bacterianas, presentan un rendimiento solubilizador más bajo, 26,3±2,3% y 23,0±1,7%, respectivamente. Con el fin de incrementar, en lo posible, el grado de hidrólisis, y por tanto la cantidad de material solubilizado se procedió a la realización de hidrólisis secuenciales, utilizando primero una endoproteasa y seguidamente una exoproteasa. Las hidrólisis secuenciales realizadas han sido las siguientes dos combinaciones: “Alcalase® + Flavourzyme®” y “Bioprotease LA-450 + Flavourzyme®”, 79,6±2,9% y 81,4±3,3%, respectivamente.
Para obtener información más detallada sobre la distribución del tamaño de las proteínas, péptidos, oligopéptidos y aminoácidos presentes en los hidrolizados, se procedió a su estudio por cromatografía de exclusión molecular
en una columna SuperdexTMpeptide 10/300 GL, que tiene un rango de resolución de 7000 a 100 kDa, los mayores porcentajes de dipéptidos y aminoácidos libres se encuentran para los hidrolizados obtenidos mediante hidrólisis secuencial con Alcalase®+Flavourzyme® y Bioproteasa+Flavourzyme®, 42,13% - 37,94% respectivamente.
El análisis aminoacídico muestra el contenido de los diferentes aminoácidos presentes en el hidrolizado obteniéndose que los mayores contenidos en AAH están presentes en HPTCHLA450, mientras que la mayor concentración de AAsCP y AAsCN se obtienen en HPTCHA+F, el mayor contenido de AAA se obtiene en HPTCHA y el mayor contenido de AAEs se encuentra en HPTCHLA450.
Estos resultados también muestran que la capacidad secuestradora del radical ABTS•+ por los HPTCH depende del tipo de proteasa utilizado para la obtención de los hidrolizados en las hidrólisis simples, obteniéndose la mayor capacidad secuestradora (menor EC50) cuando se utiliza la exoproteasa Flavourzyme® (EC50 = 0,13±0,02 mg/mL), y cuando se utiliza en combinación de las endoproteasas Alcalase® y Bioproteasa L450 (0,15±0,05 y 0,14±0,04, respectivamente), no observándose diferencias estadísticamente significativas para ninguna de las dos combinaciones estudiadas.
Estos resultados, al igual que para el radical ABTS•+, también muestran que la capacidad secuestradora del radical DPPH• de los HPTCH depende del tipo de proteasa utilizado en las hidrólisis simples, obteniéndose la mayor capacidad secuestradora (menor EC50) en el caso de utilizar la exoproteasa Flavourzyme® (EC50 = 0,33±0,02 mg/mL). En el caso de las hidrólisis secuenciales, al igual que anteriormente, no se observan diferencias estadísticamente significativas
para ninguna de las dos combinaciones de endoproteasa + exoproteasa estudiadas, obteniéndose valor de EC50, 0,47±0,05 y 0,44±0,06 g/mL para HPTCHA+F y HPTCHLA450+F, muy similares al obtenido para la hidrólisis simple con la endoproteasa.
Los HPTCH muestran una ligera actividad inhibidora de las dos hidrolasas, puede reducir eficazmente la absorción de glucosa e inhibiendo el aumento de la concentración de glucosa sanguínea postprandial, como actividad antidiabética. No observándose diferencias estadísticamente significativas entre los distintos HPTCH y el HTCHH2O. Si bien, estas inhibiciones son significativamente muy inferiores a la observada para el control positivo (Acarbosa). Por lo que se puede concluir que los HPTCH no presentan ventaja alguna a la hora de intentar reducir los niveles postprandiales de glucosa. Nuestros resultados son contrarios a los reportados por otros autores que sí encuentran una inhibición apreciable de estas hidrolasas utilizando hidrolizados de otros hongos comestibles enriquecidos en selenio, por lo que la mejora de la actividad antidiabética de los hidrolizados de las proteínas de hongos enriquecidos en selenio podría atribuirse a la incorporación de selenio en los péptidos integrantes de los hidrolizados y a posibles cambios conformacionales de estos inducidos por el selenio, que favorecería la interacción con la α-glucosidasa y la α-amilasa limitando su acción.
La inhibición de la actividad tirosinasa por los diferentes HPTCH, el HTCHH2O y un control positivo (ácido ascórbico). Todos los HPTCH inhiben claramente la actividad tirosinasa de una manera dosis dependiente, dentro del rango 0,5-3,0 mg/mL. Esta inhibición es mayor, estadísticamente significativa p<0,05, que la presentada por el HTCHH2O, pero claramente menor que el
control positivo. A pesar de ello, a concentraciones del orden de 1,5 g/mL y mayores la inhibición es del orden del 40%.
Los HPTCH, debido a las actividades biológicas descritas serían claramente aplicables como nutracéuticas o complementos nutricionales en el tratamiento de enfermedades asociadas con el estrés oxidativo, y en la industria alimentaria en la prevención de la oxidación de los alimentos evitando su deterioro y/o pardeamiento, estos hidrolizados, debido a su composición, también podrían encontrar aplicación en la agronomía moderna como biofertilizantes.
Una vez realizados estos ensayos de germinación se puede concluir que él LE al igual que los hidrolizados de la HTCH pueden ser utilizados como biofertilizantes. Pero al hacer la comparación entre estos dos, observamos que él LE preparado a concentraciones entre 5 y 10% es la mejor opción debido a que requiere de menos procesos y por lo tanto el costo es menor. Luego, teniendo en cuenta que estamos trabajando con un subproducto, esta sería una buena manera para su valorización, produciendo un producto de alto valor añadido, y contribuyendo al mantenimiento del medioambiente.
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Revalorización de los subproductos de la industria de hongos y setas comestibles. Aplicación a la obtención de productos de alto valor añadido
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oai:idus.us.es:11441/1333692024-02-13T08:56:30Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2022-05-17T06:35:03Z
2022-05-17T06:35:03Z
2022-03-18
Domínguez Martín, H. (2022). Posible papel diferencial de la autofagia en respuesta al estrés proteico en microglía y neuronas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/133369
En esta tesis doctoral hemos afrontado el estudio de mecanismos implicados en el mantenimiento de la proteostasis en dos tipos diferentes de células del sistema nervioso: microglía y neuronas. Para ello, se ha usado un modelo de estrés proteotóxico basado en la acumulación de proteínas tras el bloqueo del proteasoma con MG132, un inhibidor reversible del proteasoma.
Los resultados más relevantes muestran que, tanto los mecanismos implicados como la respuesta al estrés, son diferentes en los dos tipos celulares. Por una parte, el bloqueo del proteasoma induce un estrés celular que se manifiesta como estrés de retículo endoplasmático (RE), lo que provoca la activación de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR, por sus siglas en inglés). La UPR se trata de una respuesta homeostática, que trata de mitigar la situación de estrés y/o inducir la muerte celular por apoptosis cuando el daño resulta excesivo. Las neuronas muestran una activación de la UPR rápida, completa y eficiente, activándose especialmente la vía de IRE1-sXbp1 (con carácter de pro-supervivencia), que a su vez promueve una rápida recuperación de la homeostasis y bajos niveles de muerte celular. Por otra parte, la microglía presenta una activación de la UPR poco eficiente, especialmente de la vía IRE1-sXbp1, mientras que la vía de PERK-CHOP se activa de manera intensa y sostenida en el tiempo. Esta vía tiene un carácter pro-apoptótico, por lo que su activación en la microglía conlleva la apoptosis temprana y masiva de estas células.
Otro elemento objeto de estudio durante este trabajo ha sido la relación funcional entre el proteasoma y la autofagia. Resulta esencial la cooperación entre ambos sistemas de degradación de proteínas para la supervivencia celular en un ambiente de estrés proteico, como ya ha sido demostrado por este grupo en estudios tanto in vitro como in vivo. En este caso, nuestros resultados muestran que las células microgliales tienen un mayor flujo autofágico basal que las neuronas. Sin embargo, en un contexto de estrés proteico, las neuronas presentan un rápido, aunque suave, aumento de este flujo que resulta suficiente para eliminar las proteínas poli-ubiquitinadas. Por el contrario, la microglía no es capaz de degradar las proteínas poli-ubiquitinadas, que se van acumulando a lo largo del tiempo, a pesar de que se produce un fuerte aumento del flujo autofágico de manera lenta. Esto nos lleva a pensar que la activación de la autofagia en la microglía no sucede como respuesta a la
inhibición del proteasoma, sino frente a otro estímulo. Puesto que uno de los principales propósitos de la microglía es la fagocitosis, y teniendo encuenta que ciertos estudios indican que existe una contribución de la autofagia microglial a la degradación de los residuos de A, -sinucleína y mielina (característicos de las enfermedades de Alzheimer, Parkinson y ELA, respectivamente) tras su inclusión en los fagosomas desde el medio extracelular, proponemos que el estímulo activador de la autofagia microglial es la autofagocitosis de las mismas células microgliales que están muriendo debido al estrés de RE que se ha mencionado previamente.
Por último, también hemos estudiado el estado de activación de diferentes vías que podrían estar implicadas en la activación de la autofagia. En general, nuestros datos muestran claramente que existen diferencias en el estado de activación de estas vías en ambos tipos celulares.
Por un lado, la vía de mTORC1 se encuentra activa en las neuronas a lo largo de todo el tiempo ensayado, lo cual es compatible con una actividad autofágica continuada, mientras que en la microglía esta activación aparece retrasada en el tiempo y es de corta duración, lo que concuerda con el comportamiento de la autofagia en estas células. Además de esto, la vía AKT/GSK-3/-catenina también muestra un comportamiento diferencial. En las neuronas, AKT parece estar activado por la vía PI3K/PDK1, mientras que en la microglía esta vía se encuentra inhibida, siendo AKT activado en este caso por la vía mTORC2. Al estudiar el estado de fosforilación de AKT, encontramos que se encuentra fosforilado en distintos residuos dependiendo del tipo celular, lo que se asocia con una diferente selección de sustrato. De hecho, aunque AKT está activa en ambos tipos celulares, GSK-3 se encuentra activa en la microglía a lo largo de todo el tiempo ensayado, mientras que en las neuronas se encuentra inhibida de manera temporal, al tiempo que FOXO3 se mantiene activo en las neuronas y se inhibe en la microglía. Por último, la proteína -catenina (efectora de la vía Wnt/-catenina) también muestra comportamientos diferentes en función del tipo celular. En las neuronas no se detecta activación de esta vía, lo que nos lleva a pensar que la -catenina se está degradando a través de la autofagia. Por el contrario, en la microglía se produce una acumulación tiempo dependiente de esta proteína, lo que sugiere que se está dando la activación canónica de la vía Wnt/-catenina. Además,
esta vía es capaz de modular la autofagia, por lo que podemos estar observando un mecanismo regulador de la autofagia respecto al material a degradar.
En su conjunto, los datos obtenidos a lo largo de este trabajo se pueden interpretar desde un punto de vista evolutivo en cuanto a que las neuronas son células post-mitóticas, diferenciadas y sin capacidad proliferativa. Por ello, resulta razonable que las vías activas se centren en la degradación del material intracelular acumulado, mejorando así los niveles de estrés y permitiendo la supervivencia neuronal. Por su parte, las células microgliales presentan capacidad proliferativa, y su función es la de vigilar el medio extracelular, eliminando los agentes patógenos o citotóxicos del parénquima cerebral. De esta forma, resulta probable que los esfuerzos en estas células se centren en degradar el material extracelular capturado por fagocitosis, dejando en un segundo plano la supervivencia celular.
Nuestros resultados son compatibles con estudios en pacientes de la enfermedad de Alzheimer donde se observa degeneración microglial, la cual es paralela al avance de los estadios Braak de esta patología.
En resumen, nuestros resultados ponen de manifiesto diferencias significativas tanto a nivel molecular como funcional entre la microglía y las neuronas en respuesta al estrés proteico. En concreto, la función de la autofagia es diferente en ambas líneas celulares, así como la activación de diversas vías de señalización que pudieran estar regulando esta diferencia funcional. Además, este trabajo deja abierta diversas líneas de investigación, tales como determinar de manera exacta la/s vía/s de señalización de la activación de la autofagia en ambos tipos celulares en respuesta al estrés proteico, o evaluar el papel de la proteína quinasa AKT en la regulación de la autofagia canónica y no canónica.
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Posible papel diferencial de la autofagia en respuesta al estrés proteico en microglía y neuronas
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2021-11-18T11:13:34Z
2021-11-18T11:13:34Z
2021-06-01
García Delgado, A.B. (2021). Terapias avanzadas para enfermedades degenerativas de la retina. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/127483
Las enfermedades degenerativas de la retina (EDR) son un grupo heterogéneo
de patologías, algunas hereditarias y otras con un origen complejo, que
producen una pérdida progresiva de las células de la retina con la consiguiente
pérdida de la agudeza visual pudiendo avanzar hasta producir una ceguera
total. En los últimos años y gracias al desarrollo de terapias avanzadas como la
terapia génica y celular muchos casos de ceguera podrían ser potencialmente
tratables.
El descubrimiento de las células madre de pluripotencia inducida o iPSC ha
aportado una fuente celular ilimitada con gran potencial ya que gracias a sus
propiedades son un instrumento prometedor para el estudio de enfermedades,
así como para ser utilizadas en medicina regenerativa e ingeniería tisular. La
edición génica es una novedosa tecnología con la se puede manipular con
precisión una secuencia del genoma humano para lograr un efecto terapéutico
mediante la cual se pueden corregir mutaciones que causan enfermedades,
añadir genes terapéuticos a sitios específicos del genoma y eliminar genes
letales o secuencias del genoma.
En este trabajo se han generado y caracterizado con éxito dos líneas de iPSC
a partir de muestras de sangre periférica de pacientes con EDR, como son la
degeneración macular asociada a la edad (DMAE) y la retinosis pigmentaria
(RP), con el fin de establecer modelos celulares de cada una de las
enfermedades y terapia celular de reemplazo. Estas líneas nos han permitido
conocer las bases celulares y moleculares que llevan al desarrollo de la
enfermedad. Posteriormente, enfocándonos en la medicina regenerativa, con el
objetivo de buscar nuevas terapias para tratar a pacientes con DMAE, las iPSC
fueron diferenciadas hacia células de epitelio pigmentario de la retina (EPR).
Las células obtenidas fueron caracterizadas y trasplantadas en diferentes
modelos animales. Se demostrado que las células de EPR sobreviven y
mantienen su fenotipo y orientación sin ningún efecto adverso local o sistémico.
Por último, en la línea de iPSC obtenida de la muestra de sangre periférica de
un paciente con RP causada por una mutación en el gen EYS, se ha
pretendido corregir la mutación mediante el uso de CRISPR/Cas9. En este
caso aunque se corrigió la fase de lectura en el alelo mutante, no se logró
obtener la misma secuencia presente en el alelo silvestre.
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Terapias avanzadas para enfermedades degenerativas de la retina
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oai:idus.us.es:11441/149642024-02-14T19:18:28Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690com_11441_26072col_11441_11504col_11441_11517col_11441_10998col_11441_26077
2014-11-27T11:40:24Z
2014-11-27T11:40:24Z
2005
Martínez de Pablos, R. (2005). Implicación de la dopamina en los procesos degenerativos del sistema nigroestraido. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/14964
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/14964
Nuestro grupo lleva años estudiando los mecanismos de degeneración del sistema dopaminérgico nigroestriado que podrían justificar o estar implicados en la aparición de la enfermedad de Parkinson. Entre las características comunes que se han descrito en las zonas afectadas, sustancia negra y estriado, nos pareció de gran interés el estudio de los marcadores que demuestran la existencia de inflamación. Esta inflamación podría ser un hecho secundario de la enfermedad. La muerte celular generalmente conlleva una importante inducción de la inflamación. Sin embargo también, podría ocurrir que la inflamación tuviera una acción directa sobre la neurodegeneración o que al menos pudiera participar en la progresión de la misma ya que se trata de un proceso crónico. Con el fin de estudiar estas posibilidades nuestro grupo desarrolló un modelo animal mediante la inducción del proceso inflamatorio en el SNC. La inducción de la inflamación se produjo por la inyección de lipopolisacárido, una de las sustancias proinflamatorias más conocidas y utilizadas en investigación. En este modelo se demostró que el LPS era capaz de inducir inflamación en el SNC, aunque no todas las estructuras eran igualmente sensibles a este compuesto. La más sensible fue la sustancianegra, estructura especialmente implicada en la enfermedad de Parkinson. Tampoco todos los sistemas neuronales se comportaron del mismo modo, siendo especialmente sensibles los cuerpos dopaminérgicos de la sustancia negra, que precisamente son los cuerpos que degeneran en la enfermedad de Parkinson. Este modelo demostró de una manera fehaciente que el proceso inflamatorio puede ser capaz por sí mismo de inducir la degeneración del sistema dopaminérgico de la sustancia negra, y que por lo tanto podría estar implicado al menos en la progresión de su degeneración cuando el desencadenante de la degeneración fuera otra causa y conllevara, como se describe in vivo, la inducción de la inflamación. En este proyecto, nos proponemos utilizar este modelo para buscar las causas que pudieran estar implicadas en la especial sensibilidad de los cuerpos neuronales dopaminérgicos al proceso de inflamación. Esta especial sensibilidad se desprende no sólo de que la sustancia negra sea la estructura más sensible, que en este caso se justifica por ser la estructura del SNC que presenta mayor concentración de microglía, lo que conllevaría una máxima activación de estas células y la gran producción de sustancias que participan en la inflamación tales como citokinas y radicales libres, con la consiguiente acción toxica. Sin embargo, dentro de la sustancia negra los cuerpos neuronales dopaminérgicos son más sensibles que los de otros tipos neuronales. Para este estudio, proponemos que una de las características más significativas del sistema dopaminérgico es la presencia de elevadas concentraciones de dopamina endógena. Se sabe que la dopamina, al menos en determinadas condiciones, se comporta como un compuesto tóxico productor de estrés oxidativo. Por ello vamos a estudiar la posible influencia de la dopamina en el proceso degenerativo inducido por la inyección intranigral de LPS.
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Neurología
Implicación de la dopamina en los procesos degenerativos del sistema nigroestraido
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2021-04-08T17:45:54Z
2021-04-08T17:45:54Z
2008-06-13
García Heredia, J.M. (2008). Análisis comparado en animales y plantas de la función del citocromo c respiratorio en el proceso de muerte celular programada. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/106892
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Análisis comparado en animales y plantas de la función del citocromo c respiratorio en el proceso de muerte celular programada
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2016-04-08T08:24:39Z
2016-04-08T08:24:39Z
2016-01-22
http://hdl.handle.net/11441/39787
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/39787
The present thesis is a compilation of several experiments about the use of adiposederived mesenchymal stem cells (ADSCs) in cell therapy. The study focus on the behavior, molecular mechanisms and environment changes of these cells during aging and under oxidative stress, that could determine its efficacy in Regenerative Medicine. Adipose tissue has proven to serve as an abundant, accessible and rich source of adult stem cells with multipotent properties suitable for tissue engineering and regenerative medical applications. In the first part, we presented and described in detail the isolation methods, expansion, differentiation and cryopreservation of adipos-derived stem cells (ADSCs). The International Society for Cellular Therapy (ISCT) has proposed a set of standards to define human mesenchymal stem cells (hMSCs) for laboratory investigations and preclinical studies. ISCT believes this minimal set of standard criteria will foster a more uniform characterization of MSCs and facilitate the exchange of data among investigators. These criteria are adherence to plastic in standard culture conditions; “in vitro” differentiation into osteoblasts, adipocytes, and chondroblasts; specific surface antigen expression in which 95% of the cells express the antigens CD105, CD73, and CD90, with the same cells lacking (2% positive) the antigens CD45, CD34, CD14 and CD11b, CD79a or CD19, and HLA-DR. In case of murine models these criteria have not been established yet, though many authors try mimic them. There is considerable evidence that cellular senescence and replicative exhaustion impair the regenerative potential of adult stem cells, a characteristic they share with normal somatic cells. The effects of oxidative stress on MSCs are still unknown. Reactive oxygen species (ROS) are oxygen-derived small molecules, which react readily with a variety of chemical structures such as proteins, lipids, sugars, and nucleic acids, that lead to cellular damage in aging. Nowadays, it is increasingly recognized that ROS are involved in the regulation of cell function despite the fact that for many years they were considered to be harmful elements in biological systems. Despite the enormous effort that has thus far been invested into clinical trials, the importance of ROS in the outcome has not sufficiently considered. It has been proposed that the high antioxidant capacity of MSCs makes them ideal for the treatment of pathologies in which tissue damage is linked to oxidative stress. Nonetheless, not all levels of ROS cause cell damage by oxidation and nitration of macromolecules. It is currently believed that only unregulated levels of ROS are harmful, while regulated ROS production promotes essential signaling pathways, which regulate cell functions such as cell proliferation, differentiation, survival, and apoptosis. Redox regulation or controlled ROS generation is the net effect of a subtle balance between ROS generation and neutralization/utilization by cellular antioxidant systems. Thus, oxidative stress represents an unbalanced situation in which ROS generation exceeds antioxidant systems leading to tissue damage. The responses of adult human stem cells to different stress stimuli such as oxidative stress, heat shock, and γ-radiation have been widely studied in the context of tissue repair, tissue engineering, and transplantation. As far as this thesis is concerned, we show how MSCs promote the increased adipogenic fate and suppresses the osteogenic lineage mediated by ROS, due to a deregulation of pluripotencial factors Nanog and Sox2. Recently, MSCs therapies have come under criticism as, despite decades of research, relevant translational questions of MSCs biology and function remain unanswered. Previous studies showed that MSCs suffer from several drawbacks hampering clinical applications including, decreased number and quality of cells with donor age, and loss of proliferation and differentiation potential upon expansion “in vitro”. These observations pose a significant challenge that must be overcome in order to enable cellular therapies for older patients, the population mostly in need for tissue replacement. Hereby, aged-related variations could be identified, with correlation analyses of functional properties like protein homeostasis, resistance to oxidative stress, differentiation capability and pluripotentiality. Besides the individual age of the cell, stem and progenitor cells functions are influenced by the cellular environment, i.e. the niche and the architecture of the tissue they reside in. An other issue, we have addressed how to track the processes that happen before, during and after the stem cell engraftment using gene reporters in investigation. Optical imaging technologies combined with the use of genetically encoded fluorescent and luminiscent proteins have enabled the visualization of stem cells over periods of time in vivo and ex vivo. Bioluminiscence imaging (BLI) provides a means for monitoring physiological processes in real time, ranging from cell survival to gene expression to complex molecular processes. BLI provides unmatched sensitivity because of the absence of endogenous luciferase expression in mammalian cells and the low background luminescence emanating from animals. In the field of stem cell therapy, BLI provides an unprecedented means to monitor the biology of these cells in vivo. Our results show that multimodal tracking of adipose-derived stem cells labeled in central nervous system, allows localization as well as cell identification after engraftment. This system has the advantages of avoiding the dilution with each cellular division, accurate to assess cell viability to track engraftment, have a linear relationship between substrate and photon emission and mark cells to track them by immunofluorescence and immunohistochemistry cells. Some disadvantages are gene reporter is inserted in DNA in unspecific places, not good promoters not good expression and signal, and the substrate distribution depends on many factors like delivery route, type of anesthesia and the host environment can also influence. To end up, MSCs should have the potential to stimulate the endogenous neurogenesis. It is commonly assumed that MSCs exert their therapeutic effects through immunomodulatory and trophic factor release rather than through cell replacement. It has been shown that ADSCs can ameliorate Parkinson disease symptoms by autologous transplantation into the rat. Thus far, the mechanisms of potential neuroprotective and regenerative effects of ADSCs are not fully understood because they have only been investigated several weeks after transplantation. In our case, we have studied the effect in a later period of time (four months). Although the acute effects would be particularly interesting, given that MSCs are often not detectable anymore at later time points, raising the question of how these cells actually achieve their results.
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Estudio de la viabilidad y diferenciación de las células madre mesenquimales de tejido adiposo en condiciones de estrés oxidativo y envejecimiento. Posibilidad de su uso terapéutico e influencia del factor de elongación 2
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2020-02-04T17:22:18Z
2020-02-04T17:22:18Z
2008-06-05
Pulido Gómez, P. (2008). Mecanismos de protección frente a daño oxidativo en plantas mediados por tiorredoxinas y peroxirredoxinas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/92742
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Mecanismos de protección frente a daño oxidativo en plantas mediados por tiorredoxinas y peroxirredoxinas
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2020-04-10T12:06:40Z
2020-04-10T12:06:40Z
2004
https://hdl.handle.net/11441/95034
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Estudio proteómico y de marcadores de oxidación en situaciones patológicas relacionadas con el estrés oxidativo: efecto protector del ácido fólico del glutation
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2018-04-13T07:32:21Z
2018-04-13T07:32:21Z
2004
Cordobés López,Jesús (2004). Estudio de las variaciones del locus genético de la apolipoproteína C-III que modulan el metabolismo lipoproteico y la respuesta a simvastatina en diabéticos tipo 2 con dislipemia (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sev
https://hdl.handle.net/11441/72680
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Diabetes
Estudio de las variaciones del locus genético de la apolipoproteína C-III que modulan el metabolismo lipoproteico y la respuesta a simvastatina en diabéticos tipo 2 con dislipemia
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2018-06-08T06:45:22Z
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2008
Olmedo Verd, E.d. (2008). Expresión y función del regulador transcripcional NTCA en el desarrollo de los heterocistos en la cianobacteria anabaena SP.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/75864
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Expresión y función del regulador transcripcional NTCA en el desarrollo de los heterocistos en la cianobacteria anabaena SP.
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2020-04-16T14:48:10Z
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1980-04
https://hdl.handle.net/11441/95336
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Modificaciones de los receptores hepáticos de insulina durante el ayuno
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oai:idus.us.es:11441/453842024-02-12T22:07:01Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2016-09-26T09:22:27Z
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2011-05-11
Torres Canalejo, M. (2011). Factores implicados en la neurodegeneración y el aumento de aβ oligomérico soluble durante el proceso de envejecimiento en un modelo ps1m146lxappsl de la enfermedad de alzheimer. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/45384
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/45384
Los Objetivos del Trabajo son:
1. Identificación de la presencia de péptido β-amiloide soluble en el medio extracelular y caracterización de las posibles form as oligoméricas presentes en un modelo murino PS1M146LxAPP751-SL de la enfermedad de Alzheimer durante el proceso de envejecimiento del animal.
2. Determinación de la capacidad de las formas oligoméricas de Aβ para interrumpir las vías de señalización mediadas por neurotrofinas.
2.1 Estudio de la implicación del péptido APPα soluble en la fosforilación de GSK-3β a través de los receptores de insulina e IGF-1 y de la vía PI3KAKT- GSK-3β.
2.2 Estudio del efecto de las formas oligoméricas de Aβ en la inhibición de la fosforilación de fosforilación de GSK-3β a través de los receptores de insulina e IGF-1 y de la vía PI3K-AKT-GSK-3β.
3. Estudio de los mecanismos moleculares y celulares posiblemente implicados en un incremento de la concentración de formas oligoméricas de Aβ durante el proceso de envejecimiento en los animales PS1xAPP.
3.1 Estudio del procesamiento de la proteína APP y de las enzimas implicadas en la ruta de producción del β-amiloide.
3.2 Estudio de la implicación de los dominios de membrana del tipo Raft lipídicos en el procesamiento de APP.
3.3 Identificación de las evidencias celulares y bioquímicas asociadas a la alteración en los sistemas de transporte vesicular a nivel axonal.
3.4 Estudio de la acumulación de los precursores del β-amiloide en vesículas autofágicas y de las deficiencias en la degradación de las proteínas acumuladas por vía lisosomal.
3.5 Estudio de la acumulación del péptido β-amiloide en sinaptosomas como posible origen de los oligómeros solubles de Aβ.
3.6 Estudio de las formas oligoméricas de Aβ presentes en las placas, como posible fuente de oligómeros solubles de Aβ. Ver menos
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Factores implicados en la neurodegeneración y el aumento de aβ oligomérico soluble durante el proceso de envejecimiento en un modelo ps1m146lxappsl de la enfermedad de alzheimer
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2020-05-07T14:46:10Z
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1986-10
https://hdl.handle.net/11441/96251
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Estudio de una glutamato deshidrogenasa halofílica
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oai:idus.us.es:11441/663622018-03-12T09:52:43Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2017-11-21T13:30:02Z
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1999-07-12
Levitski, K. (1999). Fermentación acética : estudio de las enzimas implicadas en el proceso. Inmovilización en alginato para la mejora de la producción. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/66362
El trabajo que se recoge en esta memoria se enmarca dentro de la mejora del proceso de acetificación. Este estudio tendrá tres puntos de vista, el microbiológico, el biotecnológico y el bioquímico. Lógicamente puede resultar ser muy amplio, por lo que requiere que se proyecte de una forma sistemática. Para llevar a cabo este trabajo nos hemos marcado los siguientes objetivos: 1º.- Identificaci ón de las bacterias que intervienen en el proceso de la fermentación del vinagre utilizado por la Industria Carbonell S.A. 2º.- Características biológicas de los citados gérmenes. Dentro de estas hay que señalar: A) Los requerimientos fundamentales para su crecimiento y viabilidad. Características cualitativas del medio, con especial atención al contenido de metales y productos utilizados comúnmente en la industria vinícola. B) Condiciones físico-químicas del medio para su crecimiento y viabilidad. Estudios del crecimiento en función de fuerza iónica, pH, temperatura y oxigenación. 3º.- Estudio de las características bioquímicas de las citadas cepas en las distintas condiciones antes descritas. En este estudio se hará una especial atención a las enzimas fundamentales del proceso: alcohol deshidrogenasa y acetaldehído deshidrogenasa. Observando las alteraciones que pueden sufrir estas actividades según los cambios ambientales a los que son sometidas las cepas aisladas. 4º.- Producción de ácido acético por las bacterias aisladas inmovilizadas en alginato y por las enzimas purificadas, responsables de la oxidación de etanol.
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Fermentación acética : estudio de las enzimas implicadas en el proceso. Inmovilización en alginato para la mejora de la producción
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oai:idus.us.es:11441/965642024-02-17T17:11:07Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-05-13T14:11:35Z
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1987-04
https://hdl.handle.net/11441/96564
Nuestro principal objetivo en este trabajo ha sido estudiar los cambio que se pueden producir en el desarrollo de las distintas estructuras visuales sin el estimulo sensorial. La medida de la aminas biogenas la hemos realizado en un cromatografo liquido acoplado a un detector electroquimico. La concentracion de triptofano sufre una disminucion de su concentracion duranteel desarrollo tanto en las distintas estructuras cerebrales estudiadas como enla sangre. La serotonina tiene un desarrollo postnatal con una subida de su concentracion en todas las edades a excepcion de la corteza visual que a los 8 dias alcanza su nivel adulto. Los animales enucleados tienen un perfil de desarrollo muy similar al de los normales no encontrando en general diferencias significativas salvo en coliculo superior. Las capas superficiales del coliculo superior tienen la inervacion serotoninergica mas densa las cualesreciben aferentes de la retina. Por lo que debe de existir una interaccion entrelas terminales retinianas y la serotonina presente en las capas superficiales. Nuestros resultados parecen corroborar esta hipotesis puesto que la eliminacion de las teminales retinianas produce un aumento de la serotonina en el coliculo superior de enucleados. Dentro de las catecolaminas la dopamina (da) la hemos encontrado en una concentracion muy baja en todas las estructuras visuales alcanzando su nivel adulto a edades muy tempranas. La noradrenalina sin embargo tiene un desarrollo postnatal. En los animales enucleados no observamos diferencias en las catecolaminas con respecto a los normales excepto en la da del coliculo superior en donde hemos observado una mayor concentracion en los animales enucleados. Durante el envejecimiento encontramos un incremento del triptofano. Con respecto a la serotonina el geniculado lateral tiene un aumento en su concentracion y la corteza visual una disminucion sin embargo en el coliculo superior y en el tala
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Estudio de la concentración de las aminas biógenas en distintas estructuras cerebrales durante el desarrollo, el envejecimiento y la deprivación visual
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oai:idus.us.es:11441/940112024-02-14T13:48:29Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-03-06T18:59:48Z
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2002-03-21
Calderón Osuna, E. (2002). Estudio del papel de la quimiotaxis para polimorfonucleares neutrófilos en los mecanismos de la pleurodesis con talco. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/94011
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Estudio del papel de la quimiotaxis para polimorfonucleares neutrófilos en los mecanismos de la pleurodesis con talco
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2018-04-13T07:32:22Z
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2006
Ruiz López, Noemí (2006). Caracterización del sistema de Aciltransferasas en semillas de girasol (Helianthus annuus L.): clonación de una ferredoxina gererotrófica (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/72681
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Girasoles
Caracterización del sistema de Aciltransferasas en semillas de girasol (Helianthus annuus L.): clonación de una ferredoxina gererotrófica
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oai:idus.us.es:11441/685672024-02-13T09:37:29Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2018-01-10T08:32:25Z
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2014-12-22
Pastrana León, A.M. (2014). Incidencia y epidemiología de nuevos hongos patógenos de fresa en la provincia de Huelva. Desarrollo de herramientas biotecnológicas y aplicación de otras estrategias de control. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/68567
España es el cuarto productor mundial de fruto de fresa. Su cultivo tiene lugar en dos etapas y en dos zonas geográficas diferentes de la península. El material de partida, las plantas madre, proceden en su mayoría de EEUU (California y Florida). La producción de plantas de fresa tiene lugar al aire libre, entre abril y mayo, en suelos arenosos de viveros de tierras altas de Castilla y León (viveros de altura). Tras la acumulación de horas-frío, se consigue una adecuada multiplicación vegetativa y madurez fisiológica. Estas plantas son recolectadas durante los meses de septiembre y octubre, y enviadas a las zonas de producción de fruto de la provincia de Huelva, donde tiene lugar su desarrollo vegetativo, floración y fructificación, entre los meses de octubre a junio.
El cultivo de la fresa en España está seriamente amenazado por la emergencia o reemergencia de hongos patógenos de suelo que infectan a este cultivo. En esta Tesis Doctoral se ha constatado la presencia de tres hongos patógenos de fresa (Fusarium oxysporum, Macrophomina phaseolina y Phytophthora cactorum) en viveros de altura de Castilla y León y en campos de producción de fruto de la provincia de Huelva. Para ello, y como primera medida preventiva de control, se han desarrollado y aplicado métodos moleculares de diagnóstico, consistentes en i) PCR en tiempo real para su detección y cuantificación de una manera sensible, específica, rápida y fiable y ii) secuenciación de regiones variables del genoma de cada hongo para su identificación y análisis filogenético. Paralelamente, se ha testado la patogenicidad de aislados de Fusarium spp. procedentes de muestras de suelo y plantas sintomáticas de campos de producción mediante i) pruebas de patogenicidad y ii) detección por PCR de marcadores de patogenidad descritos en otras formae speciales de F. oxysporum (el factor de transcripción ftf1) y en aislados patógenos de F. oxysporun f. sp. fragariae (el fragmento fofra). La incidencia de aislados patógenos de F. oxysporum en el cultivo de la fresa es prácticamente nula, pues desde su detección en 2008 por Arroyo y col., (2009) y a pesar de que ha aumentado la presencia de este hongo en viveros de altura y campos de producción a lo largo de las tres campañas prospectadas, sólo se ha detectado un aislado de F. oxysporum capaz de ocasionar enfermedad en plantas de fresa. Los marcadores de patogenicidad descritos no han permitido distinguir aislados de F. oxysporum patógenos de los no patógenos. Sin embargo, estos estudios de prospección y caracterización patogénica han permitido la detección de un nuevo patógeno para el cultivo de la fresa: Fusarium solani, capaz de provocar enanismo, marchitez y muerte ocasional de las plantas. Los análisis filogenéticos permitieron determinar que la población de F. solani del cultivo de la fresa es la que posee mayor diversidad nucleotídica intrapoblacional y la que tiene mayor distancia genética respecto al resto de poblaciones de Fusarium estudiadas.
Por otro lado, M. phaseolina se detectó en las dos regiones geográficas del cultivo de la fresa, en suelos de viveros de altura, donde no se había referido con anterioridad, y en suelos y plantas sintomáticas de campos de producción. Debido a su ausencia en plantas madre prebase y plantas hija certificadas, se sugiere que el origen de la infección con M. phaseolina podría estar en los suelos de campos de producción de fruto y que los productos químicos que se usan para su desinfestación al inicio de cada campaña (generalmente 1,3-D+CP) no son suficientemente eficientes para eliminar este patógeno.
P. cactorum, a pesar de ser un patógeno incluido en el ¿Reglamento técnico de control y certificación de plantas de vivero de frutales¿, se ha detectado también en distintos estadios de este cultivo, en suelos sin desinfestar de viveros de altura, en plantas hija certificadas y en suelos y plantas sintomáticas de campos de producción de fruto. Se sugiere por tanto que la fuente de inóculo de este patógeno se encuentra en los suelos no eficientemente desinfestados de estos campos, donde este patógeno sobrevive campaña tras campaña. La presencia de P. cactorum también se ha relacionado con el cultivar de fresa que se cultiva en una campaña determinada, siendo en nuestro estudio más frecuente en plantas `Fortuna¿ que en `Sabrina¿,`Splendor¿ o `Primoris¿.
En un intento por desarrollar estrategias preventivas de control basadas en la detección temprana de estos hongos en el cultivo de la fresa, en este trabajo de tesis se ha desarrollado una herramienta molecular consistente en una polisonda para la detección simultánea de tres hongos patógenos de fresa: F. oxysporum f. sp. fragariae, M. phaseolina y Verticillium dahliae. Esta sonda permite la detección específica de estos hongos en material vegetal infectado permitiendo el análisis simultáneo de un gran número de muestras. Este sistema se podría aplicar en programas de certificación de plantas de vivero de fresa como estrategia de prevención, evitando así la introducción de hongos patógenos en campos de cultivo.
En este trabajo se han llevado a cabo estudios de rango de huéspedes para comprobar si aislados patógenos de fresa, pertenecientes a los complejos de especies de F. oxysporum y F. solani, son capaces de ocasionar enfermedad en otros cultivos o, por el contrario, son específicos de fresa. A su vez, se ha pretendido determinar si las formae speciales de F. oxysporum descritas como patógenos para otros cultivos son capaces de causar enfermedad en el cultivo de la fresa. Estos estudios epidemiológicos son de gran importancia en el diseño de las rotaciones de cultivos. Aunque el cultivo de fruto de fresa en nuestro país se desarrolla actualmente como monocultivo, es importante llevar a cabo este tipo de estudios epidemiológicos como visión de futuro, al tratarse de hongos patógenos con una elevada capacidad de supervivencia en el suelo. Los resultados han demostrado que F. oxysporum f. sp. fragariae patógeno de fresa (Fof) es capaz de infectar a plantas de ajo, espárrago y tomate, aunque la severidad de los síntomas causados en estos cultivos es mucho menor que los causados por aislados de F. oxysporum patógenos de cada uno de ellos (F. oxysporum f. sp. cepae, F. oxysporum f. sp. asparagi y F. oxysporum f. sp. radicis-lycopercisi, respectivamente). Del mismo modo, se determinó que los aislados de F. oxysporum patógenos de ajo, espárrago y tomate fueron capaces de infectar plantas de fresa in vitro y cultivadas en sustrato, aunque sólo causaron síntomas en condiciones in vitro y éstos fueron poco severos. Por otro lado F. solani patógeno de fresa no resultó específico para el cultivo de la fresa ya que produjo enfermedad en ajo, espárrago y tomate, disminuyendo el vigor de las plantas y afectando por tanto su producción.
Una vez que los hongos se han establecido en el cultivo, es importante contar con medidas de control eficaces para evitar su propagación y disminuir los daños. Debido a la prohibición por parte de la EU de la comercialización y uso de la gran mayoría de las sustancias activas utilizadas para la desinfestación del suelo en el cultivo de la fresa, se han buscado alternativas no químicas eficaces para el control de hongos patógenos de suelo y a la vez respetuosas con el medioambiente y la salud humana. En este trabajo se ha evaluado la eficacia de dos productos comerciales, uno de ellos basado en la cepa T18 de Trichoderma asperellum (Prodigy®) y el otro compuesto por dos especies de Bacillus, B. megaterium B157 y B. laterosporus B197 (Fusbact®) en el control de las enfermedades del cultivo de la fresa provocadas por M. phaseolina y F. solani. Para ello, se llevaron a cabo enfrentamientos duales in vitro, y ensayos en cámara de cultivo o invernadero, y en condiciones de campo.
En los enfrentamientos duales realizados in vitro, se observó el efecto antagónico de los dos agentes de biocontrol frente a M. phaseolina y F. solani. Ambos fueron capaces de inhibir el crecimiento radial de los dos patógenos en más de un 30%. En los experimentos llevados a cabo in vivo, tanto en macetas en condiciones controladas como en condiciones de campo, el formulado comercial basado en T. asperellum T18 mostró su eficacia en el control biológico de M. phaseolina y F. solani cuando se aplicó por inmersión de las raíces y la corona de las plantas en una suspensión del producto, antes de su trasplante. La efectividad de Bacillus spp. como agente de biocontrol de M. phaseolina y F. solani fue menos consistente que la mostrada por T. asperellum T18, variando su eficacia en función de las condiciones experimentales. En este trabajo se ha demostrado que, los formulados biológios basados en T. asperellum y Bacillus spp. utilizados de forma preventiva y aplicados por inmersión podrían constituir una estrategia eficaz y alternativa al uso de los fungicidas químicos en la lucha contra la Podredumbre carbonosa y la Fusariosis ocasionada por F. solani en el cultivo de la fresa.
Esta Tesis Doctoral aporta conocimientos sobre la presencia y el posible origen de las enfermedades provocadas por los hongos patógenos F. oxysporum, M. phaseolina y P. cactorum en el cultivo de la fresa. Se han desarrollado medidas preventivas de control basadas en la detección temprana de estos patógenos en material vegetal que podrían ser incluidas en protocolos de certificación de plantas de fresa. Se han llevado a cabo estudios epidemiológicos sobre la capacidad infectiva de especies patógenas de F. oxysporum y F. solani en otros cultivos hortícolas de interés económico en Andalucía. Además, se propone el uso de agentes de control biológico como medidas de control alternativas al uso de productos químicos. Todas estas medidas están encaminadas a ofrecer una mayor garantía fitosanitaria del material vegetal y a reducir las pérdidas económicas causadas por la infección de estos patógenos en el cultivo de la fresa.
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Hongos
Protección de cultivos
Control biológico
Biología molecular vegetal
Incidencia y epidemiología de nuevos hongos patógenos de fresa en la provincia de Huelva. Desarrollo de herramientas biotecnológicas y aplicación de otras estrategias de control
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2020-05-15T14:28:41Z
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2005-09-26
Gómez Álvarez, M.I. (2005). Optimización de la producción de esporas y extractos proteicos de cepas industriales de Trichoderma para su aplicación en control biológico. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/96758
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Optimización de la producción de esporas y extractos proteicos de cepas industriales de Trichoderma para su aplicación en control biológico
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2020-06-18T18:58:20Z
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2020-06-04
Caballero Jiménez, P. (2020). Proceso bifásico (físico-fermentativo) para la conversión de lodos de depuradora en bioestimulantes: evaluación funcional y diseño de planta piloto. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/98014
La producción de lodos de depuradora, como principal residuo del tratamiento de aguas
residuales, presenta una tendencia creciente y supone un problema de ámbito global,
especialmente para las estaciones depuradoras de aguas residuales (EDAR) de pequeño y
mediano tamaño que no cuentan en sus instalaciones con medios para su gestión.
Considerado también como un subproducto, el lodo de depuradora puede suponer una
fuente de recursos de interés para la producción de bioestimulantes, cuyo campo se
encuentra en auge y en continua búsqueda de nuevas materias primas para el desarrollo
de los mismos.
Como alternativa al compostaje, que actualmente es la principal vía para la gestión de
lodos, este trabajo de tesis doctoral propone un modelo replicable en EDARs de pequeño
y mediano tamaño, por el que los lodos son transformados en un complejo bioestimulante
con mayor valor añadido que el compost. Este modelo se basa en un proceso que integra
dos etapas: un pretratamiento físico seguido de una fermentación aeróbica controlada. La
primera fase consiste en un tratamiento a alta presión y temperatura mediante la inyección
de vapor de forma directa, seguido de una descompresión súbita que consigue sanitizar el
producto, aumentar el contenido soluble y aumenta la biodisponibilidad de la materia
orgánica, haciéndolo más susceptible a ser fermentado. La etapa fermentativa, en
condiciones controladas, es llevada a cabo por Bacillus licheniformis que, por acción del
secretado enzimático, aumenta aún más el contenido soluble y la biodisponibilidad del
producto, otorgándole propiedades bioestimulantes. El complejo bioestimulante obtenido
está formado por esta rizobacteria promotora del crecimiento en plantas (PGPR), su
secretado, rico en enzimas degradativas, un componente soluble, constituido
principalmente por un hidrolizado proteico y otras biomoléculas altamente
biodisponibles, y un componente orgánico insoluble accesible a la degradación
microbiana como resultado del pretratamiento físico y de la acción microbiana.
En esta tesis doctoral se muestran los estudios realizados para diseñar el proceso
englobado en la unidad de fermentación, así como su implementación a escala
demostrativa. Así mismo, se han realizado estudios funcionales para evaluar los
productos obtenidos. Son destacables la capacidad de B. licheniformis para degradar
compuestos xenobiótiocos tóxicos presentes con alta frecuencia en los lodos de
depuradora, así como la capacidad del complejo bioestimulante, principalmente de la
fracción soluble, de estimular la microbiota del suelo. Además, se ha evaluado de forma
individual el efecto en suelo de la enzima proteasa, una de las que componen el secretado de B. licheniformis, que ha mostrado capacidad bioestimulante en sí misma, además de
provocar cambios interesantes, desde el punto de vista agronómico, sobre la biodiversidad
bacteriana del suelo.
El proceso desarrollado ha demostrado ser una alternativa interesante y técnicamente
factible a tener en cuenta para la gestión de lodos de depuradora, promoviendo la
valorización de este subproducto mediante su conversión en bioestimulantes en el marco
de la economía circular.
Sewage sludge, the main waste generated during wastewater treatment, has a growing
production trend and suppose a global problem, especially for small and medium-sized
wastewater treatment plants (WWTP) that have not integrated a solution for their
management in its facilities. Also considered as a by-product, sewage sludge is a source
of resources of interest that can be used for the production of biostimulants, whose field
is booming and in continuous search for new raw materials for their development.
As an alternative to composting, which currently is the main way for sludge management,
this doctoral thesis proposes a replicable model in small and medium-size WWTP,
whereby sludge is transformed into a biostimulant complex with greater added value than
compost. This model is based on a process that integrates two stages: a physical
pretreatment, followed by a controlled aerobic fermentation. The first phase consists of a
high pressure and temperature treatment by direct steam injection into sludge, followed
by a sudden decompression, which manages to sanitize the product, increasing the soluble
content and the bioavailability of organic matter, thus making it more susceptible for
being fermented. The fermentative stage, developed under controlled conditions, is
carried out by Bacillus licheniformis, which by action of its enzymatic secretion, further
increases the soluble content and bioavailability of the product, conferring it biostimulant
properties. The biostimulant complex obtained is formed by this plant growth promoter
rhizobacteria (PGPR), its secretion, which is rich in degrading enzymes, a soluble
component consisting mainly of a protein hydrolyzate and other highly bioavailable
biomolecules, and an insoluble organic component accessible to microbial degradation as
a result of physical pretreatment and microbial action.
Studies carried out to design the process that is developed in the fermentation unit, as well
as its demonstrative scale implementation are shown in this doctoral thesis. Likewise,
functional studies have also been carried out to evaluate the products obtained. The ability
of B. licheniformis to degrade toxic xenobiotics, frequently present in sewage sludge, and
the ability of the biostimulant complex, mainly of the soluble fraction, to stimulate the
soil microbiota are remarkable. In addition, the effect of the protease, one of the enzymes
of the secretion of B. licheniformis, was evaluated individually, showing to have
biostimulant capacity by itself, and being responsible of causing interesting changes in
bacterial soil biodiversity from the agronomic point of view.
The process developed has proven to be an interesting and technically feasible alternative
to be considered for the management of sewage sludge, promoting the recovery of this
by-product through its conversion into biostimulants in the context of the circular
economy.
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Proceso bifásico (físico-fermentativo) para la conversión de lodos de depuradora en bioestimulantes: evaluación funcional y diseño de planta piloto
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oai:idus.us.es:11441/482332024-02-13T20:28:23Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2016-10-27T10:16:03Z
2016-10-27T10:16:03Z
1987-07-10
Rendón Unceta, M.d.C. (1987). Variaciones de las actividades fosfodiesterasa y ATPasa tras la administración de somatostatina en cerebro e hipófisis de rata. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/48233
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/48233
En el presente trabajo se ha abordado el estudio del efecto de la Somatostatina (SRIF) hormona hipotalámica sobre actividades enzimáticas (PDE y ATPasas) que están involucradas en el mecanismo de acción de otras hormonas y que pudieran formar parte del de esta hormona en tejidos diana de su acción (sistema nervioso central y adenohipofisis). Para ello hemos realizado el siguiente planteamiento: 1) estudio en ratas hembras (raza Sprague-Dawley): hemos valorado distintas actividades ATPasicas caracterizando su acción sensibilidad a inhibidores etc. en tres fracciones subcelulares de cerebro y adenohipofisis. Además en la fracción soluble de ambos órganos se ha estudiado la PDE (GMPc de baja km) sensible a calcio y calmodulina y su modulación por estos agentes. 2) para comprobar si alguno de los efectos observados (activación de PDE por SRIF) son directos o pudieran estar mediados por la liberación o inhibición de otras hormonas o factores hemos estudiado la acción de esta sobre la PDE en células GH4C1 (células tumorales clonales de hipofisis).
De los resultados obtenidos podemos decir en términos generales que la SRIF administrada in vivo (20 ug/100g peso corporal) produce una inhibición en las actividades ATPasa (Ca2+-Mg2+) y total (mezcla de diferentes actividades hidrolíticas de ATP) estudiadas a diferentes tiempos de la administración de SRIF (5 10 y 15 min) en cerebro y adenohipofisis y no afecta a la actividad dependiente de Na+ y K+ en cerebro. En este último órgano también se ha detectado una actividad ATP difosfohidrolasa (APIRASA) sensible a calmodulina einhibida por la SRIF. La actividad PDE dependiente de calcio y calmodulina se ha localizado en la fracción soluble de cerebro y adenohipofisis observándose que es aumentada por SRIF a todos los tiempos en cerebro y a los 5 y 10 min en adenohipofisis. Encontrándose la misma actividad aumentada en células GH4C1.
En el presente trabajo hemos pretendido abordar el estudio del efecto de las somatostatina sobre actividades enzimáticas (PDE y ATPasas) que están involucradas en el mecanismo de acción de otras hormonas, en tejidos diana de esta hormona (Sistema Nervioso Central e Hipófisis).
Para ello hemos realizado el siguiente planteamiento:
a. Estudios en rata: Hemos valorado distintas actividades ATPasicas, caracterizando su acción, sensibilidad a inhibidores, etc., en tres fracciones subcelulares del cerebro y de la adenohipófisis. Además, en la fracción soluble de ambos órganos, se ha estudiado la PDE (GMPc Km baja) sensible a calcio y calmoduline, y su modulación por estos agentes.
b. Para comprobar si alguno de los efectos vistos (activación de PDE por somatostatina) son directos o pudieran estar mediados por la liberación o inhibición de otras hormonas o factores, hemos estudiado la acción de esta hormona sobre la PDE de células GH4C1.
Conclusiones:
1. En el cerebro de la rata existe además de las ATPasas descritas clásicamente, ATPasa (Ca2+ - Mg2+) y ATPasa (Na+ - K+), una actividad ATP difosfohidrolasa (aspirasa) que supone un porcentaje alto en la hidrólisis del nucleótido (ATP).
2. La administración de somatostatina a ratas produce una disminución de la actividad ATPasa (Ca2+ - Mg2+) en cerebro e hipófisis, y de otras actividades ATP hidrolíticas (aspirasa de cerebro).
La actividad ATPasa (Na+ - K+) de cerebro no se ve afectada por la somatostatina.
3. Este efecto observado sobre la ATPasa (Ca2+ - Mg2+) puede formar parte del mecanismo de acción de la somatostatina o ser una consecuencia de dicha acción.
4. En cerebro e hipófisis de rata (fracción soluble) existe fosfodiesterasa dependiente de calcio y calmodulina. La actividad de esta enzima aumenta en los tejidos tras la administración de somatostatina.
5. Este efecto sobre la fosfodiesterasa es directo, puesto que se demuestra también en células GH4C1, y puede formar parte del mecanismo de acción de la somatostatina, potenciando el efecto inhibidor de la síntesis de AMPc.
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Química
Bioquímica
Cultivo celular
Ciencias de la vida
Biología celular
Hormonas
Variaciones de las actividades fosfodiesterasa y ATPasa tras la administración de somatostatina en cerebro e hipófisis de rata
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
oai:idus.us.es:11441/1053192021-02-23T15:16:17Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2021-02-23T15:10:34Z
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2003-07-18
Polvillo Polo, O. (2003). Análisis geoquímico-orgánico de sedimentos del estuario del río Guadiana y su relación con la detección de cambios ambientales en el holoceno. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/105319
El estudio de las condiciones ambientales y de los procesos biogeoquímicos que gobiernan la preservación de la materia orgánica (MO) en sedimentos de estudarios tiene un especial interés por las peculiares características de este medio sedimentario. En las zonas semi-cerradas y de interfase de los estuarios, se produce una rápida acumulación de sedimentos finos procedentes tanto del ambiente marino y terrestre, y que están ac cesibles a los procesos de alteración microbiana. Tanto la diversidad de los aportes, como los periodos de fluctuaciones climáticas y del nivel del mar que tuvieron lugar en épocas geológicas pueden quedar registrados en las características del a MO depositada en los sedimentos estuarinos.
Con estas premisas, en el presente trabajo de investigación se ha llevado a cabo el estudio geoquímico-orgánico de un core sedimentario de 53m de profundidad del estuario del río Guadiana. Dicho estudio ha consistido en la determinación de parámetros geoquímicos de caracterización global en 32 secciones del core, y en el estudio molecular de biomarcadores presentes en las fracciones de lípidos (mediante GC-MS) y macromoléculas (por técnicas espectroscópicas y degradativas) aislados a lo largo del perfil sedimentario.
Los objetivos básicos del estudio fueron la descripción de la naturaleza de los aportes orgánicos a lo largo del perfil, de las condiciones paleoambientales en el momento de la deposición, y de las alteraciones diagenéticas, para contribuir a la reconstrucción de los cambios climáticos y ambientales producidos en una escala temporal reciente (Holoceno).
De los resultados obtenidos cabe resaltar dos conclusiones principales:
1,- Se corrobora la validez del "proxy" geoquímico-orgánico para estudios paleoclimáticos en épocas recientes, como complemento a las aproximaciones convencionales, principalmente estudios geológicos, palinológicos y de distribución de diferentes tipos de o
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Análisis geoquímico-orgánico de sedimentos del estuario del río Guadiana y su relación con la detección de cambios ambientales en el holoceno
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2017-12-20T09:49:15Z
2017-12-20T09:49:15Z
1996-06-14
Gil Ginés, E. (1996). La hipercolesterolemia en la infancia. Estudio de 91 familias afectadas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/67837
La enfermedad cardiovascular, sigue siendo hoy día la principal causa de muerte en países industrializados, originando gran número de muertes e invalideces; esto a su vez trae consigo una enorme pérdida de calidad de vida con cuantiosos gastos tanto sociales como sanitarios.
Si la arteriosclerosis comienza el primer día de nuestra vida y continúa como un largo proceso silente hasta que alcanza un grado importante de oclusión, y la influencia ambiental (especialmente la dieta) es el principal determinante de las diferencias en niveles medios de colesterol y mortalidad coronaria entre distintas poblaciones, es lógico pensar que su prevalencia actual en España es reflejo de los hábitos de vida de hace al menos tres décadas, evidentemente distintos de los actuales, sobre todo en lo referente a la dieta, que se ha desviado de la de tipo mediterráneo tradicional y contiene actualmente muchos alimentos precocinados ricos en grasas saturadas y colesterol.
Los niveles de colesterol de los niños españoles, en nuestro caso andaluces, pueden predecir un futuro incierto para la salud cardiovascular de nuestra comunidad, por ellos nos proponemos estudiar a 91 familias que tienen como característica común que uno de sus hijos padece una hipercolesterolemia; a partir de ahí, nos planteamos los siguientes objetivos:
1. Valorar la importancia que puede tener la estrategia de búsqueda oportunista.
2. Establecer el número de hipercolesterolemias familiares encontradas con dicha estrategia, especialmente las heterocigotas por su alto riesgo de padecer enfermedad cardiovascular en edades tempranas.
3. Comprobar la implicación que las alteraciones lipídicas observadas en estos niños, pueden tener en sus progenitores y sus hermanos, así como observar el grado de conocimiento de dislipemias en progenitores.
4. Valorar la influencia que puede tener en los perfiles lipídicos, la instauración de un tratamiento dietético.
CONCLUSIONES
1. Hemos estudiado a 91 niños hipercolesterolémicos escogidos al azar, por presentar cifras elevadas de colesterol total. De ellos el 11% presentó una hipercolesterolemia familiar heterocigota y el 89% un hipercolesterolemia poligénica.
2. Tras la instauración de tratamiento dietético durante 18 meses, en los niños con hipercolesterolemia familiar heterocigota conseguimos los siguientes descensos CT: 19,0%, cLDL: 19,9% y apo B 16,3%, careciendo de importancia las variaciones observadas en otros parámetros lipídicos.
3. En el grupo de los niños con hipercolesterolemia poligénica los descensos fueron CT: 17,5%, cLDL: 21,8% y apo B: 17,6%, careciendo asimismo de importancia el resto de las variaciones observadas en otros parámetros lipídicos.
4. Según la encuesta realizada al comienzo del esudio, el 75,8% de los padres manifiesta no tener antecedentes de hipercolesterolemia; finalizado el mismo, se comprueba que la hipercolesterolemia está presente en el 71,4% de los padres.
5. El estudio familiar refleja que los padres de los niños hipercolesterolémicos fueron los que presentaban mayor incidencia de hipercolesterolemia un 82,4%, seguido de los hermanos con un 65,1% y de las madres con un 61,5%, lo que viene a demostrar que el 69,6% de la población presentaba una dislipemia e ignoraba su existencia.
6. El estudio de los 91 niños con hipercolesterolemia, permitió descubrir a 195 familiares con dislipemia, que ignoraban sus existencia, lo que demuestra la enorme validez de la búsqueda oportunista.
7. Existe una relación marcada entre el tipo de hipercolesterolemia que padecían los niños y el perfil lipídico de los padres.
8. La hipercolesterolemia, ha sido la dislipemia más frecuente encontrada en los progenitores con un 61,5% de incidencia en los padres, seguida de un 64,4% en las madres. Las dislipemias mixtas se encontraban en segundo lugar, pero con una mayor diferencia, pues mientras en los padres se dio en el 19,8% en las madres tan solo en el 1,1%. No encontramos hipertrigliceridemias familiares.
9. La hipercolesterolemia poligénica tiene una mejor respuesta a la dieta que la heterocigota, como demuestra que todos los niños poligénicos alcanzaron cifras normales al final del tratamiento. En la heterocigota, de acuerdo con sus cifras, edad y antecedentes familiares, se valoró la instauración de tratamiento farmacológico.
10. El tratamiento dietético no produce alteraciones en los parámetros antropométricos, no perjudicando por tanto el crecimiento estaturoponderal de los niños hipercolesterolémicos.
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La hipercolesterolemia en la infancia. Estudio de 91 familias afectadas
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oai:idus.us.es:11441/261602024-02-17T16:45:59Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690com_11441_26072col_11441_11504col_11441_11517col_11441_10998col_11441_26077
2015-06-26T10:21:38Z
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2010
Pintado Losa, C. (2010). Modificaciones relacionadas con la edad en el sistema ubiquitina-proteosoma (UPS) y en la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) en el hipocampo de rata: Relación con procesos neurodegenerativos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/26160
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Cerebro
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Proteínas
Modificaciones relacionadas con la edad en el sistema ubiquitina-proteosoma (UPS) y en la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) en el hipocampo de rata: Relación con procesos neurodegenerativos
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oai:idus.us.es:11441/966052020-06-17T12:46:03Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11517col_11441_10998
2020-05-13T19:03:29Z
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2007-03-14
https://hdl.handle.net/11441/96605
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Estudio histopatológico del hipocampo de un modelo animal transgénico PS1XAPP de la enfermedad de Alzheimer
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oai:idus.us.es:11441/945882024-02-14T11:19:59Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-03-26T16:08:02Z
2020-03-26T16:08:02Z
1994-05-16
https://hdl.handle.net/11441/94588
La experimentación biomédica y toxicológica se ha venido realizando en animales de experimentación, con métodos "in vivo". Basándose en que las sustancias químicas ejercen su acción sobre las funciones básicas celulares, independientemente de si las células se hallan en un modelo experimental "in vivo" o "in vitro", surgió como alternativa a los métodos "in vivo" la denominada metodología "in vitro", que supone mayor rapidez y menor costo en su realización. Además son más aceptables éticamente, al no consumir animales y evitar su sufrimiento. El desarrollo de los métodos "in vitro" está siendo reclamado y apoyado por numerosos organismos nacionales e internacionales. Con el presente trabajo se ha desarrollado un modelo "in vitro" para valorar diferentes aspectos toxicodinámicos de sustancias químicas de reconocida toxicidad "in vivo". Además se ensaya la capacidad del modelo para reproducir aspectos conocidos de los mecanismos de acción y se intenta conocer las posibilidades de aplicarlo a varios compuestos citotóxicos y neurotóxicos previamente seleccionados.
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Evaluación in vitro de la cito y neurotoxicidad de compuestos orgánicos
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oai:idus.us.es:11441/1025862024-02-14T19:13:37Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2020-11-11T17:47:49Z
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2008-09-25
Verónica Galmozzi, C. (2008). Mecanismo de regulación postraduccional de la glutamina sintetasa de tipo I en cianobacterias. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/102586
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Mecanismo de regulación postraduccional de la glutamina sintetasa de tipo I en cianobacterias
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2019-03-07T11:59:26Z
2019-03-07T11:59:26Z
1980-01-15
Ortiz Blázquez, S. (1980). Regulación de la secreción de los islotes de langerhans durante el ayuno. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/83946
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Regulación de la secreción de los islotes de langerhans durante el ayuno
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2018-06-06T12:38:53Z
2018-06-06T12:38:53Z
1997-05-23
Barroso Gutiérrez, C. (1997). Biosíntesis de L-Cisteína en Arabidopsis thaliana: Regulación de los Genes O-Acetilserina(TIOL)Liasa. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/75761
6025263
CONCLUSIONES:
1. Se ha aislado y caracterizado una cDNA de 1332 pb de longitud, denominado Atcys-3A, habiéndose identificado como un miento de una pequeña familia génica que codifica la isoforma citosólica de OASTL de Arabidopsis thaliana. La comparación de la secuencia de aminoácidos deducida de este gen con otras OASTL muestra un gran porcentaje de homología con la enzima de bacterias y plantas.
2. Los niveles de actividad OASTL y de expresión de las isoformas citosólica y cloroplástica en plántulas de Arabidopsis, se activan en condiciones de carencia de azufre. Esta activación es independiente de luz y requiere de fuente de carbono y nitrógeno en el medio de cultivo para que sea máxima. Además, en plantas maduras, la isoforma citosólica OASTL se activa en carencia de azufre y se reprime por formas reducidas de azufre, como el GSH.
3. Las raíces presentan altos niveles de actividad OASTL, por lo que parecen contribuir significativamente al metabolismo biosintético de L-cisteína. El transcrito citosólico Atcys-3A es claramente más abundante en raíces y el transcrito cloroplástico At.OAS.7-4 muestra niveles muy similares en todos los órganos de la planta.
4. En este trabajo se ha determinado por vez primera la localización celular de un mensajero OASTL de planta Atcys-3A se expresa fuertemente en tricomas de hojas y tallos, mientras que el mensajero At.OAS.7-4 no es tan abundante en este tipo celular. Estos estudios han puesto de manifiesto una posible función específica de la isoforma OASTL citosólica en la defensa de la planta frente a condiciones adversas, y también un nuevo aspecto de la función biológica del tricoma relacionado con la biosíntesis de L-cisteína.
5. La expresión de Atcys-3A se induce por estrés salino y está mediada por rutas dependientes de ABA que incluye a la proteína ABI2. La fuerte hibridación de Atcys-3A detectada en tricomas de hojas desaparece en plantas sometidas a estrés salino, e incrementa en el resto de las células de los tejidos de hojas, tallos y raíces.
6. Atcys-3A también se induce en plantas de Arabidopsis thaliana tratadas con cadmio, detectándose una fuerte expresión del mensajero en tricomas, y en el resto de las células de la planta.
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Biosíntesis de L-Cisteína en Arabidopsis thaliana: Regulación de los Genes O-Acetilserina(TIOL)Liasa
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oai:idus.us.es:11441/1430032024-02-17T16:42:17Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2023-02-27T11:11:53Z
2023-02-27T11:11:53Z
2022-12-02
Roca Ceballos, M.A. (2022). Caracterización del modelo condicional neuronal de caspasa 3 en condiciones fisiológicas y patológicas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/143003
La caspasa 3 (casp 3) es una proteasa ampliamente conocida por su papel clave como
mediadora en la apoptosis neuronal. En la actualidad, se han puesto de manifiesto funciones de
la casp 3 en el Sistema Nervioso Central (SNC) no relacionadas con la apoptosis, destacando su
papel regulador en la neurogénesis y en la actividad sináptica. De esta manera, la función de la
casp 3 no se reduciría al proceso de apoptosis, sino que la activación limitada de la casp 3 sería
crítica para la función sináptica en el cerebro adulto sano, participando en la regulación de la
plasticidad sináptica y en los mecanismos moleculares del aprendizaje y la memoria.
Las enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer (EA) están
caracterizadas por la pérdida selectiva de poblaciones neuronales específicas, lo que a su vez
desencadena la aparición de déficits cognitivos y/o motores. Además, varias proteínas
relacionadas con la EA (APP, presenilinas) son procesadas por la casp 3 y por ello, en la
actualidad, se postula que el procesamiento de estas proteínas por parte de la casp 3 podría
estar directamente relacionado tanto con el inicio de la enfermedad, como con la ejecución final
de la apoptosis neuronal (D´Amelio y cols. 2010). La casp 3 también ha sido relacionada con el
incremento de la producción del péptido Aβ (Beta-amiloide), contribuyendo así a la patogénesis
asociada a la EA (Tesco y cols. 2007).
El objetivo principal de esta tesis ha sido la generación de un modelo murino condicional
neuronal de casp 3 que nos permitiese estudiar la implicación de esta caspasa en la plasticidad
sináptica en el SNC y con él, que pudiésemos generar una línea de ratones en la que poder estudiar la implicación de la casp 3 en la EA. Para ello, una vez que conseguimos desarrollar
nuestro modelo KO condicional de casp 3, se comprobó a través de un análisis funcional y una
caracterización conductual, que estos ratones no presentaban ninguna anomalía excepto en la
memoria a largo plazo. Tras estos resultados, mediante la realización de la tinción de Golgi-Cox
de las espinas dendríticas, se observó que nuestro modelo murino presentaba diferencias en la
densidad de las espinas dendríticas y en el porcentaje de cada tipo de espina, presentano menor
porcentaje de espinas cortas (maduras) y mayor porcentaje de espinas largas y delgadas
(inmaduras). Finalmente, se estudió a través de técnicas electrofisiológicas, cómo la
potenciación a largo plazo (LTP) se encontraba inhibida en esta línea de ratones. Estos resultados
sugieren que la casp 3 tendría un papel fundamental en los procesos de aprendizaje y memoria,
afectando a la LTP y a la plasticidad de las espinas denríticas. Además, habríamos conseguido un
modelo murino condicional neuronal de casp 3 que alcanza la edad adulta y no presenta cambios
neuropatológicos, pudiendo ser la base de estudios futuros sobre la influencia de la casp 3 en la
plasticidad sináptica y sobre los mecanismos moleculares que provocan dichas alteraciones.
En el ratón KO condicional de casp 3 APP/PS1, se comenzó comprobando, al igual que en el
primer modelo, a través de una pequeña batería de comportamiento, que no existían anomalías
que tuvierámos que tener en cuenta a lo largo del estudio. En este caso nos centramos en el
análisis de la implicación de casp 3 en la generación de las placas de AB y en el estudio de la
microglía presente en ratones de 6 meses. Para ello, analizamos a través de una inmunofluorescencia de triple marcaje, distintos parámetros morfológicos de las placas de A
además del porcentaje de microglía por área de A, sin obtener resultados significativos en estos
casos. Estudios a edades más avanzadas serían necesarios para completar el análisis de la
influencia de casp 3 en la EA.
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Caracterización del modelo condicional neuronal de caspasa 3 en condiciones fisiológicas y patológicas
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2019-03-05T11:33:01Z
2019-03-05T11:33:01Z
2019-02-22
Rodríguez Morgado, B. (2019). Producción de un biofertilizante / bioestimulante mediante un proceso biológico / enzimático a partir de subproductos orgánicos: valorización agronómica y ambiental de lodos de depuradora y plumas de matadero.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/83787
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Producción de un biofertilizante / bioestimulante mediante un proceso biológico / enzimático a partir de subproductos orgánicos: valorización agronómica y ambiental de lodos de depuradora y plumas de matadero.
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2018-06-06T12:29:20Z
2018-06-06T12:29:20Z
1993-11-15
Muro Pastor, M.I. (1993). Isocitrato deshidrogenasa de cianobacterias: Purificación, caracterización y clonación del Gen icd. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/75756
6017696
El presente trabajo se ha centrado en el estudio de la isocitrato deshidrogenasa de cianobacterias, con objeto de contribuir al conocimiento de las enzimas del metabolismo del carbono en estos organismos y concretamente de la enzima que aporta al esqueleto carbonado para la asimilación del amonio. La IDH representa la conexión de las rutas metabólicas del carbono y el nitrógeno.
Se han elegido dos cianobacterias para realizar este estudio: Synechocystis sp. PCC 6803b (abreviaremos en adelante como Synechocystis 6803) y Anabaena sp. PCC 7120 (Anabaena 7120).
Synechocystis 6803 es una bacteria unicelular encuadrada en la sección taxonómica I, que puede crecer fotoautotróficamente sin requerimientos orgánicos (Rippka et al., 1979) y también en condiciones mixotróficas y heterotróficas (Anderson y McIntosh, 1991).
Como otras cianobacterias Synechocystis 6803 es altamente poliploide y posee en torno a doce copias cromosómicas por célula (Labarre et al, 1989). Su natural capacidad para ser transformada con ADNforáneo (Grigorieva y Shestakov 1982) y mutada de forma dirigida (Williams, 1988) la hacen una de las cianobacterias más utilizadas para los estudios genéticos y de Biología Molecular.
Este organismo ha sido objeto además de varios estudios relacionados con el metabolismo del nitrógeno y más concretamente con la ruta GS-GOGAT, por lo que parecía adecuado para los objetivos que nos proponíamos en este trabajo.
Por otra parte Anabaena 7120 es una cianobacteria filamentosa fijadora de dinitrógeno y formadora de heterocistos perteneciente a la sección IV de la clasificación de Rippka et al., siendo un organismos fotoautrófico estricto.
La transferencia de ADN foráneo a esta estirpe, al igual que al resto de las cianobacterias filamentosas en las que este proceso se ha llevado a cabo, se realiza mediante un sistema de conjugación interespecífica desde E. coli a la cianobacteria (Wolk et al., 19849 y el desarrollo de este procedimiento ha permitido en los últimos años un gran avance de los estudios genéticos y de Biología Molecular de las cianobacterias filamentosas.
La generación de mutantes en Anabaena se ve dificultada al igual que en Synechocystis por la poliploidía ya que se requieren largos periodos de segregación hasta obtener la homogeneidad de todos los cromosomas de una misma célula.
Se ha elegido esta estirpe como modelo de cianobacteria filamentosa fijadora de dinitrógeno, que permitiera estudiar el posible papel de la IDH como donadora de poder reductor para la nitrogenasa durante el proceso de fijación de dinitrógeno.
Se describe a continuación la purificación y caracterización de las NADP-IDHs de estas dos cianobacterias así como la clonación y análisis de los genes icd que codifican para estas enzimas.se ha realizado asimismo la mutagénesis dirigida de los correspondientes genes icd en ambas cianobacterias.
CONCLUSIONES
1. Se ha purificado hasta homogeneidad electroforética una enzima con actividad isocitrato deshidrogenasa, presente en la cianobacteria unicelular, heterótrofa facultativa Synechocystis sp. PCC 6803 y en la filamentosa fijadora de dinitrógeno, formadora de heterocistos Anabaena sp. PCC 7120.
2. La isocitrato deshidrogenasa de las dosis cianobacterias estudias es una enzima dimérica, estrictamente dependiente de NADP y de cationes divalentes como el Mg2+ o el Mn2+ para su actividad. Según sus características fisicoquímica y cinéticas, las NADP-IDHs de Synechocystis 6803 y Anabaena 7120 son muy similares entre sí y a su vez a las NADP-isocitrato deshidrogenasas de diferentes fuentes.
3. Se ha clonado y secuenciando el gen icd que codifica la NADP-IDH de Anabaena 7120, así como una gran parte del gen icd de Synechocystis 6803. El gen icd de Anabaena es capaz de expresare en E. coli y la enzima por el codificada complementa la auxotrofía de glutamato característica de los mutantes IDH- de este organismo.
4. Las secuencias de aminoácidos deducidas de los genes icd de Synechocystis 6803 y Anabaena 7120 son muy similares entre sí y presentan así mismo similitud con otras secuencias de isocitrato deshidrogenasas e isopropilmalato deshidrogenasas. Dicha similitud es especialmente alta con la secuencia deducida para la NADP-IDH de E. coli, si bien existe una zona específica de 44 aminoácidos en las secuencias cianobacterianas, no alineable con ninguna de las demás secuencias disponibles.
5. Los niveles de actividad NADP-IDH de Synechocystis 6803 y Anabaena 7120 se encuentran regulados en función de la fuente de nitrógeno empleada para su cultivo o de la disponibilidad de la misma. La actividad IDH de Synechocystis se incrementa entre 4 y 5 veces en células sometidas a hambre de nitrógeno. En Anabaena dicha actividad es superior cuando este organismo se cultiva en ausencia de nitrógeno combinado.
6. La regulación de la actividad NADP-IDH de Synechocystis 6803 por hambre de nitrógeno se corresponde con un incremento de la cantidad de proteína NADP-IDH así como de ARNm del gen icd en dichas condiciones. Dicha regulación parece producirse por tanto a nivel transcripcional y sugiere una coordinación entre el metabolismo del nitrógeno y del carbono.
7. Se han obtenido estirpes mutantes de Anabaena 7120 y Synechocystis 6803 que presentan inactivado el gen icd en parte de sus copias cromosómicas. La mutación de dicho gen en todos los cromosomas de estas cianobacterias y por tanto la obtención de estirpes totalmente carentes de actividad IDH no se ha conseguido en las condiciones probadas. Consideramos que el gen icd es esencial para el crecimiento de las cianobacterias estudiadas.
spa
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Isocitrato deshidrogenasa de cianobacterias: Purificación, caracterización y clonación del Gen icd
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2015-06-26T10:21:39Z
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2005-07-14
Sánchez Hidalgo, M.C. (2005). Estudio de los efectos producidos por la administración crónica de manganeso: implicación de la ingesta de hierro. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/26162
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/26162
En la tesis titulada "Estudio de los efectos producidos por la administración crónica de manganeso: implicación de la ingesta de hierro" se ha evaluado el efecto tóxico que el manganeso, considerado un oligoelemento, puede llevar a cabo en el SNC, sobre todo en el sistema dopaminérgico nigro-estriado, así como en diversos órganos periféricos. Dicha administración crónica se realizó en ratas wistar empleando mncl2 por vía intraperitoneal. Asimismo, también se abordó el papel que el manganeso y el hierro podrían tener en el proceso de neurodegeneración y afectación de órganos periféricos, para lo que se diseñó un experimento en el que se emplearon dietas sintéticas con dosis normal de hierro y carencia del mismo. Así pues, se estudió la respuesta glial, indicativa de daños a nivel cerebral, se valoraron parámetros de estrés oxidativo y se efectuaron diversas tinciones inmunocitoquímicas así como hibridación in situ. de esta forma, nuestro estudio refleja que la toxicidad del manganeso en el snc se basa en el aumento del estrés oxidativo produciéndose un mayor efecto del manganeso en el sistema dopaminérgico nigro-estriado, si bien no actúa de forma selectiva puesto que todas las estructuras cerebrales estudiadas muestran estrés oxidativo. Asimismo, también produce un aumento de estrés oxidativo en órganos sistémicos, entre los que destaca el higado, pudiéndose especular con la posibilidad de la disfunción de este órgano y el desarrollo de encefalopatia hepática. también es importante destacar que la deficiencia de hierro y elevados niveles de manganeso en el snc presentan un efecto tóxico sinérgico desencadenando una gran respuesta glial así como afectación vascular y parénquima cerebral que presupone fenómenos de necrosis y apoptosis concluyendo con la muerte cerebral.
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Manganeso
Estudio de los efectos producidos por la administración crónica de manganeso: implicación de la ingesta de hierro
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2023-05-08T11:19:27Z
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2005-07-22
Río Valencia, J.C.d. (2005). Caracterización de los sistemas gabaérgico y colinérgico en neocorteza de ratones transgénicos modelos de la enfermedad de Alzheimer. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/145590
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Caracterización de los sistemas gabaérgico y colinérgico en neocorteza de ratones transgénicos modelos de la enfermedad de Alzheimer
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2018-09-24T06:51:48Z
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1984-04-13
Caballero Domínguez, F.J. (1984). Caracterización y propiedades de la nitrato reductasa, nitrito reductasa y glutamina sintetasa de la bacteria fototrofica Rhodopseudomonas capsulata E1F1. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/78717
CONCLUSIONES
1. La bacteria Rhodopseudomonas capsulata E1F1 asimila el nitrógeno nítrico únicamente en condiciones fotosintéticas (luz y anaerobiosis).
2. La ruta preferente de asimilación del nitrógeno nítrico en Rhodopseudomonas capsulata E1F1 es la catalizada por las enzimas nitrato y nitrito reductasas, glutamina sintetasa y glutamato sintasa.
3. La nitrato y la nitrito reductasas de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 se encuentran estrechamente ligadas a sistemas de membrana, mientras que la glutamina sintetasa se solubiliza con facilidad independientemente del método de ruptura empleado.
4. La nitrato reductasa de esta bacteria es una enzima inducible por nitrato o nitrito, mientras que la nitrito reductasa y la glutamina sintetasa son enzimas adaptativas.
5. La nitrato y la nitrito reductasas de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 contienen, al parecer, molibdeno y hierro como grupos prostéticos, respectivamente. Ambas enzimas son de tipo asimilador, ya que sus productos de reacción son el NO_2^- y el NH_4^+, respectivamente.
6. La glutamina sintetasa de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 se ha purificado hasta homogeneidad según criterios electroforéticos e inmunológicos, mediante cromatografía de afinidad en 2’, 5’-ADP sefarosa.
7. La glutamina sintetasa de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 es una proteína de 665 ± 5 kDa compuesta por 12 subunidades idénticas de 55 kDa cada una y posiblemente situadas en dos hexámeros superpuestos. La enzima nativa se disgrega espontáneamente en oligómeros que retienen parte de la actividad enzimática.
8. La concentración intracelular de glutamina sintetasa disminuye drásticamente en presencia de amonio y aumenta en presencia de MSX.
9. La glutamina sintetasa de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 está regulada por un mecanismo de adenilación-desadenilación. La forma adenilada es biológicamente inactiva y el grado de adenilación es máximo durante la fase estacionaria del crecimiento, en presencia de amonio o glutamina, o cuando las células se encuentran en la oscuridad.
10. El grado de adenilación de la glutamina sintetasa de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 influye en el pH óptimo de la enzima y en la dependencia de la actividad enzimática de la presencia de cationes divalentes. La actividad biosintética de la forma adenilada depende de Mn2+ y utiliza como sustrato el complejo MnATP2-.
11. La actividad transferasa de la glutamina sintetasa desadenilada de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 se inhibe por L-alanina, L-glicina, L-aspartato y L-serina. La actividad biosintética se inhibe por estos aminoácidos en una proporción mucho menor.
12. La glutamina sintetasa de Rhodopseudomonas capsulata E1F1 contiene alrededor de 108 grupos sulfhidrilos. La enzima se inhibe por mercuriales orgánicos y se reactiva in vitro en presencia de ditioles, pero no está regulada por interconversión redox desencadenada por cambios luz/oscuridad.
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Caracterización y propiedades de la nitrato reductasa, nitrito reductasa y glutamina sintetasa de la bacteria fototrofica Rhodopseudomonas capsulata E1F1
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2015-04-16T09:19:00Z
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1999
Salas Liñán, J.J. (1999). Ruta de la lipoxigenasa en aceituna: contribución a la biogénesis del aroma del aceite de oliva. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/23900
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/23900
En la presente tesis se pretendió caracterizar las enzimas de la ruta de la lipoxigenasa (lipoxigenasa, hidroperóxido liasa, alcohol deshidrogenasa y alcohol aciltransferasa) en pulpa de aceituna, como principales responsables de la síntesis del aroma del aceite de oliva vi rgen. Estas enzimas fueron detectadas y caracterizadas, encontrándose una buena correlación entre los parámetros bioquímicos de las mismas y la composición de volátiles del aceite de oliva virgen.A diferencia de otros aceites vegetales, el aceite de oliva Virgen se extrae por métodos exclusivamente físicos de frutos frescos (Alba, 1997), constituyendo un zumo natural de notables características nutricionales y organolépticas. Por no sufrir refinación, este aceite conserva su aroma natural, uno de los parámetros más apreciados por sus consumidores. Dicho aroma está formado por una compleja mezcla compuestos volátiles, entre los que se encuentras aldehídos, ésteres, alcoholes, hidrocarburos y cetonas, que han sido separados y caracterizados por GC-MS (Morales et al., 1994). De todos estos compuestos los más importantes cuantitativamente son aldehídos, alcoholes y ésteres de alcoholes de seis átomos de carbono, los cuales dan cuenta de entre el 80 y el 90% del total de la fracción de volátiles del aceite (Olías et al., 1980; Morales et al., 1995; Ranalli y De Mattia, 1997). Estos compuestos son comunes a otras especies y productos vegetales, y son responsables de los que se ha denominado olor verde, por su presencia en alta proporción en homogenados de hojas frescas (Hatanaka, 19939.Está bien establecido por experimentos de marcaje que esta serie de substancias volátiles se producen a partir de ácidos grasos poliinsaturados a través de la cascada de reacciones conocida como ruta de la lipoxigenasa (Hatanka et al., 1987). Esta ruta se induce co|
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Aceite de oliva
Ruta de la lipoxigenasa en aceituna: contribución a la biogénesis del aroma del aceite de oliva
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2019-09-25T07:02:20Z
2019-09-25T07:02:20Z
2019-09-12
Urbina Salazar, A.d.R. (2019). Producción de quitinasas a partir de subproductos de la industria alimentaria: aplicación a los hongos comestibles y crustáceos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/89310
La quitina, es un polímero lineal β-1,4 de N-acetil-D-glucosamina (GlcNAc), es un importante componente estructural de la mayoría de los crustáceos, insectos, algas y hongos. Las quitinasas son enzimas que degradan la quitina a quitino-oligosacáridos y acetil glucosamina y son sintetizadas principalmente por bacterias y hongos.
Estas enzimas tienen aplicaciones potenciales en la industria farmacéutica, alimentaria y agronómica donde podrían desempeñar un importante papel en biocontrol y en el tratamiento de enfermedades de las plantas, debido a que no son tóxicas, son biodegradables y biocompatibles.
En este trabajo se ha estudiado la producción de quitinasas por Bacillus licheniformis ATCC 21415, Trichoderma atroviride CEC-T23 y Trichoderma harzianum CEC-T24 crecidos en diferentes medios de cultivo formulados con subproductos agroindustriales ricos en quitina procedentes de hongos comestibles (Agaricus Bisporus) y crustáceos (Procambarus clarkii) como fuente principal de carbono en un intento de producir estas enzimas de una manera económicamente viable, y darle un uso práctico a estos subproductos, además del de poder utilizarse como fuente de partida para obtener quitina. Lo que es habitual en el caso de los subproductos de crustáceos pero, hasta la fecha, no lo es para los subproductos de la industria de los hongos y setas comestibles.
Este trabajo es uno de los primeros, sino el primero, que aborda de manera sistemática la utilización de los subproductos ricos en quitina de la industria de los hongos y setas comestibles para obtener productos de alto valor añadido, diferentes de la quitina y el quitosano. Concretamente nos hemos centrado en el estudio de la producción de enzimas hidrolíticas, fundamentalmente quitinasas. Para ello se ha procedido de la siguiente manera:
Estudio de la preparación y caracterización de la fuentes de fermentación a partir de subproductos agroindustriales (harina de tallos de champiñón, HTCH, Fraccion enriquecida de quitina y glucano, F-Q/G, y harina de cangrejo, CFM).
Estudio de la producción de quitinasas por fermentación en estado sólido (FES) y fermentación sumergida (FS)
Estudio de la extracción, concentración/fraccionamiento y estabilización de enzimas (quitinasas).
Estudio de la secreción de proteínas (secretoma) de B. licheniformis ATCC 21415 o T. harzianum CEC-T24 crecido en los diferentes medios de cultivo, mediante técnicas electroforéticas y proteómica.
Estudio de la producción de quitinasas a escala semi-piloto.
Estudio de la estabilización y/o inmovilización de concentrado de quitinasas en forma de nano/micropartículas para su uso como plaguicida alternativo al uso de productos químicos altamente tóxicos para el medio ambiente.
De nuestros resultados podemos concluir que todos los microorganismos produjeron una mayor producción de actividad quitinasa en un medio formulado con HTCH y F-Q/G como fuente de carbono en comparación con los medios formulados con Qp o Qc. De los tres microorganismos utilizados en este estudio, T. harzianum CEC-T24 mostró la mayor productividad de quitinasa (873,98 UI L-1día-1) en el medio HTCH+A en Fermentación en estado sólido. La producción de quitinasa se controló mediante la medida de actividad y de proteína y el perfil de enzimas/proteínas secretadas al medio de cultivo se ha seguido, en un principio, por PAGE-SDS. El análisis electroforético permitió la detección de 25 proteínas diferentes entre ellas cinco quitinasas con masas moleculares 82, 65, 48, 31 y 25 kDa, respectivamente. Sin embargo, cuando se estudian las proteínas secretadas por T. harzianum CEC-T24 en los diferentes medios, es decir, cuando analizamos su secretoma, mediante técnicas proteómicas el número de enzimas/proteínas detectadas es mucho mayor: 183 en medios formulados con HTCH, 161 en medios formulados con F-Q/G y 91 en medios formulados con HC.
Además cuando se crece T. harzianum CEC-T24 en un reactor tipo tambor rotatorio, a escala semi-piloto (1 Kg de medio de cultivo), bien controlado, la productividad es 4,63 veces superior a la descrita para medios aireados en matraces.
Estos resultados muestran que el cultivo de T. harzianum CEC-T24 por fermentación en estado sólido, en un medio de fermentación, en un reactor tipo tambor rotatorio, con buen control de aireación y humedad, basado en el uso de subproductos ricos en quitina (HTCH), procedente de la industria del champiñón, barato y abundante representa un buen procedimiento para la producción a gran escala de quitinasas.
spa
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Producción de quitinasas a partir de subproductos de la industria alimentaria: aplicación a los hongos comestibles y crustáceos
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
oai:idus.us.es:11441/310272024-02-12T21:32:22Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2015-11-25T12:45:50Z
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2015-10-19
Oliva Martín, M.J. (2015). A dual tool. The role of the ripoptosome in phagocytic cell activation and differentiation. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31027
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31027
El término ripoptosoma hace referencia a la plataforma molecular que contiene, entre otras, dos
proteínas implicadas en muerte celular: caspasa 8, implicada en apoptosis, y RIP-1 kinasa,
implicada en necroptosis. El ripoptosoma puede por tanto entenderse como un switch entre ambos tipos de muerte celular. Sin embargo, ésta no es su única función, ya que recientemente se ha asociado a esta plataforma molecular con procesos de activación y diferenciación celular.
En esta tesis se ha tratado de profundizar en el papel del ripoptosoma en la activación y
diferenciación de monocitos y macrófagos. Ambos tipos celulares son importantes mediadores de la respuesta inmune innata, y por tanto alteraciones en sus procesos de activación y diferenciación han resultado ser un factor contribuyente en el desarrollo de enfermedades inflamatorias, cáncer y neurodegeneración.
Hemos encontrado que caspasa 8 media la activación de monocitos y podría por tanto ser una diana terapéutica potencial en enfermedades como el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica. También hemos mostrado que RIP-1 kinasa regula la diferenciación de monocitos a macrófagos. Finalmente, hemos observado que el uso de inhibidores de RIP-1 kinasa puede resultar en efectos perjudiciales para el sistema nervioso central. En conjunto, estos resultados ponen de manifiesto la relevancia del ripoptosoma en terapéutica y la necesidad de continuar investigando sobre su mecanismo de acción y rutas de señalización asociadas.
The term ripoptosome refers to the molecular platform containing, amongst others, two proteins
involved in cell death: Caspase 8, involved in apoptotic cell death, and Receptor interacting protein 1 (RIP-1) kinase, involved in necroptotic cell death. The ripoptosome is thus a switch that regulates both types of cell death. However, it is not its only function, as it has recently been associated to cell activation and differentiation.
In this thesis we attempt to further understand the role of the ripoptosome in the activation and
differentiation of monocytes and macrophages. Both of these cell types are important mediators of the innate immune response, and therefore an impairment of their differentiation or their
overactivation have been shown to be a contributing factor in the development of inflammatory
diseases, cancer and neurodegeneration.
We have found that Caspase 8 mediates monocyte activation and could therefore be a potential
therapeutic target in diseases such as the systemic inflammatory response syndrome. We have also shown that RIP-1 kinase regulates macrophage differentiation. Finally, we have observed that the employment of RIP-1 inhibitors may have deleterious effects in the central nervous system. Together, these results point out the relevance of the ripoptosome in therapeutics and the need for further investigation into its mechanisms of action and related pathways.
eng
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
ripoptosoma
diferenciación celular
terapéutica
A dual tool. The role of the ripoptosome in phagocytic cell activation and differentiation
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
oai:idus.us.es:11441/261612024-02-13T20:15:32Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690com_11441_26072col_11441_11504col_11441_11517col_11441_10998col_11441_26077
2015-06-26T10:21:39Z
2015-06-26T10:21:39Z
2004
Rite Zambrano, I. (2004). Regulación de la expresión de BDNF en los ganglios basales en distintos modelos de la enfermedad de Huntington. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/26161
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/26161
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0
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Cerebro
Lesiones y heridas
Regulación de la expresión de BDNF en los ganglios basales en distintos modelos de la enfermedad de Huntington
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2014-11-27T11:40:19Z
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2012
Carbonero Aguilar, M.d.P. (2012). Estudio de la oxidación de proteínas en ratas con encefalopatía hepática: una aproximación proteómica. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/14963
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/14963
En esta Tesis se ha estudiado el efecto del estrés oxidativo inducido por un estado de hiperamonemia, utilizando como modelo animal ratas con derivación porto-cava (ratas-dpc). El objetivo principal ha sido ver como se afecta la expresión de proteínas en
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Estrés oxidativo
Ratas
Cerebro
Bioquímica
Estudio de la oxidación de proteínas en ratas con encefalopatía hepática: una aproximación proteómica
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2019-11-20T18:18:42Z
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1989-11-16
García de la Vega, M.M. (1989). Biotransformación de sacarosa en alginato por Azotobacter Chroococcum. Purificación y propiedades de una invertasa exocelular. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90373
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Biotransformación de sacarosa en alginato por Azotobacter Chroococcum. Purificación y propiedades de una invertasa exocelular
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2015-12-10T13:30:23Z
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2008-04-22
Santos Rey, K. (2008). La hemoglobina glicosilada (HbA1C) en la intolerancia a la glucosa. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31768
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31768
La intolerancia a la glucosa representa, junto con la glucemia basal alterada, una etapa intermedia en la historia natural de la diabetes mellitus. Si bien no es considerada una entidad clínica per sé, sí constituye un factor de riesgo importante tanto para el desarrollo de diabetes tipo 2, como para la aparición de enfermedad cardiovascular. También se asocia a diferentes factores de riesgo cardiovascular y a un incremento en la mortalidad por cualquier causa. Actualmente calificamos a la diabetes mellitus de una pandermia, debido a la alta prevalencia de la misma, pero la prevalencia de los estados prediabéticos es aún mayor, con cifras en nuestro medio cercanas al 10%. Conocemos que la diabetes tipo 2 no se instaura de una manera aguda, sino que la hperglucemia mantenida que la caracteriza es el final de un proceso que comienza en la glucemia basal alterada y/o la intolerancia a la glucosa. Hoy día se define la intolerancia a la glucosa como una glucemia comprendida entre 140 y 199 mg/dl a las dos horas de un test de sobrecarga oral con 75 g de glucosa. Esta es actualmente la única manera de llegar al diagnóstico de intolerancia a la glucosa, si bien la ADA no recomienda la realización del test de sobrecarga oral en la práctica clínica. Esto hace que nos encontremos ante una situación conflictiva, pues es deseable la correcta identificación de los pacientes en estos estados prediabéticos para que puedan ser manejados correctamente en intervenir a tiempo para poder evitar o revertir las complicaciones en forma de diabetes, daño microvascular o macrovascular, presentes en numerosos pacientes recién diagnosticados de diabetes tipo 2. Así lo demuestran varios estudios intervencionistas que muestran el beneficio que el ejercicio físico y la dieta pueden causar en estos estadíos, pues logran retrasar la aparición de diabetes tipo 2, llegando incluso a revertir el estado de intolerancia a la glucosa. La determinación de hemoglobina glicosilada (HbA1C) nos proporciona una valiosa información acerca del estado glucémico del paciente diabético en los últimos tres meses, pues integra los valores de glucemia basal y pospandrial. Si bien su uso se encuentra totalmente aceptado en la monitorización del paciente diabético tipo 1 y tipo 2, el uso de la HbA1C con fines diagnósticos no se recomienda en la actualidad debido a la falta de estandarización de la técnica. Esto dificulta la instauración de valores de referencia para la población sana e impide la comparación de resultados emitidos por distintos laboratorios, dando lugar a confusiones frecuentes y repercutiendo de manera negativa en el paciente diabético. A pesar de los esfuerzos realizados por los distintos programas de armonización de distintas sociedades en todo el mundo, el conflicto permanece irresoluble al día de hoy.
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Diabetes
La hemoglobina glicosilada (HbA1C) en la intolerancia a la glucosa
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oai:idus.us.es:11441/261592024-02-14T20:23:14Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690com_11441_26072col_11441_11504col_11441_11517col_11441_10998col_11441_26077
2015-06-26T10:21:38Z
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2009
Burguillos García, M.Á. (2009). Biochemical and molecular bases of the cell death in the neuroinflammatory of Parkinson's disease induced by LPS. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/26159
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/26159
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Parkinson, Enfermedad de
Biochemical and molecular bases of the cell death in the neuroinflammatory of Parkinson's disease induced by LPS
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oai:idus.us.es:11441/962482024-02-12T22:07:47Zcom_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_10998
2020-05-07T14:30:23Z
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1985-10-05
https://hdl.handle.net/11441/96248
spa
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Solubilización de receptores para el péptido intestinal vasoactivo (VIP) en membranas plasmáticas de hígado de rata
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oai:idus.us.es:11441/807432024-02-13T09:19:03Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10994com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11504col_11441_10998
2018-12-03T11:39:10Z
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2018-11-23
Tayara, K. (2018). Metformin treatment decreases microglial activation in the in vivo lps model of parkinson's disease.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80743
Metformin is a widely used oral antidiabetic drug with known anti-inflammatory properties due to its action on AMP kinase. This drug has shown a protective effect on various brain tissues, including cortical neurons. However, the effect of metformin on the substantia nigra (SN), the main
structure affected in Parkinson’s disease (PD), has not yet been studied. Accumulating evidence suggest that inflammation may play a central role in the cell loss that occurs in PD. The aim of this work was to determine the effect of metformin on the microglial activation of the SN of rats using
the animal model of PD based on the injection of the pro-inflammogen lipopolysaccharide (LPS). In vivo and in vitro experiments were used to study the activation of microglia at both the cellular and molecular levels. Our results indicate that metformin overall inhibits microglia activation measured
by OX-6 (MHCII marker), IKKβ (pro-inflammatory marker) and arginase (anti-inflammatory marker) immunoreactivity. In addition, qPCR experiments reveal that metformin treatment minimizes the expression levels of several pro- and anti-inflammatory cytokines. Furthermore, the drug decreases the phosphorylated forms of MAPKs as well as ROS generation through the
inhibition of the NADPH oxidase enzyme. However, metformin treatment fails to protect the dopaminergic neurons of SN. These findings suggest that metformin could have both beneficial and harmful pharmacological effects and arise the question about the potential use of metformin for the
prevention and treatment of PD.
La metformina es un fármaco antidiabético oral ampliamente utilizado con propiedades antiinflamatorias conocidas debido a su acción sobre la AMP cinasa. Esta droga ha mostrado un efecto protector en varios tejidos del cerebro, incluidas las neuronas corticales. Sin embargo, el efecto de la metformina sobre la sustancia negra (SN), la principal estructura afectada en la enfermedad de Parkinson (EP), aún no se ha estudiado. Estudios recientes sugieren que la inflamación puede desempeñar un papel central en la pérdida celular que ocurre en la EP. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la metformina sobre la activación microglial de la SN de ratas utilizando el modelo animal de EP basado en la inyección del pro-inflamamógeno lipopolisacárido (LPS). Se usaron experimentos in vivo e in vitro para estudiar la activación de la microglía tanto a nivel celular como molecular. Nuestros resultados indican que la metformina inhibe de manera general la activación de la microglía medida a través de inmunocitoquímica
contra OX-6 (un marcador del complejo mayor de histocompatibilidad tipo II), IKKβ (un marcador proinflamatorio) y la arginase (un marcador antiinflamatorio). Además, los experimentos de qPCR revelan que el tratamiento con metformina minimiza los niveles de expresión de varias citocinas pro y antiinflamatorias. Además, este fármaco disminuye las formas fosforiladas de MAPKs así como la generación de ROS a través de la inhibición de la enzima NADPH oxidasa. Sin embargo, el tratamiento con metformina no protege las neuronas dopaminérgicas de la SN. Estos hallazgos sugieren que la metformina podría tener efectos farmacológicos beneficiosos y perjudiciales y plantea la pregunta sobre el posible uso de la metformina para la prevención y el tratamiento de la EP.
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Metformin treatment decreases microglial activation in the in vivo lps model of parkinson's disease.
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2020-10-22T10:13:24Z
2020-10-22T10:13:24Z
2020-09-17
Arévalo Díaz, S. (2020). Proteins influencing the septal junctions in heterocystous cyanobacteria. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/102145
La multicelularidad es una forma de organización biológica que ha aparecido de forma
independiente en muchos grupos filogenéticos a lo largo de la evolución. En los organismos
multicelulares se dan universalmente procesos de adhesión, comunicación y diferenciación
celular. La multicelularidad se observa en varios grupos bacterianos, estando las cianobacterias
entre los organismos multicelulares más antiguos de la Tierra. Las cianobacterias se caracterizan
por llevar a cabo la fotosíntesis oxigénica, mediante la cual se produce la liberación de oxígeno y
la producción de “poder asimilatorio” (ATP y ferredoxina reducida/NADPH), el cual se usa en la
fijación de CO2 atmosférico y en la asimilación de algunos otros nutrientes oxidados. Dentro de
este filo se pueden encontrar tanto organismos unicelulares como multicelulares. Aquellas
cianobacterias que se comportan como organismos multicelulares crecen formando filamentos, y
en condiciones de deficiencia de nitrógeno algunas de ellas pueden dar lugar a un proceso de
diferenciación celular produciendo un tipo celular llamado heterocisto. Este último lleva a cabo
la fijación de nitrógeno atmosférico (N2), mientras que el resto de las células del filamento,
denominadas células vegetativas, continúan con la fijación de CO2. Otras especies del filo tienen
la capacidad de formar aquinetos, que son una forma celular de resistencia que aparece en algunas
cianobacterias cuando las condiciones ambientales se vuelven adversas, y aún otras forman
hormogonios, pequeños filamentos móviles con una función de dispersión.
Este trabajo se ha realizado con la estirpe modelo Anabaena sp. PCC 7120, que es una
cianobacteria filamentosa formadora de heterocistos. Las cianobacterias poseen una envuelta
celular de tipo Gram negativa, y en las cianobacterias filamentosas la membrana plasmática
envuelve individualmente a cada célula mientras que la membrana externa, situada por fuera de
la capa de peptidoglicano, es continua definiendo por tanto un periplasma continuo. Cuando
Anabaena crece en ausencia de nitrógeno combinado, se produce la diferenciación de
heterocistos, formándose un patrón a lo largo del filamento de un heterocisto cada 10-15 células
vegetativas. El crecimiento diazotrófico exige una comunicación intercelular que permita el
intercambio de nutrientes y moléculas reguladoras de la diferenciación a lo largo del filamento,
llevándose a cabo esta comunicación a través de los nexos septales. Estos son unas estructuras
proteicas que comunican de forma directa las células adyacentes. Actualmente se conocen algunas
proteínas que forman parte de los nexos septales como son FraC y FraD, y algunas otras que son
esenciales para el correcto funcionamiento o ensamblaje de los mismos, como son SepJ, SepI,
HglK (demostrada en esta Tesis) o FraE. Para el ensamblaje de los nexos septales es necesario
una perforación del peptidoglicano existente entre las células adyacentes del filamento. Estas
perforaciones reciben el nombre de nanoporos y se encuentran en el disco septal de
peptidoglicano.
En la primera parte de este trabajo se intentó establecer una relación entre los nanoporos y la
comunicación intercelular mediada por los nexos septales, utilizando como herramientas un
marcador fluorescente y diferentes mutantes de Anabaena. El marcador fluorescente utilizado fue
la calceína, que posee la propiedad de difundir desde el exterior hasta el interior de la célula,
donde sufre un proceso de hidrólisis que le impide volver a atravesar la membrana plasmática,
quedando atrapada en el interior de la célula y emitiendo fluorescencia. Por medio de
experimentos de FRAP (“Fluorescence Recovery After Photobleaching”) se pudo calcular un
indicador cuantitativo de transferencia entre células adyacentes del filamento. Por otra parte,
mediante el aislamiento del peptidoglicano y su visualización por microscopía electrónica de
transmisión se pudo cuantificar el número de nanoporos de las estirpes estudiadas. Estos ensayos se realizaron en filamentos (cultivados en presencia o ausencia de nitrógeno combinado) de la
estirpe silvestre y de mutantes tanto de proteínas que intervienen en la formación de los nexos
septales como de proteínas que influyen en su ensamblaje y funcionamiento. Los resultados
obtenidos permitieron establecer una correlación entre el número de nanoporos y la transferencia
intercelular de calceína en filamentos que habían sido incubados en medio sin nitrógeno
combinado, pero no en aquellos incubados en presencia de nitrógeno, en los que se observaba una
elevada proporción de células no comunicantes.
En la segunda parte de esta Tesis se procedió a la caracterización de la proteína HglK, que
pertenece a la familia de las pentapeptide repeat proteins (PRP). HglK se compone de cuatro
segmentos transmembrana en su mitad N-terminal y de una sección soluble de localización
periplásmica que contiene el dominio PRP en su mitad C-terminal. Estudios previos de HglK
mostraron que mutantes que carecían de ella eran incapaces de crecer diazotróficamente y tenían
un espacio incrementado entre las células del filamento. En esta Tesis se abordó la localización
de HglK en estirpes de Anabaena que producían HglK fusionada a la superfolder-GFP (sfGFP) o
con una cola de histidinas o con la etiqueta molecular Strep II. Mediante microscopía confocal y
de fluorescencia y ensayos de inmunolocalización, se pudo establecer que HglK poseía una
localización preferentemente polar en las células de Anabaena. El estudio de mutantes hglK
determinó que HglK es necesaria para la integridad del filamento y para observar unos niveles
normales de intercambio molecular entre las células vegetativas del filamento. Sin embargo, los
experimentos realizados con mutantes de HglK y de otras proteínas septales mostraron que ni la
fragmentación de los filamentos ni la alteración en el intercambio molecular era mayor cuando se
combinaba la inactivación de HglK con la de otras proteínas septales. En la caracterización de
HglK también se pudo establecer que el fenotipo de crecimiento diazotrófico negativo del mutante
hglK estaba determinado por su incapacidad de fijar nitrógeno atmosférico como consecuencia
de un defecto en la expresión génica durante la diferenciación de los heterocistos, puesto de
manifiesto como una expresión disminuida de los genes del operón cox2 (citocromo oxidasa del
heterocisto) y nifHDK (nitrogenasa) en los mutantes hglK.
Los avances obtenidos mediante la caracterización de HglK y el conocimiento disponible sobre
la proteína SepJ, ponían de manifiesto la implicación de ambas proteínas en los nexos septales.
SepJ es una proteína integral de membrana con una localización focalizada en el centro del septo
intercelular. SepJ está compuesta por una permeasa en su parte C-terminal y por un linker (rico
en el amino ácido prolina) y un dominio coiled-coil en su parte N-terminal, la cual parece ser
periplásmica. En el tercer capítulo de esta Tesis se intentó identificar proteínas con las que
pudieran tener algún tipo de interacción tanto HglK como SepJ. El abordaje experimental se hizo
mediante el uso de estirpes de Anabaena que portaban HglK fusionada a la Strep II o SepJ
fusionada a la Strep II o a la GFP. Estas fusiones permitieron la purificación de las proteínas, que
se llevó a cabo bajo condiciones no desnaturalizantes, intentando evitar la disgregación de los
posibles complejos que pudieran formar con otras proteínas. Las muestras obtenidas tras las
purificaciones se analizaron por espectrometría de masas para identificar todas las proteínas
presentes en ellas. El análisis de los resultados mostró varias proteínas que podrían interactuar
con HglK o SepJ. El primer resultado destacable es la posible interacción entre ambas (SepJ y
HglK), aunque la co-purificación de las dos proteínas solamente se observó en los aislados de
SepJ. También destaca la presencia de dos proteínas comunes en los aislados de SepJ y HglK.
Estas proteínas son Alr2937 y Tic22 (Alr0114), ambas periplásmicas, la segunda de las cuales
con un papel importante en la formación de la membrana externa de Anabaena. Finalmente,
mientras que no se ha encontrado ninguna proteína que interaccione solamente con HglK, para SepJ se detectó Alr1690, una proteína anclada a la membrana plasmática que presenta dominios
periplásmicos de unión al peptidoglicano.
Continuando con el estudio de las proteínas septales, se quiso profundizar en el conocimiento de
las proteínas SepJ, FraC y FraD de otras cianobacterias filamentosas formadoras de heterocistos,
concretamente de cianobacterias simbióticas con diatomeas marinas. En el cuarto capítulo de esta
Tesis, se estudiaron estas proteínas septales codificadas por los genes de las cianobacterias
Richelia intracellularis (RintHH01) y Calothrix rhizosoleniae (CalSC01). R. intracellularis es un
endosimbionte obligado que vive en el citoplasma de la diatomea Hemiaulus hauckii, mientras
que C. rhizosoleniae es un exosimbionte facultativo de la diatomea Chaetoceros compressus,
pudiendo proliferar anclada extracelularmente a la diatomea o como un organismo de vida libre.
En Anabaena, fraC y fraD forman parte del operón fraCDE que también se encuentra presente
en CalSC01 y, sólo fraCD, en RintHH01. Respecto a SepJ, tanto RintHH01 como CalSC01
contienen genes que determinan proteínas homólogas a la de Anabaena. Los mutantes sepJ y
fraC-fraD de Anabaena muestran un fuerte fenotipo de fragmentación e imposibilidad de crecer
diazotróficamente, ambos fenotipos de fácil estudio, por lo que se intentó la complementación de
dichos mutantes con los genes de las cianobacterias simbióticas. Los genes sepJ y fraCD de
RintHH01 y los genes sepJ y fraCDE de CalSC01 se obtuvieron por síntesis química, en el caso
de sepJ de CalSC01 con un uso de codones adaptado a Anabaena, para ser introducidos en
mutantes de Anabaena que portaban las deleciones sepJ (estirpe CSVM34) o fraC-fraD (estirpe
CSVT22), respectivamente. La complementación de CSVM34 con sepJ de RintHH01 y de
CalSC01 se hizo de forma que la expresión de estos tenía lugar desde el promotor natural del sepJ
de Anabaena. Sin embargo, ni la complementación con sepJ de RintHH01 ni la realizada con
sepJ de CalSC01 consiguieron revertir el fenotipo mutante, ni siquiera parcialmente. En cambio,
sí se consiguió revertir al fenotipo silvestre cuando el mutante se complementó con sepJ de la
propia Anabaena utilizado como control positivo. Por otro lado, los genes fraC-fraD de
RintHH01 se transfirieron a la estirpe CSVT22 con dos estrategias distintas: en una su expresión
tenía lugar desde el promotor natural fraC de Anabaena, y en otra la expresión tenía lugar desde
el promotor glnA (promotor de fuerte expresión en condiciones de deficiencia de nitrógeno)
insertado en un plásmido replicativo de Anabaena. Por su parte, la complementación de CSVT22
con los genes fraC-fraD-fraE de CalSC01 solamente se intentó con expresión desde el promotor
glnA en un plásmido replicativo. Nuevamente ninguna de las complementaciones abordadas tuvo
éxito. Es más, las expresiones génicas realizadas bajo el promotor glnA causaban efectos
perjudiciales para Anabaena, como pudimos comprobar con controles utilizando los propios
genes de Anabaena, lo que sugiere que quizás no habíamos expresado los distintos genes en sus
niveles óptimos de funcionalidad.
La última parte de esta Tesis se dedicó a la realización de un breve estudio de la proteína FraE,
siendo esta la otra proteína codificada en el operon fraC-fraD-fraE de Anabaena. FraE es una
proteína de membrana necesaria para la integridad del filamento. En este capítulo se estudió su
localización, para lo que se construyó una estirpe de Anabaena que producía FraE-sfGFP. Los
ensayos de análisis de fluorescencia de la GFP llevados a cabo con esta estirpe pusieron de
manifiesto que FraE se localiza principalmente en los polos de los heterocistos y que sus niveles
disminuyen a las 48 horas de inducción en un medio sin nitrógeno combinado.
eng
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Proteins influencing the septal junctions in heterocystous cyanobacteria
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2021-08-10T14:31:51Z
2021-08-10T14:31:51Z
1995-07-01
Mateos Matos, M.I. (1995). La gliceraldehido-3-fosfato dehisdrogenasa no fosforilante de los eucariotas fotosintéticos: distribución, regulación y función fisiológica. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/116719
La g3p dhasa no fosforilante dependiente de nadp+ es un enzima citosólico que se encuentra presente en organismos fotosintéticos eucarióticos. Los niveles celulares de las tres actividades g3p dhasas de microalgas aumentan en cultivos fotoautotróficos hasta niveles máximos debido a síntesis de novo de proteínas, manteniéndose constante en la oscuridad. La presencia de azucares metabolizables, la ausencia de co2 y las condiciones microaeróbicas provocan una drástica caída de la actividad g3p dhasa cloroplástica hasta valores indetectables. En cambio, los azúcares provocan un aumento en los niveles de las g3p dhasas citosólicas. Estos patrones de regulación permiten sugerir un papel para la g3p dhasa no fosforilante, alternativo al propuesto en fotosíntesis en el metabolismo degradativo de carbohidratos. La purificación del enzima de c. Reinhardtii ha permitido realizar estudios in vitro sobre su capacidad de generación de protones y su participación en el transporte de los mismos desde el cloroplasto al citosol.
spa
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La gliceraldehido-3-fosfato dehisdrogenasa no fosforilante de los eucariotas fotosintéticos: distribución, regulación y función fisiológica
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2018-02-26T13:35:50Z
2018-02-26T13:35:50Z
1992
González Escribano, M.F. (1992). Producción y caracterización de anticuerpos monoclonales humanos autorreactivos y polirreactivos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/70589
spa
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Producción y caracterización de anticuerpos monoclonales humanos autorreactivos y polirreactivos
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2017-12-18T10:22:37Z
2017-12-18T10:22:37Z
2015-04-09
Ojeda Vila, M.t. (2015). Tendencia en el diagnóstico de melanoma y sus determinantes clínicos, demográficos y sanitarios. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/67741
Antecedentes: A pesar de los esfuerzos y las mejoras en política de salud que se han realizado en los últimos años para el diagnostico precoz del melanoma cutáneo (MC), no se conoce el impacto real que tienen sobre el pronostico inicial de estos pacientes.
Objetivo: Analizar el papel de los factores determinantes de prestación de asistencia sanitaria en el pronóstico inicial del melanoma cutáneo.
Métodos: Estudio transversal y multicéntrico se realizó en 14 hospitales públicos y reclutó 3550 pacientes con MC entre 2000 y 2009. Las variables de estudio fueron analizados utilizando análisis univariante y multivariante para identificar su papel en las variaciones observadas.
Resultados: En un periodo de 10 años, el número de pacientes con MC aumentó en un 78,54%, con un porcentaje de MC in situ (Tis) o superficial con un espesor Breslow \ 1 mm (T1) que representa 51.72% del número total
en el año 2000, aumentando a 62,23% al final del período de estudio (p = 0,005). Entre las variables que explican la variación en la tendencia del MC destacan los MC diagnosticados después del año 2004 (odds univariados ratio [OR], 1,43 [P \ 0,001];multivariado OR, 1,36 [p = 0,005]) y el diagnóstico en centros con sistemas de referencia específica de la vía rápida (univariante
OR, 1,24 [p = 0,01]; multivariado OR, 1,59 [p = 0,025]),
Limitaciones: La posible limitación principal de este estudio es su carácter retrospectivo.
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Dermatología
Epidemiología
Tendencia en el diagnóstico de melanoma y sus determinantes clínicos, demográficos y sanitarios
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2020-05-14T15:41:26Z
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1986-09-02
https://hdl.handle.net/11441/96713
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Estudio de las glicoproteinas del sistema mayor de histocompatibilidad en una línea tumoral humana (MSM). Regulación por agentes biológicos y farmacológicos
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2008-03-03
https://hdl.handle.net/11441/94468
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
Alteración de las propiedades físico-químicas y funcionales de los citocromos C respiratorios ocasionada por la nitración de tirosinas
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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2015-04-16T09:18:54Z
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1986
Ayala Gómez, A. (1986). Estudio de la regulación a largo plazo de las enzimas productoras de NADPH implicación del requerimiento de NADPH. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/23885
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/23885
El NADPH es uno de los principales productos finales de los procesos metabólicos, siendo al mismo tiempo sustrato de importantes reacciones metabólicas y de destoxificación.|
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Enzimas
Metabolismo
Estudio de la regulación a largo plazo de las enzimas productoras de NADPH implicación del requerimiento de NADPH
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis