2024-03-29T07:56:11Zhttps://idus.us.es/oai/requestoai:idus.us.es:11441/238782024-02-15T07:28:43Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2015-04-16T09:18:49Z
urn:hdl:11441/23878
Estudio molecular de los genes de la cavernomatosis regulación de los transcritos y expresión de CCM1
Lucas Lucas, Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Genética
Los cavernomas son malformaciones vasculares localizadas principalmente en sistema nervioso central (SNC). Estas lesiones se producen por la dilatación cavernosa de vasos sanguíneos sin ninguna intervención del parénquima nervioso. La prevalencia del 0.1-0.5% en la población general se dedujo de estudios seriados de autopsias, tanto en población Europea como Americana. La estimación real de la incidencia en la población es difícil de establecer por la penetrancia variable de esta enfermedad, habiendo muchos pacientes asintomáticos que solamente se detectarían por técnicas de imagen de resonancia magnética cerebral (MRI). Los cavernomas dan cuadros de alteraciones neurológicas locales, con crisis de epilepsia, o generales tipo cefaleas y accidentes cerebro-vasculares con hemorragia. La penetrancia clínica es muy variable y a veces es incompleta con saltos generacionales asintomáticos. La penetrancia radiológica, estudiada mediante resonancia magnética de cerebro, es más fiable en relación al status de portador o paciente. El diagnóstico clínico se confirma por MRI, realizándose actualmente mediante tecnología ecogradiente. Las características fenotípicas de los pacientes con cavernomas destacan por ser muy variables dentro de una misma generación o en distintos sujetos que comparten la misma mutación, además de las notables diferencias en la edad de comienzo e incluso la existencia de generaciones aparentemente asintomáticas. Este fenómeno hace resaltar la importancia de la patogénesis en la malformación cavernomatosa de la que serían responsable tanto factores intrínsecos como otros extrínsecos, no genéticos. En otras palabras, la malformación cavernomatosa podría deberse a la existencia de fenómenos puramente genéticos, como son las mutaciones detectadas, o bien a otros|
2015-04-16T09:18:49Z
2015-04-16T09:18:49Z
2014
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Mondejar García, R.M. (2014). Estudio molecular de los genes de la cavernomatosis regulación de los transcritos y expresión de CCM1. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/23878
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/23878
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2016-06-15T07:16:15Z
urn:hdl:11441/42269
Caracterización y regulación del sistema receptor-efecto el péptido intestinal vasoactivo en macrófagos peritoneales de rata
Calvo Gutiérrez, Juan Ramón
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La historia del péptido intestinal vasoactivo (VIP) se remonta a 1967, fecha en la que Sami Said, un nuemólogo que investigaba en Houston (Texas), descubre actividad vasoactiva, vasodilatadora, e hipotensiva en extractos acuosos de pulmón (SAID y MUTT, 1969). Pensando que esta actividad se debía a uno o varios péptidos presentes en el extracto, Said trata de aislar la sustancia vasoactiva en el laboratorio del prfesor V. Mutt, en Estocolmo, y, no disponiendo de extractos pulmonares, utiliza extractos intestinales destinados a la preparación de secretina que se habían revelado igualmente portadores de actividad vasodilatadora (SAID y MUTT, 1970). El gran parecido del VIP a la secretina facilitó su rápida purificación a partir de intestino delgado de cerdo (SAID y MUTT, 1972), lo que supuso el inicio de una profunda y extensa investigación para comprender el papel fisiológico jugado por el VIP. Se caracterizó el sistema receptor-efector para VIP en varias regiones del aparato digestivo, pensándose en él como un candidato a hormona gastrointestinal y/o como un péptido de acción local o paracrina (POLAK, 1974). El descubrimiento de VIP en los cuerpos, axones, y dendritas neuronales (GIACHETTI et al., 1977), el hallazgo de que se concentraba en las terminaciones presinápticas (JOHANSSON y LUNDBERG, 1981), y su abundancia en cortex cerebral, amígdala, estriado, núcleo supraquiasmático, ganglios simpáticos, nervio vago, nervio ciático, y en otras muchas localizaciones del sistema nervioso central y periférico (LARSSON et al., 1976; HOKFELT et al., 1982), hicieron que cambiara la concepción del VIP como hormona gastrointestinal y que comenzara a vérsele como neuropéptido con funciones neuromoduladoras o neurotrasmisoras (GOYAL et al., 1980; ROSSELIN et al., 1982), punto de vista reforzado y confirmado por la caracterización de receptores para VIP en numerosas zonas del sistema nervioso (ROBBERECHT et al., 1978; STAUN-OLSEN et al., 1982).
Cuando se descubren receptores para VIP en células mononucleares sanguíneas humanas (GUERRERO et al., 1981; OTTAWAY et al., 1983) y, poco después, también se encuentran receptores en monocitos humanos (WIIK et al., 1985), en linfocitos humanos y de rata (CALVO et al., 1986a y 1986b), y en diferentes líneas celulares de estirpe linfoblástica (BEED et al., 1983; ROBBERECHT et al., 1988), observándose a la vez que el VIP influye en la fisiología de los linfocitos T (OTTAWAY, 1984), en la síntesis de inmunoglobulinas (STANISZ et al., 1986), o en la función de las células NK (ROLA-PLESZCZYNSKI et al., 1985), otra nueva concepción del VIP empieza a tomar forma, la que lo considera un péptido modulador de la función inmune dentro de un eje neuro-inmune (O’DORISIO et al., 1985b) o, mejor aún, dentro de un eje neuro-inmuno-endocrino (FANTINI et al., 1985).
A la vez que se produce la evolución conceptual sobre el papel fisiológico del VIP se profundiza en el estudio de la participación del macrófago en la respuesta inmune: se comprueba que los antígenos deben ser procesados por el macrófago y luego “presentados” por él a los linfocitos (TREVES et al., 1976), y que los macrófagos secretan una serie de sustancias, las monoquinas, que modulan la respuesta inmune, siendo una de ellas, la interleukina 1 (IL-1), un factor esencial para el desarrollo de la respuesta inmune específica (AARDEN et al., 1979). Al mismo tiempo , se caracterizan receptores en el macrófago para diferentes neuropéptidos y hormonas; insulina y glucagón (BLECHER y GOLDSTEIN, 1977), parathormona (PERRY et al., 1984), neurotensina y sustancia P (BAR-SHAVIT y GOLDMAN, 1986), receptores que pueden intervenir en la regulación de diversas funciones del macrófago como crecimiento, diferenciación, activación, ó migración (ADAMS y HAMILTON, 1984).
Ante las evidencias de la acción moduladora del VIP en el eje neuro-inmuno-endrocrino (TSENG y O’DORISIO, 1989), y, teniendo en cuenta el papel crucial que juega el macrófago en el inicio y regulación de la respuesta inmune específica, planteamos la hipótesis de que el macrófago expresara receptores específicos para VIP, a través de los que pudiera modular la función inmune, siendo ésta la cuestión que se intenta resolver en el presente trabajo.
Introducimos el tema con una revisión de los conocimientos actuales sobre el VIP y sobre el macrófago.
En el trabajo de investigación que a continuación se expone, planteado desde la hipótesis de que existen interacciones VIP-macrófago con relevancia funcional, se trata de dar respuesta a las siguientes interrogantes:
1ª) ¿Existen en el macrófago peritoneal de rata receptores específicos para el péptido intestinal vasoactivo (VIP)?
2ª) ¿Es el AMPc el segundo mensajero del VIP en los macrófagos peritoneales de rata?
3ª) ¿Modula la somatostatina la producción de AMPc estimulada por VIP en los macrófagos peritoneales de rata?
4ª) ¿Está regulada por nucleótidos la interacción del VIP con sus receptores en membranas de macrófagos peritoneales de rata?
Para tratar de responder a estas cuestiones, se han propuesto los siguientes objetivos fundamentales:
A. Caracterizar los receptores para VIP en macrófagos peritoneales de rata.
B. Caracterizar el sistema efector del VIP en macrófagos peritoneales de rata.
C. Estudiar la modulación por somatostatina de la producción de AMPc en macrófagos peritoneales de rata.
D. Caracterizar los receptores para VIP en membranas de macrófagos peritoneales de rata.
E. Estudiar la regulación por nucléotidos de la interacción del VIP con sus receptores en macrófagos peritoneales de rata.
2016-06-15T07:16:15Z
2016-06-15T07:16:15Z
1991-12-18
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Segura Egea, J.J. (1991). Caracterización y regulación del sistema receptor-efecto el péptido intestinal vasoactivo en macrófagos peritoneales de rata. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/42269
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/42269
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/424372024-02-13T08:52:02Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2016-06-17T11:14:50Z
urn:hdl:11441/42437
Prevalencia de factores de riesgo cardiovascular asociados a marcadores genéticos en población andaluza
Vilches Arenas, Ángel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Factor de riesgo
Polimorfismo genético
Enfermedad cardiovascular
Andalucía
Introducción: Las enfermedades cardiovasculares siguen siendo a día de hoy una de las más importantes causas de morbimortalidad en todo el mundo y también en los países de nuestro entorno.Los principales factores de riesgo que influyen en la probabilidad de la aparición de enfermedad cardiovascular son, factores de riesgo clasicos (hipertensión arterial, hipercolesterolemia/dislipemia, diabetes mellitus, obesidad y tabaquismo), los emergentes (Proteína C reactiva, Insulina, Lipoproteína (a), homocisteína y hemoglobina glicosilada), ademas de los factores no modificables como, la edad, el sexo los antecedentes familiares y personales, junto con los marcadores genéticos. Entre estos factores genéticos hemos analizado por su relación con el aumento de la susceptibilidad en el desarrollo de enfermedad cardiovascular; los que tienen un papel fundamental en el metabolismo lipídico como la Apolipoproteína E; los que estimulan la lipólisis como el receptor β 3 adrenérgico; la regulación de la presión sanguínea por parte de la enzima convertidora de angiotensina (ECA); y la enzima metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) por su regulación del metabolismo de la homocisteína.
Objetivos: Conocer las prevalencias de esos cuatro polimorfismos genéticos y su asociación con las enfermedades cardiovasculares en la población adulta de Andalucía en el año 2008. Como objetivos secundarios, conocer la relación de los polimorfismos genéticos con los factores de riesgo cardiovascular clásicos, analizar la asociación de ellos con factores de riesgo cardiovascular emergentes; estudiar la presencia de polimorfismos en relación con el grado de adherencia al modelo de dieta mediterránea; así como identificar hipotéticos factores relacionados con enfermedad cardiovascular, en base a estos polimorfismos genéticos, características sociodemográficas, hábitos de vida y factores de riesgo clásicos y emergentes.
Métodos: Estudio observacional descriptivo transversal, de base poblacional, basado en una cohorte de participantes del estudio DRECA 2, que se desarrolla desde los años 2005 al 2008 en Andalucía. Participan 35 unidades de gestión clínica (UGC), pertenecientes a 22 Distritos de Atención Primaria, los participantes se seleccionaron a lo largo de toda la comunidad, siendo representativos de la población y distribuidos homogéneamente en cada una de las 8 provincias andaluzas.
Los datos se recogen, tras la firma del documento de consentimiento informado, en el cuaderno de recogida de datos (CRD) estructurado se implementa un cuestionario de variables sociodemográficas (sexo, edad, ocupación); Encuesta dietética (cuestionario de adherencia al patrón de dieta mediterránea); Exploración física (IMC, perímetro abdominal, presiones arteriales sistólica y diastólica); Parámetros clínicos (antecedentes personales: diagnóstico previo de HTA, dislipemia, Obesidad, DM, ECV, historia de muerte prematura en familiares de primer grado por enfermedad cardiaca); Hábitos de vida (consumo de tabaco, alcohol, ejercicio físico en el trabajo y en el tiempo libre).
Se realizó una valoración antropométrica (peso, estatura, perímetro de la cintura (PC), medida de la presión arterial, de la frecuencia cardíaca y se tomaron muestras sanguíneas en ayunas para la determinación de parámetros analíticos (glucemia basal, colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, triglicéridos, PCRus, hemoglobina glicosilada (HbA1c), Lp(a), homocisteína, insulinemia índice HOMA y biomarcadores genéticos de RCV). La obesidad fue dividida entre obesidad definida por un IMC ≥30kg/m2, sobrepeso por un IMC de 25-29,9 kg/m2 y peso normal por un IMC <25 kg/m2.
Análisis estadístico: Se describieron las variables cuantitativas, se resumieron con medias y desviaciones típicas, en caso de distribuciones muy asimétricas con medianas y percentiles (P25 y P75), mientras que las variables cualitativas con frecuencias y porcentajes; también se obtuvieron estimadores puntuales e intervalos de confianza al 95% para los diferentes índices obtenidos, se analizó la significación estadística mediante test de confianza chi-cuadrado (χ²).
Se realizó un análisis inferencial para comparaciones y relación entre variables cuantitativas. Se compararon medias para variables cuantitativas. Correlaciones bivariadas para valorar la asociación lineal entre pares de variables numéricas. Por último se desarrolló análisis por regresión logística multivariante, para relación entre variable dependiente dicotómica y una o varias variables predictoras.
Resultados: Sobre una muestra de 2.395 participantes (1.211 mujeres, 53%, el resto hombres). La edad media (DE) en años de las mujeres fue de 45,3 (15,2) y de los hombres de 45,1 (15,6). Se calcularon las prevalencias de los genotipos de los distintos polimorfismos de riesgo cardiovascular: Apolipoproteína E (Apo E): E2/E2 (0,3%), E2/E3 (10,1%), E2/E4 (1,3%) E3/E3 (70,6%), E3/E4 (16,3%), E4/E4 (1,3%); receptor β3 Adrenérgico (β3-ADR): CC (0,4%); CT (14,9%); TT (84,7%); Enzima Convertidora de Angiotensina (ECA): DD (11,4%); ID (42,8%); II (45,8%); MetilenTetraHidroFolato Reductasa (MTHFR): CC (37,0%); CT (47,9%); TT (15,1%). Se encontró relación significativa entre el genotipo Apo E4/E4 y el aumento del colesterol LDL. La variante TT del MTHFR, mostró relación con homocisteína elevada. Se encontró asociación de los portadores del alelo Apo E4, con dislipemia. El polimorfismo de riesgo β3 Adrenérgico (CT), y el de la Apo E4 son los que presentan una mayor asociación con enfermedad cardiovascular.
Conclusiones: Los polimorfismos más frecuentes en población andaluza de entre 21 y 75 años, en el año 2008 fueron, el β3 Adrenérgico TT (84,7%) seguido del Apo E3/E3 (70,6%), el menos prevalente fue el Apo E2/E2 (0,3%). Los portadores de los polimorfismos de riesgo, β3 ADR (CT) y Apo (E2/E4, E3/E4, E4/E4) son los que presentan más alta probabilidad para desarrollar enfermedad cardiovascular.
Se encontró por análisis de regresión logistica de los datos, que los hombres de mediana edad en adelante, fumadores, que presentan dislipemia, diabetes, obesidad abdominal, el polimorfismo de riesgo Apo E junto con el β3 Adrenérgico, tenían más probabilidad de padecer una enfermedad cardiovascular.
2016-06-17T11:14:50Z
2016-06-17T11:14:50Z
2016-02-04
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Ramos Molina, M.A. (2016). Prevalencia de factores de riesgo cardiovascular asociados a marcadores genéticos en población andaluza. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/42437
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/42437
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2016-04-07T12:35:40Z
urn:hdl:11441/39748
Eficacia de los marcadores bioquímicos para el diagnóstico y pronóstico de la artritis reumatoide en pacientes que acuden a una consulta de atención especializada
Hernández Cruz, Blanca
González Rodríguez, Concepción
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Falta palabras claves
La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune sistémica, inflamatoria y crónica que afecta al 0,5-1% de la población. Se asocia a daño articular severo y provoca un grave sufrimiento a la persona que la padece, derivando en una discapacidad importante en fases evolucionadas de la enfermedad y con pérdida de la calidad de vida. El diagnóstico y tratamiento precoz de la enfermedad es fundamental porque reduce la actividad, la progresión y la mortalidad asociada a la misma. Con ello se evita el deterioro casi inevitable de las articulaciones del enfermo y por lo tanto mejora su calidad de vida.Los nuevos criterios de clasificación de la AR del año 2010 introducen cambios importantes en la valoración clínica y dan mucha importancia a los hallazgos analíticos: marcadores serológicos (Factor Reumatoide (FR) y anti-CCP) y reactantes de fase aguda (PCR y VSG). Además, la enfermedad tiene un importante componente genético definido por el epitopo compartido HLA-DRB1 cuya presencia se asocia a formas más severas de la enfermedad.
En nuestro estudio formado por 276 sujetos (106 pacientes con AR, 105 pacientes con otras enfermedades reumatológicas y 65 sujetos control) nos planteamos como objetivo principal determinar la relación entre FR, anti-CCP y EC con el diagnóstico y pronóstico de pacientes que acuden por primera vez a la consulta de artritis precoz de la Unidad de Reumatología con sospecha de AR. En primer lugar estudiamos el valor diagnóstico de los biomarcadores en una consulta de atención primaria y de atención especializada de artritis precoz. Para ello investigamos si los marcadores serológicos junto con el epitopo compartido permiten identificar a individuos que acuden a las consultas con artritis de inicio y presentan una mayor predisposición al desarrollo de formas graves y agresivas de la enfermedad. En una consulta de atención primaria, la combinación “anti-CCP o FR” presentó el mejor valor diagnóstico para realizar un cribado de pacientes con sospecha de AR y derivarlos a una consulta especializada de artritis precoz mientras que en dicha consulta especializada de artritis precoz, los anti-CCP presentaron una alta especificidad para la AR que a su vez resulta en un alto VPP y nos permitió confirmar el diagnóstico de AR en dicha consulta.
En los pacientes con AR la frecuencia de los anti-CCP, FR y doble positividad fue del 65%, 81% y 60%, respectivamente mientras que en otras enfermedades reumatológicas fue del 4%, 24% y 4%, respectivamente. En el grupo control ningún sujeto presentó los anti-CCP positivos mientras que el FR fue positivo en el 11% de ellos. Los anticuerpos anti-CCP y FR presentaron una alta asociación con la AR aunque el FR también estuvo presente en un reducido grupo de pacientes del grupo NOAR a títulos bajos.La cuantificación de los anti-CCP es fundamental en aquellos pacientes donde el FR es negativo o donde el diagnóstico diferencial con otras enfermedades reumáticas es complicado. El epitopo compartido presentó una alta asociación la con AR. La presencia del genotipo DR4, asociado a un peor pronóstico, se asocia fuertemente con la AR en nuestra población.
A continuación nos planteamos estudiartanto el efecto como la interacción entre factores genéticos y ambientales sobre los anticuerpos anti-CCP y FR en los pacientes diagnosticados de AR. De los resultados obtenidos concluimos que el epitopo compartido y el tabaquismo eran factores de riesgo para el desarrollo de los anticuerpos anti-CCP y FR. En los pacientes con EC positivo la intensidad del consumo de tabaco estuvo más fuertemente asociada que el hábito de fumar con un riesgo incrementado de anti-CCP positivos observándose una interacción entre ambos factores. Sin embargo, para el FR no se observó una interacción entre dichos factores.
Por último, estudiamos el valor pronóstico de los marcadores bioquímicos en los pacientes diagnosticados de AR. Por un lado estudiamos la relación existente en los marcadores bioquímicos con las variables clínicas de gravedad de la enfermedad al momento del diagnóstico. Al momento del diagnóstico la presentación clínica de los pacientes con y sin biomarcadores positivos, referido a los anti-CCP, FR y epitopo compartido, fue similar.Tras ello, se estudió el valor pronóstico de los marcadores bioquímicos en un grupo de59 pacientes diagnosticados de AR y en seguimiento durante un periodo de tres años. Cuando se diagnostica la AR, los anti-CCP poseen valor pronóstico. Independientemente del tratamiento empleado y con un punto de corte de 120 UI/mL, los pacientes con anti-CCP positivos poseen una AR más activa a los tres años de evolución de la enfermedad. El FR y el epitopo compartido no presentaron valor pronóstico durante los 3 años de seguimiento de los pacientes con AR.
2016-04-07T12:35:40Z
2016-04-07T12:35:40Z
2016-01-29
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
http://hdl.handle.net/11441/39748
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/39748
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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2021-03-11T18:23:34Z
urn:hdl:11441/105955
Evaluación de la rentabilidad diagnóstica (eficacia-coste) de la determinación del cortisol en saliva en el diagnóstico del síndrome de Cushing
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2021-03-11T18:23:34Z
2021-03-11T18:23:34Z
2007-01-07
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León Justel, A. (2007). Evaluación de la rentabilidad diagnóstica (eficacia-coste) de la determinación del cortisol en saliva en el diagnóstico del síndrome de Cushing. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/105955
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2021-08-05T10:10:31Z
urn:hdl:11441/116611
Tolerancia al ejercicio y nivel de actividad física antes y después de la cirugía de corrección del pectus excavatum
Almadana Pacheco, Virginia
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Tolerancia al ejercicio
actividad física,
calidad de vida
pectus excavatum
cirugía de corrección
El pectus excavatum (PE) es una deformidad de la pared torácica caracterizada por
una depresión esternal. Aunque hay evidencias en la literatura de alteraciones
principalmente en relación con el esfuerzo, los efectos fisiológicos del PE y su posterior
resolución tras la corrección en relación con la intolerancia al ejercicio son objeto de
controversia, a tras la intervención, aunque no se ha relacionado con la severidad del
PE. Se pretendió valorar la influencia en la tolerancia al esfuerzo antes y después de la
cirugía de corrección mediante la realización de pruebas de esfuerzo cardiopulmonar
máximas y submáximas, y su correlación con el nivel de AF mediante cuestionarios
específicos y el uso de holter de AF; así como el impacto de la cirugía en la calidad de
vida de los pacientes. Se incluyó una población de 19 PE intervenidos mayoritariamente
mediante la técnica de Nuss, quienes presentaron alteraciones cardiopulmonares leves
principalmente evidenciadas durante el esfuerzo; con una mejora tras la cirugía de
corrección en la tolerancia al ejercicio medida mediante pruebas de esfuerzo
cardiopulmonar máxima y, fundamentalmente, submáxima, independientemente de los
hábitos de AF que realizaban los pacientes. Así, como una mejora en la calidad de vida
de los pacientes con PE tras la intervención, con un mayor impacto en la esfera
psicosocial.
2021-08-05T10:10:31Z
2021-08-05T10:10:31Z
2021-02-09
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Gómez-Bastero Fernández, A.P. (2021). Tolerancia al ejercicio y nivel de actividad física antes y después de la cirugía de corrección del pectus excavatum. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/116611
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-03-17T14:15:23Z
urn:hdl:11441/94208
Acciones de la melotonina en hipotálamo de rata mediadas a través de la inhibición de la óxido nítrico sintasa
Osuna Fernández, Carmen
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-03-17T14:15:23Z
2020-03-17T14:15:23Z
1999-07-26
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/94208
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2021-03-18T14:57:47Z
urn:hdl:11441/106287
Liproteínas, apolipoproteínas y Lp(a) en pacientes con alteraciones tiroideas
Fabiani Romero, Fernando
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2021-03-18T14:57:47Z
2021-03-18T14:57:47Z
1997-02-14
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sánchez Sánchez, B. (1997). Liproteínas, apolipoproteínas y Lp(a) en pacientes con alteraciones tiroideas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/106287
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-03-22T08:46:09Z
urn:hdl:11441/84559
Estrategias de selección espermática en humanos: impacto en la calidad del ADN y en el éxito reproductivo.
Gosalvez Berenguer, Jaime
Sánchez Martín, Fernando
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunológica
El objetivo de esta Tesis Doctoral es determinar qué estrategias
muestran mayor eficacia para seleccionar en una muestra seminal al
espermatozoide más adecuado que permita el éxito clínico en los tratamientos de reproducción asistida en parejas estériles por un factor masculino. De este modo se pretende que la evidencia empírica, desde la aplicación del método científico, permita esclarecer si los protocolos del Médico en la consulta como los del Andrólogo en el laboratorio son los más apropiados y eficientes para lograr el éxito en las Técnicas de Reproducción Asistida. En cada uno de los bloques abordados a través de las publicaciones presentadas se persigue lograr una mejora en la selección espermática. Por un lado en esta Tesis se ha llevado a cabo la demostración empírica de mejoras en los protocolos de recogida de muestra seminal (Sánchez-Martín et al., 2013; Hebles et al., 2015) para ser implementados en la práctica clínica y lograr un mayor éxito en las técnicas de reproducción asistida. Se han realizado también estudios comparativos de la integridad del ADN en la calidad seminal de los espermatozoides testiculares (extraídos directamente del testículo) frente a aquellos recogidos a través de la eyaculación (Esteves et al., 2015). Y por último se han realizado estudios para la mejora de los protocolos de procesamiento en el laboratorio en cuanto a la fragmentación del ADN espermático (Sánchez-Martín et al., 2017) y de su velocidad de degradación tras la recogida de la muestra seminal (Tvrdá et al., 2018) para determinar cuál debe ser el tiempo máximo de espera para procesar una muestra antes de que se vea afectada notablemente su calidad. Además estos datos obtenidos han permitido determinar nuevos parámetros que pueden ser aplicados para
clasificar a los donantes de semen según su potencial de fertilidad.
2019-03-22T08:46:09Z
2019-03-22T08:46:09Z
2019-03-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sánchez Martín, P. (2019). Estrategias de selección espermática en humanos: impacto en la calidad del ADN y en el éxito reproductivo.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/84559
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-03-19T18:49:06Z
urn:hdl:11441/94359
Citogenética de las lesiones proliferativas del tiroides humano en cultivo celular
Novales Huerta, María de los Ángeles
Galera Davidson, Hugo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-03-19T18:49:06Z
2020-03-19T18:49:06Z
1991-10-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/94359
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2022-07-19T10:44:45Z
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Utilidad clínica de los estudios genéticos y técnicas de secuenciación masiva en los pacientes con diabetes mellitus. Estudio retrospectivo en área sanitaria sur de Sevilla
Cózar León, María Victoria
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Medicina
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Diabetes mellitus
clasificación, medicina de precisión
genética
secuenciación de nucleótidos de alto rendimiento
terapéutica
Introducción e hipótesis
El desarrollo en los últimos años de los estudios genéticos y las técnicas de secuenciación
masiva o ensayos de nueva generación (Next Generation Sequencing-NGS) ha permitido
el análisis simultáneo de múltiples genes y la identificación de nuevas variantes
mutacionales asociadas al desarrollo de diabetes tipo monogénica. Estos estudios forman
parte de la llamada medicina de precisión que intenta ajustar el tratamiento a las
características moleculares de distintos grupos de pacientes. Nuestra hipótesis de trabajo
es que las técnica moleculares facilitan la correcta clasificación de los pacientes con
diabetes mellitus y tienen impacto en su evolución y tratamiento.
Objetivos
Determinar el impacto clínico de los estudios genéticos en el diagnóstico y el plan
terapéutico de los pacientes con diabetes mellitus. Caracterización de los pacientes a los
que se les solicita estudio de diabetes monogénica. Descripción y comunicación de las
variantes mutacionales detectadas en los estudios genéticos. Estudiar la asociación entre
la edad al diagnóstico de la diabetes mellitus y la posible modificación en el plan
terapéutico tras la realización del estudio genético. Estudiar la asociación entre la
clasificación de DM previa al estudio genético molecular y la modificación terapéutica
post test.
Pacientes y métodos
Estudio observacional descriptivo, longitudinal y retrospectivo sobre una muestra de 109
pacientes con alteración del metabolismo hidrocarbonado o DM atendidos en consultas
de endocrinología y nutrición del AGSSS a los que se les ha solicitado estudio genético
de diabetes monogénica, seleccionados de forma consecutiva durante el periodo 2017-
2021, según los criterios de inclusión y exclusión establecidos. Se han recogido variables
clínicas, epidemiológicas, parámetros antropométricos y parámetros analíticos
relacionados con el diagnóstico de la diabetes mellitus y la funcionalidad de la célula beta
(péptido C y anticuerpos antiislotes de células beta pancreáticas). Resultados
En 54 (49,54%) de los 109 pacientes del grupo en estudio se detectaron 68 variantes
genéticas asociadas a diabetes monogénica. 27 de esas variantes no estaban descritas en
la literatura ni en las bases de datos consultadas en el momento de redacción del informe
molecular por parte del laboratorio. Fueron categorizadas como variantes de significado
clínico incierto el 86,75%, como probablemente patogénicas el 7,35% y patogénicas el
5,9%. Tras la realización del estudio genético el 22,5% de los pacientes modificaron su
tratamiento farmacológico o el plan terapéutico. La sospecha de diabetes monogénica
previa a la realización del estudio genético NGS se ha asociado en nuestro grupo de
estudio y de forma independiente a un mayor número de diagnósticos moleculares de
diabetes monogénica y a una mayor probabilidad de modificar el tratamiento o el plan
terapéutico (se observa en nuestra muestra que la diabetes monogénica genera respecto
a la clásica más probabilidad de modificación de tratamiento: OR 4,66
IC95%[1,55;14,04]). El menor tiempo de evolución de la diabetes mellitus en el momento
de la solicitud del estudio genético se ha asociado de forma significativa a la posibilidad
de modificar el tratamiento o el plan terapéutico. La presencia de características
sindrómicas antes de la realización del estudio genético se ha relacionado de forma
independiente a una mayor probabilidad de diagnóstico molecular de diabetes
monogénica. No se ha encontrado relación entre la edad al diagnóstico de la diabetes
mellitus y la posible modificación en el plan terapéutico de la diabetes mellitus. Conclusiones
-La detección de variantes mutacionales asociadas a diabetes monogénica en los estudios
genéticos o de secuenciación masiva NGS permite realizar modificaciones precisas y
personalizadas en el tratamiento o el plan terapéutico de los pacientes con diabetes o
alteraciones del metabolismo hidrocarbonado.
-La clasificación diagnóstica correcta de la DM mediante parámetros clínicos y otras
variables de laboratorio no genéticas permite seleccionar de forma adecuada a los
pacientes candidatos al estudio genético, aumentando la posibilidad de detección de
variantes asociadas a diabetes monogénica y la modificación del tratamiento
farmacológico o el plan terapéutico.
-Son necesarios estudios prospectivos, multicéntricos y con un tamaño muestral más
elevado que confirmen lo observado en nuestro estudio retrospectivo.
2022-07-19T10:44:45Z
2022-07-19T10:44:45Z
2022-06-07
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Fernández Peña, J.I. (2022). Utilidad clínica de los estudios genéticos y técnicas de secuenciación masiva en los pacientes con diabetes mellitus. Estudio retrospectivo en área sanitaria sur de Sevilla. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/135560
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-02-12T09:17:22Z
urn:hdl:11441/70201
Utilidad de las cadenas ligeras libres en líquido cefalorraquídeo como biomarcador de conversión a esclerosis múltiple clínicamente definida.
Bermudo Guitarte, Carmen
García Sánchez, María Isabel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La Esclerosis Múltiple (EM) es la enfermedad crónica inflamatoria
desmielinizante más común del sistema nervioso central (SNC). Es una de las principales causas de discapacidad neurológica en población adulta joven, entre 20-30 años de edad, que afecta al doble de mujeres respecto a los hombres. En todo el mundo hay alrededor de 2,5 millones de personas afectadas de EM (Compston A, 2002). Algunas personas estarán mínimamente afectadas a lo larGo de su vida, mientras que otras degenerarán rápidamente hacia una incapacidad total. En la mayoría de los pacientes la EM se inicia con un primer brote o evento clínico (Polman CH, 2011). Los procesos fisiopatológicos incluidos en la EM pasan por la inflamación, desmielinización, daño axonal y mecanismos de reparación. Estos procesos no se presentan de manera uniforme en la población que padece EM, lo que contribuye a la heterogeneidad en la expresión fenotípica de la enfermedad así como a su diagnóstico y su respuesta a las distintas terapias (Fernández-Fernández O, 2002; Bielekova B, 2004). El diagnóstico de la EM es fundamentalmente clínico y se basa en la demostración de los síntomas y signos atribuibles a las lesiones en la materia blanca que se encuentran diseminadas en el tiempo y en el espacio. El laboratorio ayuda al diagnóstico de la EM mediante el estudio del líquido cefalorraquídeo (LCR). En algunos casos, el estudio del LCR junto con la RM, permite identificar pacientes que presentan una alta probabilidad de conversión a EM después de un primer brote o Síndrome Neurológicamente Aislado (SNA), sobretodo en aquellos casos con clínica de inicio dudosa. El estudio del LCR para analizar la síntesis intratecal de IgG, mediante la obtención del índice IgG y de las Bandas Oligoclonales IgG (BOCG) se emplea como apoyo al diagnóstico de la EM (Stangel M, 2013).
Las BOCG en LCR se han encontrado en el 87,7% de los pacientes con EM, siendo demostrado en la bibliografía que los pacientes con EM que presentan BOCG negativas son minoritarios (Alvarez-Cermeno JC, 2013). En nuestro hospital este porcentaje es mayor, presentando BOCG en LCR un 96,5% de los pacientes con EM (Menéndez-Valladares P, 2015). En individuos sanos, las cadenas ligeras son producidas en exceso respecto a las cadenas pesadas. Los niveles de cadenas ligeras sin unir, Cadenas Ligeras Libres (CLL), tanto en suero como en LCR son bajos. En condiciones patológicas la producción de CLL está aumentada, lo que ocurre en ciertas enfermedades inflamatorias como la EM (Kaplan B, 2011). Varios estudios han demostrado que los niveles elevados de CLL en LCR mediante cuantificación por nefelometría, apoyan el diagnóstico de EM (Villar LM, 2012; Duranti F, 2013; Hassan-Smith G, 2014; Presslauer S, 2015; Menéndez-Valladares P, 2015). También se ha visto que niveles elevados de CLL en LCR predicen la conversión a EM de pacientes con SNA a EM (Villar LM, 2012; Hassan-Smith G, 2014; Menéndez-Valladares P, 2015). Villar et al. demostraron que niveles elevados de CLL en LCR elevados (CLL > 0,53 mg/L) predicen con buena exactitud la conversión de SNA a EM Clínicamente Definida (EMCD). Puntos de corte más elevados resultaron de los estudios realizados en nuestro hospital, 0,73 mg/L (dato no mostrado, Menéndez-Valladares P, 2015), y del estudio de Hassan-Smith et al., 0,87 mg/L.
La determinación del índice kappa mediante la siguiente ecuación: (CLL en
LCR/ CLL en suero)/(albúmina en LCR/albúmina en suero), considera la rotura de la barrera hematoencefálica, incrementando la precisión del diagnóstico de EM y disminuyendo los falsos positivos (Duranti F, 2013). En estudios recientes se ha visto que niveles elevados de índice kappa (índice kappa > 10,62) predicen la conversión de SNA a EM con una especificidad del 95,7% y una sensibilidad del 93,1%. También se ha determinado que aquellos pacientes con SNA con índice kappa > 10,62 tienen una probabilidad de conversión a EM mayor que los pacientes con un índice appa inferior (HR=7,34; p<0,0001) [HR: Hazard Ratio] (Menéndez-Valladares P, 2015). La EM es una enfermedad que no sólo disminuye la calidad de vida, sino que disminuye la productividad laboral y en fases avanzadas de la enfermedad puede llevar a una jubilación anticipada. A medida que la enfermedad progresa, mayor y más significativo es el coste sanitario para los pacientes, sus familias, los sistemas nacionales de salud y la sociedad en general. La importancia de un diagnóstico temprano de la EM que permita proporcionar tratamientos en fases tempranas, ralentiza la progresión de la enfermedad y, por lo tanto, disminuye los costes y cargas asociadas a los niveles de mayor discapacidad de la EM. El objetivo de esta tesis ha sido evaluar la utilidad clínica del biomarcador kappa en la conversión de pacientes con SNA a EM empleando para ello el índice kappa. En este trabajo se ha evaluado el valor diagnóstico predictivo que presentan los niveles altos de CLL y en LCR, y sus respectivos índices, y se ha elacionado con los parámetros clínicos y paraclínicos empleados actualmente en el diagnóstico de la EM.
2018-02-12T09:17:22Z
2018-02-12T09:17:22Z
2018-01-26
2018-01-26
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Menéndez Valladares, P. (2018). Utilidad de las cadenas ligeras libres en líquido cefalorraquídeo como biomarcador de conversión a esclerosis múltiple clínicamente definida.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/70201
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/317732024-02-14T09:06:59Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2015-12-10T13:55:27Z
urn:hdl:11441/31773
Mecanismos de acción de la melatonina en linfocitos T
Carrillo Vico, Antonio
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Melatonina
La melatonina, se puede considerar actualmente como un compuesto pleitrópico debido a la gran versatilidad funcional que posee, siendo capaz de regular innumerables procesos biológicos. Durante los últimos quince años, nuestro grupo de investigación ha contribuido a poner de manifiesto las propiedades inmunomoduladoras que posee la melatonina, siendo éste en la actualidad un amplio campo de estudio con interesantes aplicaciones terapéuticas. Además de la capacidad inmunomoduladora que tiene la administración de melatonina y la ubicuidad de sus receptores en el sistema inmune, nuestro grupo ha descrito recientemente la síntesis activa de melatonina en cultivos de células monoclueares de sangre periférica humana (Carrillo-Vico y cols. 2004).
Así, el primer objetico de este trabajo de investigación ha sido estudiar una probable síntesis de melatonina, sus posibles efectos biológicos y sus mecanismos de acción en linfocitos T, utilizando para ello la línea de células T Jurkat. La consecución de este cometido se llevó a cabo en base a estos objetivos parciales:
1.- Identificar síntesis activa de melatonina en células T Jurkat.
2.- Analizar los efectos y los mecanismos de acción de la melatonina.
Las funciones fisiológicas de la melatonina y su potencial terapéutico dependen críticamente del conocimiento de sus sitios y mecanismos de acción. La vía de señalización de la melatonina a través de sus receptores de membrana, promueve una respuesta intracelular que involucra al AMPc. Por otro lado, aunque se han mostrado mecanismos de acción nucleares para la melatonina, existe muy poca información acerca de sus dianas génicas, y mucho menos aún respecto a las posibles interacciones entre la cascada de transducción de señales disparada por los receptores de membrana y los receptores nucleares, a pesar de la coexistencia de los dos tipos de receptores en la mayoría de las células inmunocompetentes estudiadas. Por estos motivos, quisimos explorar la conexión entre las vías de señalización de membrana y nucleares para la melatonina. Para ello, nos planteamos los siguientes objetivos específicos:
3.- Estudiar el efecto de la señalización del receptor de membrana sobre la expresión del receptor nuclear RORα.
4.- Demostrar la implicación del AMPc en la regulación transcripcional del RORα.
El efecto de la melatonina a través de la unión al RORα todavía sigue siendo una incógnita. La realización de la melatonina y los receptores nucleares fue señalada por primera vez por Becker-André, quien posteriormente se retractó al no poder reproducir los resultados. Sin embargo, muchos autores apoyan el papel de este factor de transcripción como potencial mediador de la señalización nuclear de melatonina. Teniendo en cuenta la naturaleza lipofílica de la indolamina, capaz de atravesar cualquier membrana biológica, y los numerosos efectos en la regulación transcripcional, abordamos el estudio e una posible interacción entre melatonina y el ROR α. Para ello, nos propusimos los siguientes objetivos puntuales:
5.- Analizar la localización celular del receptor RORα en células Jurkat.
6.- Investigar el efecto de la melatonina en la localización del RORα.
7.- Estudiar si la melatonina actúa como ligando del RORα.
2015-12-10T13:55:27Z
2015-12-10T13:55:27Z
2008-06-27
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Judith Lardone, P. (2008). Mecanismos de acción de la melatonina en linfocitos T. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31773
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31773
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2018-04-05T18:23:27Z
urn:hdl:11441/72042
Bases genéticas de la enfermedad de Behçet. Estudio multicéntrico en población española
Montes Cano, Marco Antonio
González Escribano, María Francisca
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Inmunología
Genética
Biología molecular
La enfermedad de Behçet (BD) es una vasculitis sistémica de curso crónico y recidivante cuyos síntomas principales son las aftas orales, ulceras genitales y lesiones oculares. Es una enfermedad de base inmunológica clasificada como de patrón mixto porque en su origen se encuentran implicados elementos tanto del sistema inmune innato (enfermedad autoinflamatoria) como adaptativo (enfermedad autoinmune). Se trata de una enfermedad compleja que se desencadena en individuos genéticamente susceptibles mediante el concurso de determinados factores medioambientales. Dentro de los factores genéticos que influyen en la predisposición a desarrollar esta enfermedad, el más conocido y fuertemente asociado en diferentes poblaciones es una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano (HLA) de clase I, concretamente HLA-B51. Por esta razón, la región HLA ha sido ampliamente analizada mediante estudios caso-control aunque no está claro si otras moléculas de clase I pudieran tener asociación independiente con la enfermedad. Pero además, la región HLA explica sólo el 20-30% de la carga genética de la enfermedad por lo que la búsqueda de genes implicados en la predisposición y evolución de esta patología es objeto de investigación. El abordaje de este tipo de estudios se puede hacer con o sin hipótesis a priori; en cualquier caso, el desarrollo de la tecnología ha permitido el avance en sistemas de genotipado masivo y la identificación de nuevas variantes genéticas implicadas en diversas patologías. Si bien, los estudios de replicación son imprescindibles para validar las asociaciones en diferentes poblaciones. El objetivo general de nuestro trabajo ha sido profundizar en el conocimiento de las bases genéticas de la enfermedad de Behçet y los objetivos específicos que nos hemos planteado son: 1) determinar el papel de diferentes moléculas HLA de clase I en la predisposición a padecer la enfermedad y 2) establecer si determinados genes situados fuera de la región HLA, previamente relacionados con la enfermedad, se asocian con esta patología en nuestra población. En cuanto al diseño experimental se trata de un estudio multicéntrico de casos y controles en el que se incluyeron 315 pacientes diagnosticados de BD según los criterios del Grupo Internacional de la enfermedad de Behçet de 1990 y 377 controles sanos. El tipaje de los loci HLA-A*, B* y C* se realizó utilizando técnicas de ¿polimerase chain reaction¿ (PCR) y ¿specific sequence oligonucleotide probe¿ (SSOP) y el genotipado del resto de los genes mediante el estudio de ¿single nucleotide polymorphism¿ (SNP) con PCR a tiempo real y sondas TaqMan®. En cuanto a los resultados, además de B*51, diferentes grupos alélicos HLA-B se encontraron relacionados con la enfermedad: B*57 como factor de riesgo y B*35 como factor de protección. La región HLA-A muestra asociación independiente con la predisposición a padecer la enfermedad. En este sentido, el grupo alélico HLA-A*03 se comportaría como factor de protección en nuestra población. Finalmente, la región HLA-C no se encuentra asociada independientemente con la enfermedad ya que la asociación detectada es consecuencia del desequilibrio de ligamiento entre esta región y la región HLA-B. Con respecto a los genes no-HLA incluidos en el estudio, IL23R, IL10 y ERAP1 se encuentran asociados con la enfermedad en nuestra población, mientras que descartamos que otros genes, concretamente: CPVL, TRD3, UBASH3B, TRD7 y LOC100129342 jueguen un papel importante en la predisposición a padecer esta enfermedad.
Diferentes genes que codifican moléculas relacionadas con la inmunidad adaptativa, así como con la inmunidad innata, pueden contribuir a la predisposición a padecer la enfermedad de Behçet. El estudio de los genes involucrados en el desarrollo de esta patología puede contribuir a mejorar el conocimiento de la etiopatogénesis de la enfermedad y por tanto, ayudar al diagnóstico de la misma, así como a la predicción del curso clínico de la enfermedad y al desarrollo de nuevas dianas terapéuticas.
2018-04-05T18:23:27Z
2018-04-05T18:23:27Z
2014-12-11
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Conde Jaldón, M. (2014). Bases genéticas de la enfermedad de Behçet. Estudio multicéntrico en población española. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/72042
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-17T07:06:06Z
urn:hdl:11441/72972
Caracterización y farmacología del sistema receptor-efector para el péptido intestinal vasoactivo (VIP) en macrófagos peritoneales de ratón
Calvo Gutiérrez, Juan Ramón
Osuna Fernández, María del Carmen
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2018-04-17T07:06:06Z
2018-04-17T07:06:06Z
2000
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Montilla de la Torre, Manuel (2000). Caracterización y farmacología del sistema receptor-efector para el péptido intestinal vasoactivo (VIP) en macrófagos peritoneales de ratón (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/72972
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2014-11-27T11:58:35Z
urn:hdl:11441/15618
Bases moleculares de la inflamación : regulación de la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible, la ciclooxigenasa-2 y de la activación del factor nuclear de células T activadas en células fagocíticas
Sobrino Beneyto, Francisco
Monteseirín Mateo, Francisco Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Universidad de Sevilla. Departamento de Medicina
Inflamacion (Patología)
Sistema inmunitario
2014-11-27T11:58:35Z
2014-11-27T11:58:35Z
2005
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Vega Rioja, A. (2005). Bases moleculares de la inflamación : regulación de la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible, la ciclooxigenasa-2 y de la activación del factor nuclear de células T activadas en células fagocíticas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/15618
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/15618
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2018-06-27T13:31:40Z
urn:hdl:11441/76508
Papel de la melatonina en los procesos inflamatorios mediados por mastocitos: Implicaciones clínica
Maldonado y Aibar, María Dolores
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Los mastocitos son una población de células heterogéneas, localizadas en los
tejidos conectivos del organismo, que desarrollan respuestas alérgicas y
antiparasitarias mediadas por la IgE y otros receptores. Estas células generan
reacciones urgentes donde la inflamación es, en sí, un mecanismo protector frente a
la amenaza detectada, cuyo objetivo es restaurar la homeostasis en el tejido dañado
eliminando o aislando el agente causante que la puso en marcha. Para ello, y tras
apenas unos treinta minutos desde que se detectó el estímulo comienza su etapa
aguda, durante la cual los mastocitos vierten al tejido las moléculas preformadas y
almacenadas en sus gránulos, produciéndose en consecuencia cambios morfológicos
y fisiológicos característicos de los procesos inflamatorios. Todo ello, se traduce en
la aparición de sus signos característicos calor, rubor, dolor y tumor. Posteriormente,
y si sigue actuando el instigador, se desarrolla la fase tardía (dos horas tras el
estímulo) donde se sintetizan y liberan leucotrienos y prostaglandinas, así como
citoquinas entre las que se encuentran: IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, TNF-α, IL-8, IL-10,
IL-13. Dicho mecanismo es de gran importancia para el organismo, y es por ello que
los tejidos, para asegurar su activación, establecen estrategias redundantes. Sin
embargo, cuando la amenaza es eliminada resolver los diferentes frentes establecidos
que activaron la inflamación puede convertirse en una empresa complicada. Es por
ello, que la investigación en este campo se enfoca, al menos en parte, en la búsqueda
o desarrollo de fármacos que permitan su resolución con éxito evitando su
cronificación.
Siguiendo esta línea, uno de los fármacos estudiados es la melatonina, la cual es
una indolamina que presenta gran variedad de propiedades. Así, cabe destacar que
durante el proceso inflamatorio desarrolla un papel dual por el cual funciona como
una citoquina pro-inflamatoria más, y posteriormente, cuando ya no es necesario
ayuda a la restitución de la homeostasis gracias a sus muchas capacidades como son
la antioxidante, citoprotectora, inmunomoduladora y anti-inflamatoria.
Concretamente, a través de ellas consigue reducir los radicales libres procedentes del
metabolismo del oxígeno y del nitrógeno, mejorar la viabilidad celular, estimular o
reducir la respuesta inmune e inhibir la activación del factor NF-κβ.
OBJETIVOS:
En nuestro estudio se establecieron dos objetivos principales: analizar el efecto
del tratamiento exógeno de la melatonina, una molécula inmunomoduladora, sobre la
línea de mastocitos RBL-2H3, modelo de inflamación in vitro, e identificar los
mecanismos celulares y moleculares que subyacen a estos efectos y, también,
trasladar nuestros descubrimientos básicos a la clínica.
11
HÍPOTESIS:
En función de nuestros objetivos establecimos las hipótesis en las que
trabajamos. A través de ellas, queríamos conocer si la administración exógena de la
melatonina:
- Mejora la viabilidad celular y la regeneración del mastocito tras el estímulo
químico.
- Si inhibe la activación del mastocito reduciendo la síntesis y liberación de
citoquinas pro-inflamatorias (TNF-α e IL-6).
- Si interviene en la síntesis y liberación de la melatonina endógena por parte
del mastocito.
MATERIAL Y MÉTODOS:
Se usaron cultivos de mastocitos RBL-2H3 que crecieron en medio con suero
fetal bovino descomplementado, CO2 al 5% y 37ºC, los cuales fueron sometidos a
diferentes tiempos de estimulación química mediante forbol-12-miristato-13-acetato
más calcio ionóforo (PMACI) para conocer su inducción de citotoxicidad o su efecto
sobre la liberación de las citoquinas pro-inflamatorias. Posteriormente, se realizaron
pre-tratamientos con melatonina (durante 30 minutos) a concentraciones fisiológicas
y farmacológicas para estudiar su capacidad citoprotectora y su efecto sobre la
liberación de citoquinas y los niveles de melatonina endógena. Por otro lado, se
estudió el efecto del antagonista selectivo luzindol sobre sus capacidades
citoprotectoras. A su vez, estudiamos el efecto de la melatonina sobre la liberación
de las citoquinas pro-inflamatorias y la propia melatonina endógena y sobre los
mecanismos intracelulares responsables de la citoprotección.
Para ello, se usó el ensayo MTT para estudiar la viabilidad celular, así como la
técnica de enzimoinmunoanálisis (ELISA) para la medición de citoquinas en el
sobrenadante del medio de cultivo. Para el estudio de la expresión proteica de la
miosina IIa e IKKα/β se usó la técnica de western blotting, un sistema de
transferencia semiseca y un sistema de detección de proteínas mediante
quimioluminiscencia.
RESULTADOS:
El ensayo de MTT nos permitió determinar que la citotoxicidad generada sobre
los cultivos mastocitarios con el estímulo químico (PMACI) era tanto dosis como
tiempo dependiente. Así, y de manera estadísticamente significativa, a mayor tiempo
de exposición al PMACI, mayores eran los daños celulares detectados; los cuales
fueron extremos ante periodos iguales o mayores a 14 horas. Detectamos, también,
que dicha estimulación con PMACI produce un aumento en la liberación de las
citoquinas pro-inflamatorias TNF-α e IL-6, así como de la melatonina endógena, los
cuales disminuyeron si fueron precedidos del pre-tratamiento con melatonina.
Se observó que el pretratamiento con melatonina (30 minutos) mejoró la
12
viabilidad celular de modo estadísticamente significativo, siendo mayor su capacidad
a concentraciones farmacológicas; mientras que las concentraciones fisiológicas
muestran esta capacidad citoprotectora tras 12 horas de experimentación. Aunque
cabe destacar que en presencia del antagonista selectivo para los receptores MT1 y
MT2 llamado luzindol, su capacidad citoprotectora disminuye, aunque no del todo.
Por último, se detectó que el pretratamiento con melatonina disminuye la
activación del complejo IKKα/β lo que le permite desarrollar su papel
anti-inflamatorio.
CONCLUSIONES:
La estimulación química mediante PMACI activa a los mastocitos de manera
tiempo y dosis dependiente.
El pretratamiento con melatonina, sobre todo a concentraciones farmacológicas,
ejerce protección celular cuando los mastocitos fueron estimulados con PMACI.
La estimulación química mediante PMACI introduce al mastocito en un estado
de hiperestimulación con un aumento de los niveles de TNF-α, IL-6 y de melatonina
endógena; cuando se realizó el pretratamiento con melatonina disminuyó la síntesis y
liberación de las mismas. Esta capacidad se revierte en presencia de luzindol.
La melatonina exógena en ausencia de estimulación química no afecta los
niveles de TNF-α, IL-6 o de melatonina endógena (MELn).
El pretratamiento con melatonina, tanto a concentraciones fisiológicas como
farmacológicas, en mastocitos estimulados, inhibe la activación de la ruta de
activación mastocitaria IKK/NF-κβ de forma estadísticamente significativa.
2018-06-27T13:31:40Z
2018-06-27T13:31:40Z
2018-06-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
García Moreno, H. (2018). Papel de la melatonina en los procesos inflamatorios mediados por mastocitos: Implicaciones clínica. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/76508
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/639632024-02-14T08:47:19Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2017-08-22T09:54:38Z
urn:hdl:11441/63963
Relevancia de la respuesta inmunitaria mediada por anticuerpos en el rechazo y supervivencia de los trasplantes renales
Núñez Roldán, Antonio
González Escribano, María Francisca
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Anticuerpos
Trasplante de órganos
Tesis descargada desde Teseo
El trabajo de esta Tesis Doctoral se ha centrado en el estudio de la relevancia clínica en el trasplante renal de los anticuerpos anti-HLA detectados mediante el ensayo en fase sólida Luminex. Concretamente, analizamos la importancia de tener una prueba cruzada "virtual" positiva en pacientes trasplantados con una prueba cruzada por citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) negativa, es decir, estudiamos si son relevante los anticuerpos donante específicos (DSA) detectables por debajo del umbral de la CDC.
Los dos objetivos que nos planteamos fueron:
1. Investigar la relevancia clínica de los anticuerpos anti-HLA preexistentes (donante específicos o no) detectados mediante el ensayo en fase sólida Luminex en la supervivencia del injerto, en pacientes trasplantados con donante cadáver y prueba cruzada por citotoxicidad dependiente de complemento negativa. Los resultados correspondiente a este objetivo fueron publicados en la revista Nephrol Dial Transplant 2012; 27:1231-1238 bajo el título "Clinical relevance of HLA donor-specific antibodies detected by single-antigen assay in kidney transplantation".
2. Investigar el papel de los anticuerpos anti-HLA preformados y de novo detectados por Luminex en el desarrollo de episodios de rechazo, tanto mediado por anticuerpos (AMR) como mediado por células T (TCMR). Los resultados correspondientes a este objetivo fueron publicados en la revista Transplantation 2012; 94: 338-344 con el título "Clinical relevance of anti-HLA donor specific antibodies detected by luminex assay in the development of rejection after renal transplantation".
Las conclusiones de la Tesis doctoral fueron:
1. La presencia en el suero del receptor de un trasplante renal, de anticuerpos contra antígenos HLA del donante (DSA) detectados por luminex, aún en el caso de una prueba cruzada clásica de citotoxicidad (CDC) negativa, perjudica gravemente la evolución del injerto. Por tanto, una prueba cruzada virtual positiva, debería contraindicar la realización del trasplante.
2. La posible desventaja en la accesibilidad al trasplante de los pacientes con anticuerpos sólo detectables por luminex, debe neutralizarse mediante la modificación de los sistemas de puntuación, priorizándolos en aquellas donaciones en las que la prueba cruzada virtual sea negativa.
3. Los anticuerpos dirigidos frente a las moléculas HLA de clase I y de clase II específicos de donante, se asocian ambos a la mala evolución del injerto. Sin embargo, la presencia de anticuerpos contra los antígenos de clase I tiene peor pronóstico en la supervivencia del injerto que la de los anticuerpos de clase II.
4. En los casos en los que la prueba cruzada de luminex sea positiva y la CDC negativa, la evolución del injerto no se asocia con el nivel de intensidad media de fluorescencia (MFI).
5. Los pacientes con anticuerpos dirigidos frente a las moléculas HLA bien preformados o bien desarrollados de novo después del trasplante, tienen mayor probabilidad de pérdida temprana del injerto porque presentan mayor riesgo de sufrir episodios de rechazo, tanto humoral com celular.
2017-08-22T09:54:38Z
2017-08-22T09:54:38Z
2012-11-09
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Caro Oleas, José Luis, (2012). Relevancia de la respuesta inmunitaria mediada por anticuerpos en el rechazo y supervivencia de los trasplantes renales. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/63963
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-04-16T09:18:49Z
urn:hdl:11441/23877
Estrés oxidativo en leucocitos implicación de la nadph-oxidasa, de la calcineurina y de los factores de transcripción NF-kB y STAT 3
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Leucocitos
Sistema inmunitario
El objetivo general de esta Tesis ha sido estudiar el efecto del estrés oxidativo sobre diferentes sistemas de transducción de señales en células leucocíticas. Los objetivos específicos son los siguientes: ... ly: 'Times New Roman','serif'; font-size: 12pt">1. En la primera parte de la misma, se analiza el efecto de un nuevo complejo, derivado del rutenio, sobre la activación del estallido respiratorio (producción de O2- y H2O2) en neutrófilos humanos. Esta actividad podría estar asociada con la capacidad citotóxica de algunos derivados de rutenio y con la infiltración de las células fagocíticas en los nódulos tumorales. 2. En segundo lugar, se ha analizado la caracterización de la actividad calcineurina (CN) en neutrófilos humanos:(i) Análisis de la presencia de la fosfatasa CN usando como sustrato un fosfopéptido sintético, correspondiente al sitio de fosforilación de la subunidad RII de la proteína quinasa dependiente de AMP cíclico.(ii) Estudio de la inhibición de esta actividad CN en neutrófilos tratados con drogas inmunosupresoras (ej. CsA y FK 506).(iii) Efecto de oxidantes sobre la actividad CN. Se han estudiado las alteraciones que podría producirse sobre la unión al ADN de factores de transcripción, tales como NF-AT y NF-kB.La conexión entre ambas señales, es decir, entre CN y radicales libres de oxígeno, es desconocida. En este trabajo nos centramos en esta cuestión y en las implicaciones de os radicales libres de oxígeno como mensajeros universales para activar al NF-kB.3. En la tercera parte, el objetivo ha sido el estudio de agentes oxidantes sobre la vía JAK-STAT. Se analiza el efecto del H2O2 y otras especies reactivas de oxígeno (reacción de Fenton) sobre uno de los miembros de esta familia, concretamente el STAT3.|
2015-04-16T09:18:49Z
2015-04-16T09:18:49Z
1998
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Carballo Álvarez, M.J. (1998). Estrés oxidativo en leucocitos implicación de la nadph-oxidasa, de la calcineurina y de los factores de transcripción NF-kB y STAT 3. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/23877
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/23877
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2018-07-25T07:43:20Z
urn:hdl:11441/77580
Cálculo de un índice de riesgo de padecer diabetes gestacional para su uso como cribado universal.
Fernández Riejos, Patricia
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Título:Cálculo de un índice de riesgo de padecer diabetes gestacional para su uso como cribado universal.
Introducción: El diagnóstico de la diabetes mellitus gestacional sigue careciendo de una estrategia consensuda y definitiva. Se trata de un problema dinámico en el que la solución debe depender de las características de la población a la que se esté atendiendo y de los recursos de los que se disponga. Por eso siguen surgiendo nuevas ideas para construir nuevos algoritmos diagnósticos mejor adaptados a las características de la población. En muchos casos se incluyen marcadores que complementan la sobrecarga oral de glucosa, como método más
extendido y eficaz, generalmente no para sustituirla completamente, sino para complementarla y constituir estrategias diagnósticas, más complejas, pero más eficaces. Aunque la validez como pruebas diagnósticas de la sobrecaraga oral de glucosa para la confirmación de la diabetes gestacional es difícilmente superable, también presenta debilidades. La reproducibilidad de la sobrecarga de glucosa es baja, sobre todo si se compara con otros biomarcadores relacionados como la hemoglobina glicada. Además, su utilización de manera generaliza supone un gasto importante de recursos.
Aunque el inconveniente más grave es el causado a las propias gestantes, que deben, no sólo perder una parte de su jornada laboral para realizarse el test, sino sufrir la incomodidad de la prueba que, en no pocas ocasiones, están asociadas con malestar o náuseas. En el caso del test de O’Sullivan que se utiliza como cribado universal en nuestro entorno, a estos
inconvenientes se podría sumar el de una sensibilidad limitada.
Objetivos: Primero estudiar varios parámetros de laboratorio (hemoglobina glicada, glucemia basal, perfil lipídico y perfil tiroideo) para su posible utilización como marcadores de diabetes gestacional. Y segundo, utilizar los parámetros con una mayor relación con la diabetes gestacional para determinar un índice de riesgo, que pueda ser utilizado a modo de cribado en el segundo trimestre que pueda reducir el número de test de O’Sullivan realizados. Material y métodos: Como estudios previos se realizaron tres estudios retrospectivos con los datos de las gestantes atendidas en el Hospital Virgen Macarena en los últimos años para establecer la relación que, en nuestra población, mantienen la glucemia basal, el perfil lipídico y el perfil tiroideo con la diabetes gestacional, así como su capacidad diagnóstica. También se realizó un estudio prospectivo para evaluar la hemoglobina glicada como marcador de diabetes gestacional. El estudio principal fue un estudio prospectivo en el que se seleccionaron 507 gestantes que acudieron a nuestro centro a realizarse el test de O’Sullivan entre la 24ª y 28ª semanas de gestación, y a las que se determinó hemoglobina glicada, glucemia basal, perfil lipídico ( colestero y triglicéridos) y perfil tiroideo (tirotropina y tiroxina
libre). La población se dividió en dos grupos, diabéticas (27) y no diabéticas (480), se utilizó una regresión logística multivariante para obtener los parámetros de varios modelos de predicción de diabetes gestacional. A partir de la probabilidad de padecer diabetes gestacional que devuelve el modelo se obtuvo el índice de riesgo de diabetes gestacional. Se determinó la curva ROC y se establecieron puntos de corte que optimizaran sensibilidad y especificidad. Resultados: De acuerdo con los estudios previos, los parámetros con mejor rendimiento diagnóstico fueron hemoglobina glicada, glucemia basal y triglicéridos, que se utilizaron para determinar un índice de riesgo de diabetes gestacional (IRDMG). Trazamos la curva ROC y se calculó AUC = 0,912 (0,847-0,978). A partir de la curva ROC hemos propuesto dos valores de IRDMG: ≥8,5 y ≥20,3 que con sensibilidades respectivas de 100% y 95,8%, servirían para descartar la diabetes
gestacional. De esta manera habría entre un 25% y un 56% de gestantes que evitarían el test de O’Sullivan, según el punto de corte elegido, con valores predictivos negativos de 100% y 99,65% (sin falsos negativos para el primer punto de corte y 1 falso negativo, el 3,7% de las diabéticas, en el segundo punto de corte). A su vez, proponemos dos puntos de corte altos, IRDMG ≤112 y ≤710, con especificidades respectivas de 95,2% y 99,4%, de manera que las gestantes por encima de este punto de corte deberían ser
consideradas de alto riesgo y serían sometidas, sin necesidad de test de O’Sullivan, a la sobrecarga oral confirmatoria de 100 g. En estas condiciones clasificaríamos 7,4% de gestantes en el primer punto de corte y 1,2% en el segundo. Las gestantes con valores de IRDMG en la zona gris situada entre los valores bajo y alto del índice seleccionados, seguirían la estrategia habitual de test de O’Sullivan seguido de sobrecarga oral en el caso de que éste iguale o supere los 140 mg/dl. Conclusiones: Mediante el empleo como cribado previo al test de O’Sullivan de un índice de riesgo basado en glucemia basal, hemoglobina glicada y triglicéridos se pueden detectar gestantes en bajo riesgo de padecer diabetes gestacional, evitando
realizar un 25% de test de O’Sullivan, con una sensibilidad del 100%, o hasta un 56%, con una sensibilidad del 95,8%.
2018-07-25T07:43:20Z
2018-07-25T07:43:20Z
2018-07-18
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Maesa Márquez, J.M. (2018). Cálculo de un índice de riesgo de padecer diabetes gestacional para su uso como cribado universal.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/77580
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-05-10T10:29:40Z
urn:hdl:11441/74423
Regulación del metabolismo del glucógeno por ácidos grasos y cuerpos cetónicos en hígado y tejido adiposo
Goberna Ortiz, Raimundo
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
OBJETIVOS:
En la técnica general del Ciclo Glucosa ácidos grasos (RANDLE, 1963), se establece una relación inversa entre ambos metabolitos, de tal manera que niveles altos de ácidos grasos (o cuerpos cetónicos) en plasma conlleva a una menor utilización de la glucosa en los tejidos periféricos. También se ha demostrado que una infusión intragástrica de ácidos grasos desencadena una menor degradación de glucógeno hepático en animales sometidos a ejercicio (HOLLOSZY y cols., 1976).
Estos datos configuran una situación por la cual se puede hipotetizar una cierta conexión entre ácidos grasos y metabolismo del glucógeno. En base a esto, nuestros objetivos son:
1. Describir el mecanismo molecular en hígado de la interacción de los ácidos grasos con algunos enzimas del metabolismo del glucógeno, tales como la fosforilasa y la sintasa.
2. Intentar explicar en base a las actividades de estos enzimas y los niveles de ciertos metabolitos, como el cAMP y el ATP, la hipotética conexión establecida anteriormente.
3. En la investigación del mecanismo molecular de la inhibición glucogenolítica se estudiará el efecto de hormonas cuyo modo de acción se caracteriza por su dependencia (glucagón) o independencia (adrenalina y vasopresina) del cAMP.
4. La metabolización hepática de los ácidos grasos produce cuerpos cetónicos. Se pretende estudiar el efecto de estas moléculas sobre la glucogenolisis y glucogénesis hepática.
5. el tejido adiposo es el principal productor de ácidos grasos plasmáticos. Se tratará de analizar el efecto que los ácidos grasos ejercen sobre los enzimas del glucógeno en tejido adiposo, tomando a éste como ejemplo de tejido extrahepático susceptible a la regulación hormonal del transporte de glucosa.
CONCLUSIONES:
1. La suspensión de hepatocitos aislados, obtenidos mediante la técnica de colagenasa, utilizados para la realización de este trabajo presentaba una viabilidad del 80-90% por el método de exclusión de azul trypan. El funcionalismo celular se verificó por diferentes métodos: a) incorporación de U-14C glucosa al glucógeno (307,5 μmoles glucosa incorporados/g proteína x 40 min), b) por la disminución de fosforilasa a y concomitante aumento de sintasa en presencia de glucosa; y c) por la activación de la fosforilasa a ante diferentes hormonas (glucagón, adrenalina y vasopresina).
2. Como índice glucolítico se ha tomado el valor de la actividad de la fosforilasa a. El ácido palmítico 82,5 mM) provoca tanto una disminución en la actividad máxima glucolítica, como una disminución en la sensibilidad de los hepatocitos para el glucagón. La disminución en la actividad máxima era variable de unos experimentos a otros, y oscilaba entre 1,5-2 veces la actividad observada en hepatocitos controles. Los cambios más significativos ocurrían con respecto a la sensibilidad (Ka para glucagón en ratas controles 10-10 M; Ka en presencia de ácido palm´tico 3-5.10-10 M).
3. La glucogenolisis estimulada por adrenalina o vasopresina también se encuentra disminuida por la presencia de ácidos grasos. Este efecto se ejerce fundamentalmente a nivel de la activación máxima con una disminución de aproximadamente dos veces. En nuestras condiciones experimentales no hemos encontrado variaciones significativas en los valores de Ka para las hormonas.
4. Se concluye de los puntos anteriores 2 y 3 que el efecto delácido palmítico se observa tanto si el mecanismo glucogenolítico requiere o no la presencia de cAMP.
5. El estado de alimentación del animal no afecta a la acción del ácido palmítico sobre la glucogenolisis. El grado de oxigenación posee una relativa importancia, ya que el efecto inhibidor del ácido palmítico es menor.
6. No existen variaciones significativas en los niveles de ATP en presencia de ácido palmítico (0,444 ± 0,14 μmoles/g células con 10-9 M-glucagón, frente a 0,400 ± 0,29 μmoles/g células en presencia de glucagón y 2,5 mM de ácido palmítico.
7. El ácido palmítico no modifica los niveles de cAMP obtenidos en presencia de glucagón y adrenalina.
8. Con el objetivo de estudiar si algún producto del metabolismo de los ácidos grasos son los responsables del efecto observado sobre la glucogenolisis, analizamos la cetogénesis dependiente de hormonas y el efecto de los cuerpos cetónicos sobre la glucogenolisis. La producción de cuerpos cetónicos es dependiente de la concentración de glucagón (actividad máxima: 10-10M), adrenalina (A max: 3.10-5M) y vasopresina (A max: 10-4U/l). Los ácidos grasos estimulan la cetogénesis de 4 a 5 veces respecto a los valores controles. En confirmación con resultados de otros autores, la adrenalina en ratas en ayuno (24 h) no estimula la cetogénesis.
9. Los cuerpos cetónicos (β-hidroxybutirato y acetoacetato) a concentraciones de 2, 4 y 8 mM estimulan la activación fosforilasa a. El máximo valor se alcanza a los 15 min de incubación con acetoacetato 8 mM. Sin embargo el β-hidroxybutirato y el acetoacetato a las concentraciones anteriormente citadas no modifican la actividad glucogenolítica del glucagón.
10. La incorporación de U-14C glucosa a glucógeno, en hepatocitos, no se modifica por la presencia de ácido palmítico (2,5 mM). La máxima incorporación (307 μmoles de glucosa/g células) se obtiene a los 40 min de incubación con 50 mM-glucosa.
11. La adición de acetoacetato (8 mM), a hepatocitos de ratas alimentadas, incubados durante 40 min en medio Na+ con 30 mM glucosa, disminuye significativamente la síntesis de glucógeno (aproximadamente a la mitad). Con β-hidroxibutirato a igual concentración no se modifica. Sin embargo en un medio rico en K+ a las concentraciones estudiadas de 2, 4 y 8 mM de acetotato y β-hidroxibutirato no se observan variaciones significativas.
12. En el tejido adiposo, a diferencia de lo acontecido en hígado, existe una disminución de la síntesis de glucógeno en presencia de ácido palmítico (1, 5 mM y 2,5 mM) a 5mM glucosa.
13. A partir de los resultados presentados, es posible interpretar en términos enzimáticos la disminución que la presencia de ácidos grasos ejerce en el consumo de glucógeno observada por Hollozszy y cols., (19769. Sin embargo, no disponemos de una teoría que pueda explicar el mecanismo molecular de tal inhibición.
2018-05-10T10:29:40Z
2018-05-10T10:29:40Z
1986-01-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Domínguez Gutiérrez de Ceballos, R.M. (1986). Regulación del metabolismo del glucógeno por ácidos grasos y cuerpos cetónicos en hígado y tejido adiposo. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/74423
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Estados Unidos de América
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2017-05-25T07:28:22Z
urn:hdl:11441/60463
Relevancia clínica de los anticuerpos en el trasplante renal
Núñez Roldán, Antonio
González Escribano, María Francisca
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2017-05-25T07:28:22Z
2017-05-25T07:28:22Z
2017-04-20
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Torrecillas Nicolás, M.F. (2017). Relevancia clínica de los anticuerpos en el trasplante renal. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/60463
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1166262024-02-13T09:20:55Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2021-08-05T11:17:56Z
urn:hdl:11441/116626
Implicación del laboratorio clínico en la detección precoz de dislipemias genéticas en atención primaria
Arrobas Velilla, Teresa
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La presencia de dislipemias de origen genético conllevan asociadas patologías como enfermedad cardiovascular prematura y pancreatitis aguda de repetición. La ausencia de cribados poblacionales de las mismas y el desconocimiento por parte de los clínicos fomenta el infradiagnóstico y el infratratamiento de los pacientes que las padecen. Por ello se ha realizado un cribado poblacional de hipercolesterolemia familiar (FH), disbetalipoproteinemia familiar e hiperquilomicronemia familiar desde el laboratorio clínico del Hospital Virgen Macarena de Sevilla a través de las analíticas de rutina solicitadas por los clínicos, estableciéndose alertas analíticas en aquellos pacientes con sospecha de dislipemia y ofreciendo tanto al clínico como al paciente, la posibilidad de realizar teleconsultas para establecer un correcto diagnóstico como una derivación prioritaria con los clínicos especialistas. Este estudio ha permitido establecer una dinámica de trabajo que fomenta la captación de este tipo de pacientes desde el laboratorio clínico, a los cuales se les ha individualizado un correcto tratamiento y un posible diagnóstico genético para su confirmación, disminuyendo de ese modo el riesgo de presentar eventos cardiovasculares precoces y de pancreatitis aguda. Realizándose además estudios de segregación familiar para establecer un correcto diagnóstico en aquellos familiares con casos índice con diagnóstico genético para la patología de estudio. También se han evaluado los parámetros analíticos de riesgo vascular característicos de los pacientes con sospecha de hipercolesterolemia familiar y disbetalipoproteinemia, así como los cocientes o algoritmos diagnósticos más óptimos descritos para la captación de pacientes con sospecha de disbetalipoproteinemia e hiperquilomicronemia familiar.
2021-08-05T11:17:56Z
2021-08-05T11:17:56Z
2021
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Gallardo Alguacil, B. (2021). Implicación del laboratorio clínico en la detección precoz de dislipemias genéticas en atención primaria. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/116626
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1289322024-02-17T16:48:58Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2022-01-18T07:03:30Z
urn:hdl:11441/128932
Función de SUMO en el control de la neurogénesis
García Domínguez, Mario
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La neurogénesis es un proceso esencial que implica un gran número de eventos celulares en los que intervienen numerosos factores de transcripción sometidos a una estricta regulación. La modificación post-traduccional por unión covalente del polipéptido SUMO a otras proteínas es esencial en vertebrados y regula multitud de procesos celulares, pero su implicación en diferenciación neuronal no ha sido estudiada en profundidad. En este sentido, el principal objetivo de esta tesis ha sido la identificación de factores de transcripción relevantes cuya actividad durante el proceso de neurogénesis esté modulada por sumoilación. Para ello se llevaron a cabo estudios funcionales de proteínas diferencialmente sumoiladas en condiciones de proliferación y de diferenciación neuronal, entre las que se encontró Utf1, identificándose como una nueva diana de SUMO. Experimentos de ganancia de función demostraron diferencias marcadas entre los efectos sobre la neurogénesis de las versiones silvestre y mutantes de sumoilación de una selección de proteínas. Mientras que la sumoilación de Prox1, Sall4a, Trim24, Utf1 y Etv6 se asoció con un efecto positivo sobre la neurogénesis, la sumoilación de Kctd15 se asoció con un efecto negativo. Hemos determinado dos mecanismos por los que SUMO regula la función previamente descrita de Utf1 de controlar la expresión de genes bivalentes. Por un lado la sumoilación modula su afinidad por la cromatina y por otro lado facilita su unión a la enzima Dcp1 (“mRNA-decapping enzyme”) a través de una secuencia SIM (“SUMO interacting motif”) de interacción no covalente con SUMO conservada en proteínas Dcp1 de distintos organismos. La proteína etv6, se ha descrito previamente que se modifica por SUMO en su extremo amino-terminal, existiendo una isoforma alternativa truncada que carece de este sitio de sumoilación. Mediante el sistema CRISPR/Cas9 hemos generado: a) líneas celulares carentes de la isoforma larga de Etv6, que fenotípicamente presentan un cierto grado de diferenciación neuroectodérmica en condiciones normales de crecimiento (sin inducir diferenciación) y b) líneas celulares carentes de ambas isoformas, que fenotípicamente muestran ciertos aspectos de diferenciación mesodérmica/endodérmica. En conjunto, nuestros resultados indican que la sumoilación de determinadas proteínas clave es determinante para el progreso adecuado del proceso de neurogénesis.
2022-01-18T07:03:30Z
2022-01-18T07:03:30Z
2021-09-15
2024-09-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Correa Vázquez, J.F. (2021). Función de SUMO en el control de la neurogénesis. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/128932
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/695602024-02-17T16:31:03Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2018-01-25T12:20:05Z
urn:hdl:11441/69560
Acción del péptido intestinal vasoactivo a través de su receptor sobre la actividad adenilciclasa y proteinquinasa en células mononucleares sanguíneas humanas
Goberna Ortiz, Raimundo
Prieto Villapún, Juan Carlos
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Ciencias Médicas
Medicina Interna
Ubicación activa y receptores
Farmacodinámica
Endocrinología
El péptido intestinal vasoactivo (VIP) está considerado como un neurotransmisor de acción local. Es por esto que al VIP que se encuentra circulando libremente por el plasma, no se le ha dado más valor que el de ser un resto que ha “rebosado” del espacio sináptico.
Por otro lado, el mecanismo de acción del péptido sólo se ha estudiado en diversas especies animales, siendo muy difícil extender su estudio al hombre debido a la complejidad que representa la obtención del material de trabajo.
Con estas ideas básicas, se plantea el objetivo del presente trabajo desde una doble vertiente:
1. Estudiar un modelo celular no inervado capaz de reconocer al péptido y dar de, este modo, una posible explicación fisiológica a la presencia de VIP circulante en plasma.
2. Utilizar, al mismo tiempo, un modelo celular humano y que sea de muy fácil acceso.
Para ello se utiliza como modelo células mononucleares de sangre periférica humana. El medio de estudiar el mecanismo de acción del VIP es a través de una batería de experiencias que incluye:
a) Estudio del receptor de membrana.
b) Activación del sistema adenil ciclasa.
c) Activación de proteínas quinasas.
CONCLUSIONES
1. La unión del 125I-VIP a células mononucleares de sangre periférica humana depende de la concentración celular, temperatura, tiempo y pH de incubación. En el presente trabajo las condiciones óptimas de incubación se consiguen a 15ºC, pH 7,5 y concentración celular de 1,5 x 106 cel/ml, en las que la degradación del trazador y del receptor se minimizan, consiguiendo una unión estable y duradera.
2. La unión del trazador al receptor es reversible, teniendo lugar la disociación según una cinética de segundo orden, que indica la existencia de las poblaciones de receptores, que tienen respectivamente 20 y 90 min de tiempo de media disociación.
3. El VIP nativo compite con el trazador a concentraciones del mismo orden de las fisiológicas (3 x 10-11M), siendo la constante de disociación global de 0,4 x 10-9 M VIP. La representación de Scatchard permite distinguir dos tipos de receptores: uno de alta afinidad (Kd = 0,14 x 10-9m) y baja capacidad de unión (8 fmol/106 cel) y, otro, de baja afinidad (80 x 10-9M) y mayor capacidad de unión (800 fmol/106 cel).
4. El receptor de VIP es específico para él. De otros péptidos utilizados solo la secretina compite con el trazador, pero con una afinidad 400 veces menor.
5. El VIP también estimula la producción de AMPc en células mononucleares, proporcionalmente a la concentración celular y dependiendo del tiempo, temperatura y pH de incubación. En el presente trabajo las condiciones óptimas se consiguen a una concentración celular de 0,5 x 106 cel/mel, a 15ºC y pH 7,5, en las que se consigue una producción de AMPc estable y duradera,
6. La producción de AMPc depende de la concentración de VIP. Se produce un aumento significativo sobre los niveles basales a concentraciones de VIP tan bajas como 3 x 10-11 M. La activación máxima se produce a 10-9 M de un péptido, y el 50% de activación se consigue a 0,1 x 10-9 M.
7. La producción de AMPc a través del receptor de Vip es específica para este péptido. Solo la secretina podía aumentar la producción de AMPc pero con una potencia 7.000 veces menor.
8. El VIP produce una activación de proteínas quinasas en células mononucleares que depende del tiempo de incubación, obteniéndose una actividad máxima a los 15 min.
9. La activación de proteínas quinasas depende de la concentración del péptido, obteniéndose una activación significativa a concentración tan baja como 3 x 10-11 M. la máxima activación se consigue a 10-9M, y el 50% a 0,06 x 10-9M.
10. En el estudio de las diferentes subpoblaciones celulares presentes en la preparación de mononucleares, solo los enriquecidos en linfocitos B ligaban 125I-VIP y aumentaban la producción de AMPc en presencia del péptido. Las preparaciones enriquecidas en linfocitos T, monocitos y los hematíes eran completamente incapaces de realizar ninguna de las dos posibilidades.
11. En resumen, existe un sistema receptor efector que reconoce concentraciones plasmáticas fisiológicas de VIP en una de las estirpes celulares de la preparación de mononucleares sanguíneas, como son los linfocitos B.
2018-01-25T12:20:05Z
2018-01-25T12:20:05Z
1982-08-25
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Guerrero Montávez, J.M. (1982). Acción del péptido intestinal vasoactivo a través de su receptor sobre la actividad adenilciclasa y proteinquinasa en células mononucleares sanguíneas humanas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/69560
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-11-12T16:19:29Z
urn:hdl:11441/90171
Producción de anticuerpos monoclonales humanos y su aplicación en el estudio del poliformismo del sistema HLA
Núñez Roldán, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2019-11-12T16:19:29Z
2019-11-12T16:19:29Z
1990-11-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sánchez Sánchez, B. (1990). Producción de anticuerpos monoclonales humanos y su aplicación en el estudio del poliformismo del sistema HLA. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90171
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-12-05T08:56:50Z
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Aspectos reguladores de los glucocorticoides sobre la producción de inmunoglobulinas en cultivos de linfocitos humanos estimulados con PWM
Gómez de la Concha, Emilio
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Ciencias médicas
Inmunopatología
Patología
Se pretende en el presente trabajo, abordar el análisis de los efectos de los glucocorticoides a dosis alcanzables in vivo, sobre los mecanismos de interacción celular que se generan en el sistema de producción de inmunoglobulinas en cultivos de linfocitos humanos estimulados con PWM.
Para ello se estudia la función de poblaciones linfocitarias totales y mezclas de subpoblaciones enriquecidas en linfocitos B y T, de sangre y amígdala.
La adición de glucocorticoides (hidrocortisona y prednisolona) a cultivos de linfocitos sanguíneos conduce a una inhibición de la síntesis de DNA estimulada por mitógenos (PHA, Con A, PWM), inhibición que es mayor a mayores dosis, y no depende de efectos citotóxicos. Por el contrario estos fármacos provocan un aumento de la producción de inmunoglobulinas en cultivos de linfocitos sanguíneos estimulados con PWM. Este aumento es más expresivo a dosis farmacológicas (10-5 M, 10-6 M) de estos agentes, y se ejerce sobre las tres clases principales de inmunoglobulinas (IgM, IgG, IgA), si bien es más significativo para la IgM. Este efecto se debe a la generación en el cultivo adicionado con el fármaco, de un mayor número de células sintetizadoras (células plasmacitoides) de inmunoglobulinas. Para que el efecto se produzca, es necesaria la incorporación del agente al cultivo al inicio del mismo, y el efecto no se acompaña de cambios en la cinética de la respuesta al PWM. Este efecto no se ejerce sobre poblaciones enriquecidas en linfocitos B. estos hechos sugieren que el efecto de los glucocorticoides se ejerce sobre los eventos iniciales de la respuesta al PWM. Este efecto de aumento no se observa en poblaciones de linfocitos de amígdala. Estos órganos poseen marcadas diferencias en las proporciones que contienen de las diversas subpoblaciones. Esto lleva a estudiar los efectos de estos fármacos en mezclas de subpoblaciones B y T. Con estos experimentos se comprueba que en relaciones B/T mayores de 1, los glucocorticoides dan lugar a un descenso de la producción de inmunoglobulinas, y en aquellos con una relación B/T menor de 1, actúan aumentando dicha producción. Esto ocurre tanto con linfocitos de sangre como de amígdala. El efecto de aumento en cultivos con una relación B/T menor de 1 puede explicarse por una acción inhibidora de los glucocorticoides sobre la producción T supresora, dado el parecido de este efecto con el generado por linfocitos T irradiados, y por la reversión parcial de la actividad supresora de los linfocitos T pretratados con Con A. El efecto de disminución de la producción de inmunoglobulinas en cultivos con relación B/T mayor de 1, se debe a la acción supresora de una población de monocitos, ya que el efecto desaparece al deplecionar dicha población, hecho este que no conduce a cambios en el fenómeno observado en cultivos con relaciones B/T menores de 1.
Todo esto sugiere un papel modulador para los glucocorticoides a dosis farmacológicas, que actuarían aumentando o disminuyendo la producción de anticuerpos, dependiendo de las proporciones que, de las distintas células que intervienen en la respuesta, existan en el cultivo. Esto puede explicar algunos de los efectos que producen los glucocorticoides in vivo.
OBJETIVOS
Se pretende en el presente trabajo ahondar en el conocimiento de los efectos que los glucocorticoides ejercen sobre la función de los linfocitos. La oportunidad de este estudio reside en el extenso uso que de estos fármacos se está haciendo en la actualidad, fundamentalmente en aquellas afecciones cuya fisiopatología se basa en trastornos de la respuesta inmune.
Para ello se requieren ver los efectos causados por estos agentes, cuando son incorporados a dosis fisiológicas o farmacológicas, en sistemas de cultivo in vitro de linfocitos humanos, en los que pueden detectarse las funciones linfocitarias. Resumidamente se cubrirán los siguientes aspectos:
1. Se estudiará el efecto de los glucocorticoides (hidrocortisona y prednisolona) sobre la capacidad de proliferación de linfocitos sanguíneos en cultivo, estimulados con mitógenos (PHA, Con A, PWM), mediante la medida de la captación de timidina tritiada por las células en división.
2. Se observará la acción de las mismas sustancias sobre la producción de inmunoglobulinas por cultivos de linfocitos estimulados con PWM, midiendo la respuesta mediante un RIA.
3. Se analizará la cinética y requisitos de los efectos encontrados.
4. Se compararán los efectos producidos por los glucocorticoides sobre la producción de inmunoglobulinas de poblaciones totales de linfocitos de sangre y amígdala.
5. Se verán estos efectos sobre poblaciones enriquecidas en linfocitos B y linfocitos T, así como en diferentes mezclas de estas poblaciones provenientes tanto de sangre como de amígdala.
6. Se relacionarán los efectos hallados con los producidos por las poblaciones reguladoras de linfocitos T irradiados o pretratados con Con A.
7. Se evaluará la modulación que sobre las actividades encontradas efectúen los monocitos, usando poblaciones deplecionadas de estas células por técnicas de adherencia.
Con todo esto se pretende abordar la actuación de los glucocorticoides a dosis alcanzables in vivo, sobre los mecanismos de interacción celular puestos en juego en la producción de inmunoglobulinas estimuladas por PWM, sistema este para el que han descrito gran cantidad de similitudes con los eventos que ocurren en la respuesta inmune normal.
CONCLUSIONES
1. La hidrocortisona y prednisolona tienen un efecto inhibidor sobre la proliferación de linfocitos estimulados por mitógenos. Este efecto no se debe a citotoxicidad y es dosis-dependiente.
2. Estos mismos glucocorticoides provocan un aumento de la producción de inmunoglobulinas de linfocitos sanguíneos estimulados con PWM. Este efecto es más significativo a 10-5 M a 10-6 M (dosis farmacológicas), y se observa para las tres clases principales de inmunoglobulinas, si bien es más expresivo para la IgM.
3. El efecto se debe a un aumento del número de células sintetizadoras de inmunoglobulinas.
4. Para producir dicho efecto se requiere que la hidrocortisona sea incorporada al inicio del cultivo.
5. Los glucocorticoides no producen cambios en la cinética de producción de inmunoglobulinas inducida por el PWM.
6. El efecto no se debe a un aporte por parte de los glucocorticoides de señales cooperadoras a poblaciones de linfocitos B.
7. No se observan efectos significativos de estos agentes sobre poblaciones de linfocitos totales de amígdala, en contraste de lo ocurrido en sangre. Esto sugiere un posible papel diferencial de los glucocorticoides en diversos territorios linfoides.
8. Los glucocorticoides a dosis farmacológicas ejercen una acción de disminución de la producción de inmunoglobulinas en cultivos de mezclas de poblaciones enriquecidas en linfocitos B y T, que guardan una relación B/T mayor de uno. Este efecto se debe a la acción supresora de una población de monocitos tras el contacto con glucocorticoides y desaparece al deplecionar estas células.
9. Estos fármacos a las mismas dosis aumentan la producción de inmunoglobulinas en cultivos con una relación B/T menor que uno. Este efecto parece depender de la inhibición de la actividad de los linfocitos T supresores ejercida por los glucocorticoides, dado su parecido con la acción de linfocitos T irradiados, y la reversión parcial de la actividad de los linfocitos T tratados con Con A.
10. Estos hechos sugieren un papel modulador de estos agentes a dosis farmacológicas, que quizás pueda explicar algunos de los efectos de estos fármacos en diversos estados patológicos.
2018-12-05T08:56:50Z
2018-12-05T08:56:50Z
1981-06-01
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Brieva Romero, J.A. (1981). Aspectos reguladores de los glucocorticoides sobre la producción de inmunoglobulinas en cultivos de linfocitos humanos estimulados con PWM. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80798
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-06-16T08:45:45Z
urn:hdl:11441/97881
Genética molecular de la cavernomatosis cerebral familiar
Lucas Lucas, Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-06-16T08:45:45Z
2020-06-16T08:45:45Z
2003-02-27
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Costa Martins, A.d.F. (2003). Genética molecular de la cavernomatosis cerebral familiar. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/97881
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-11-28T09:25:48Z
urn:hdl:11441/80599
Estudio del comportamiento electrocardiográfico de los iones alcalinos monovalentes en el infarto de miocardio experimental
Viña Giner, José María
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Es un hecho bien conocido desde un punto de vista clínico, que determinados sujetos afectos de severos infartos de miocardio, demostrados por la clínica y los análisis consecuentes e incluso en determinados casos por la necropsia, no presentan manifestaciones de actividad eléctrica anormal en los trazados derivados al efecto. Se ha pensado en la posibilidad de que estos infartos por su localización en la cara posterior del corazón, o por ser pequeños en extensión y no aflorar a la superficie del epicardio o del endocardio, sería n la causa de esta ausencia de signos electrocardiográficos. Se han utilizado derivaciones especiales para el diagnóstico de estos infartos, (Hula), algunas como las intraesofágicas han llegado a generalizarse, pero aunque han disminuido las discordancias existentes entre la clínica y la electrocardiogragía, aún existen casos, relativamente frecuentes en que no aparece manifestación electrocardiográfica alguna que nos induzca a pensar en la existencia de una necrosis muscular cardiaca. Esto ha conllevado a la valoración diagnóstica de determinadas pruebas de laboratorio, entre las más utilizadas las transaminasas glutámico oxalcético, glutámico pirúvica, leucocitosis y aumento de la velocidad de sedimentación. (Angelino, Mina, Doskov, Oreskov y Dimitrov.)
Por otro lado, nos encontramos con excesiva frecuencia, manifestaciones electrocardiográficas que nos hacen sospechar la posibilidad de lesiones necróticas miocárdicas, sin observar manifestaciones clínicas ni de laboratorio típicas de los mismos. Son muchos los trabajos que se han publicado intentando aclarar esta discrepancia, (Prescott, Dumont, Presniakov) incluso algunos autores han relacionado la existencia o no de estas manifestaciones con la rapidez de creación de circulaciones colaterales. (Blumgart, Schlessinger) o con la patocronia del infarto (Heinecker).
Estas discordancias han creado un clima de reserva diagnóstica en los trazados electrocardiográficos, que algunos autores han intentado revalorizar mediante revisiones de conjunto del problema que estamos tratando (Grewin, Nakano).
Todo lo anteriormente expuesto nos indujo a aclarar las razones por las cuales aparecieron los trazados denunciadores de sufrimiento o necrosis, provocando experimentalmente infartos de corazón y verificando derivaciones directamente desde la zona sana y la zona infartada del miocardio. Preveíamos que procediendo así podríamos efectuar un análisis más correcto del problema, al eliminar una serie de incógnitas que evidentemente juegan un papel cuando se deriva desde la superficie del precordio en el tórax.
Este método tiene la ventaja de que se eliminan en la experiencia todos aquellos factores que están relacionados con la conducción inespecífica o la conducción de volumen, que son las masas de tejidos que se interponen entre el elemento creador del potencial corazón, y la placa de mental que sirve para derivarlo, extremidad precordial del cable del electrocardiógrafo.
La eliminación en consecuencia de las incógnitas o factores de error antes señalados nos conduciría a resultados cuyo análisis sería más fácil de verificar, toda vez que podrían estar en conexión con hechos perfectamente delimitados y modificables por la voluntad del experimentador. Por otro lado, la puesta a punto de un método experimental como el que nos proponemos realizar, permitirá efectuar en distintos animales experiencias que fuesen rigurosamente superponibles, al objeto de que los resultados fuesen comparables, ya que pequeñas variaciones en el planteamiento de una experiencia de este tipo conlleva alteraciones en los resultados que serían difíciles de sistematizar.
El método experimental en el que se apoya el presente trabajo tiene su punto de partida en las experiencias de Wilson y Hill, que en los años 1934-35 efectuaron ligaduras de la coronaria descendente anterior observando las manifestaciones electrocardiográficas producidas por la misma. Johston y Hill, repitieron las experiencias pero centrando su estudio sobre las manifestaciones electrocardiográficas precoces de la ligadura de la misma arteria. Otros autores (Schlessinger) estudian las anastomosis interarteriales postoclusivas de las arterias coronarias. Los efectos electrocardiográficos de la oclusión intermitente o temporal de las coronarias fueron estudiados por Blumgart, Mathew y Levy estudian el efecto sobre el flujo de sangre de la ligadura de una arteria coronaria. En general todos estos autores mencionados utilizaron la técnica de disección de la arteria coronaria descendente anterior, y con menos frecuencia la circunfleja, y oclusión posterior mediante ligadura o clampaje de las mencionadas arterias coronarias. En años posteriores las técnicas de producción experimental de infartos de miocardio han venido evolucionando a medida que ha mejorado el material y la técnica quirúrgica.
Entre los métodos experimentales más comúnmente empleados están la inyección intracoronaria de sustancias de elevado peso molecular (Toyomisano et al.), polvo de licopido por ejemplo utilizado por James y West. La producción de trombosis intravascular mediante una descarga eléctrica producida por un catéter metálico introducido en una arteria coronaria por sondaje bajo control radioscópico, Sawyer y Pate. También se han conseguido infartos de miocardio, en especial por autores rusos, con la administración por vía oral de determinadas sustancias favorecedoras de procesos degenerativos vasculares. El trabajo prínceps lo público Myasnikov y basados en este los de Kostiw, Xhecuckuk y Brezniths, Mortaria ha obtenido infartos de miocardio en pequeños animales con el isoproterenol.
A pesar de todos los perfeccionamientos técnicos actuales los autores siguen prefiriendo la técnica inicial de disección y ligadura de la arteria coronaria descendente anterior para obtener infartos de miocardio experimentales. Pisa, Hammer, Purandare, Durandare, Jennings, Sommers, Smith, Flack y Linn.
Con esta preparación estrictamente teórica, probablemente no hubiésemos conseguido una depurada técnica a no ser por la visita que a este Laboratorio de Fisiología realizó el Doctor Sodi Pallares durante el primer trimestre del curso 1963-64. El cual nos hizo una demostración en el quirófano experimental de la técnica de disección de la arteria coronaria, y de la producción experimental de bloqueos de ramas. Técnica que más tarde hubimos de modificar por las razones que se exponen en el apartado de material y método de esta Tesis Doctoral.
El inconveniente difícil de obviar cuando se verifica un trabajo por muy amplio que sea, de carácter electrocardiográfico sobre hombre enfermo, radica en el hecho de que la actitud interpretativa va desde el trazado eléctrico, por inducción mental, hacia la víscera enferma. La ventaja del método experimental radica en que se “dirige” la alteración visceral y sobre lo que en ella pasa se confronta con el trazado eléctrico. Camino inverso del que normalmente se sigue en la clínica en lo que al diagnóstico de alteraciones vasculares cardiaca se refiere.
Todos estos hechos nos indujeron a plantearnos el problema objeto de esta Tesis relacionando los resultados ya conocidos y que sirvieron de Tesis Doctoral a Morato Crucells, en la cual se estudiaban las variaciones que en electrocardiograma producen la presencia de los iones alcalinos monovalentes cuando con ellos se deriva desde la superficie sana de epicardio. La aplicación de una misma metódica de trabajo, pero actuando no sobre un corazón sano, sino con infarto experimental podía alumbrar algunos de los problemas que se resolvían en dicho trabajo y que aplicados al corazón infartado podían orientar hacia nuevos caminos.
En efecto en aquel trabajo se hacia señalar como rasgo muy llamativo la presencia de trazados electrocardiográficos con espacio ST típicos de sufrimiento o necrosis de corazón, sin que hubiese ninguna lesión anatomopatológica en la víscera objeto de experiencia, contrastando con un hecho ya conocido por nosotros, de que derivando desde la superficie sana de un corazón con infarto no se obtenía ningún trazado que denunciase la presencia de dicha lesión. Estos dos hechos contrapuestos constituían motivo de curiosidad e inquietud que nos indujo a estudiar experimentalmente las razones que pudieran aclarar algunos aspectos que derivan de esta significativa paradoja.
2018-11-28T09:25:48Z
2018-11-28T09:25:48Z
1965-11-09
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Bellido Gámez, J.A. (1965). Estudio del comportamiento electrocardiográfico de los iones alcalinos monovalentes en el infarto de miocardio experimental. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80599
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1299542022-02-15T08:23:08Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2022-02-15T08:23:08Z
urn:hdl:11441/129954
Papel de la leptina y su resistencia en el síndrome de ovario poliquístico y la diabetes gestacional
Pérez Pérez, Antonio
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La resistencia a la insulina y el síndrome metabólico al que se asocia es un problema sociosanitario de primer nivel. En la mujer el síndrome metabólico produce dos alteraciones fisiopatológicas propias que son el síndrome de ovario poliquístico (PCOS) y la diabetes gestacional (DMG).
La leptina es la adipocina más importante y su resistencia está asociada tanto a obesidad como a la resistencia a la insulina. Nuestra hipótesis era que la resistencia a la leptina en células de la granulosa humana podría conllevar una menor expresión de aromatasa y por tanto una menor síntesis de estrógenos. Como hemos estudiado en otros sistemas quisimos comprobar la importancia de la expresión de la proteína Sam68 en la señal del receptor de leptina y su resistencia en PCOS.
En el embarazo, los niveles de leptina aumentan por la síntesis de leptina, una hormona trofoblástica autocrina para el crecimiento placentario. La función trófica y antiapoptótica ha sido descrita por nuestro grupo. La hipótesis propuesta en esta tesis es el efecto antiapoptótico de la leptina frente a dos circunstancias fisiopatológicas, la hipertermia y la acidosis.
Nuestro grupo también ha demostrado que la hiperleptinemia en la DMG se debe a una mayor expresión de leptina en el trofoblasto. Además, el receptor de leptina está activado en esta patología. Nuestra hipótesis es que la macrosomía del feto de la mujer con DMG estaría favorecida por una mayor expresión de transportadores de nutrientes, como AQP-9 que es un transportador de agua y glicerol.
Los resultados de la Tesis han confirmado la presencia de resistencia a la leptina en la granulosa de mujeres con PCOS, donde se expresa menos aromatasa y menos proteína Sam68, una molécula de señalización necesaria para la señal del receptor de leptina, por lo que proponemos nuevas dianas terapéuticas en el PCOS.
El papel antiapoptótico de la leptina en células trofoblásticas ha sido confirmado con las situaciones fisiopatológicas de hipertermia y acidosis, lo que incide en la importancia del sistema leptina/receptor de leptina en el mantenimiento de la placenta
Por último, hemos demostrado que la leptina induce la expresión de AQP-9, la cual está sobreexpresada en el trofoblasto de mujeres con DMG.
Esta Tesis confirma la importancia de la leptina y su resistencia en el PCOS y DMG, e incide en los mecanismos de acción, apuntando a nuevas dianas terapéuticas como la proteína Sam68.
2022-02-15T08:23:08Z
2022-02-15T08:23:08Z
2021-10-06
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Vilariño García, T. (2021). Papel de la leptina y su resistencia en el síndrome de ovario poliquístico y la diabetes gestacional. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/129954
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-12-10T07:16:54Z
urn:hdl:11441/80873
Contribución al estudio dermatoglífico en las alteraciones cromosómicas sexuales
Novales Huerta, María de los Ángeles
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Las primeras patologías asociadas a rasgos dermatoglíficos fueron ciertas cromosomopatías como las trisomías 21, 18 y 13, manteniéndose sus pecualiaridades dermatoglíficas a pesar de las diferencias étnicas y raciales.
Los síndromes gonosómicos presentan alteraciones dermatoglíficas menos específicas que los autosómicos, destacando las de carácter cuantitativo. Dado que en la zona de Andalucía Occidental y Extremadura no existía ningún estudio dermatoglífico en individuos con alteraciones gonosómicas, nos pareció interesante realizar una evaluación de las peculiaridades dérmicas de los síndromes Turner, Klinefelter y Triple X en nuestro entorno.
Nuestro interés se centró en establecer las diferencias existentes entre estos tres grupos patológicos y la población general, con objeto de conocer las semejanzas y diferencias entre los resultados obtenidos en nuestra área geográfica y los obtenidos por otros investigadores en diferentes comunidades, más que en resaltar la utilidad diagnóstica del análisis dermatoglífico en estos síndromes, ya que dada la alta variabilidad biológica de los caracteres dérmicos, no existe un rasgo único ni un patrón dermatoglífico específico para pacientes individuales.
En nuestro estudio partimos de cinco grupos distintos: control masculino, control femenino, Turner, Klinefelter y Triple X; en cada uno de ellos estudiamos las características dérmicas utilizando los diferentes métodos propuestos al objeto de recabar el máximo de información. Seguidamente procedimos a valorar estadísticamente las diferencias existentes, comparando el grupo Klinefelter con el control masculino y los grupos Turner y Triple X con el control femenino, para evitar que el dimorfismo sexual dermatoglífico interfiriera en los resultados.
Por otra parte la alta viabilidad de las aneuplidías gonosómicas, que comprenden desde la monosmía X hasta las pentasomías más variadas, ha permitido especular a cerca de la influencia que ejerce el tipo y número de cromosomas sexuales sobre los rasgos dermatoglíficos; estableciéndose la hipótesis de que el aumento del número de cromosomas en el cariotipo está asociado con la disminución de los valores dermatoglíficos cuantitativos y de que el efecto reductor del cromosoma X es mayor que el del Y.
Con objeto de contribuir al esclarecimiento de esta hipótesis y de su validez para los caracteres cuantitativos más representativos, nos planteamos, como otro aspecto de este trabajo, el estudio de la variación de los rasgos cuantitativos en función de la variación gonosómica. Para estudiar el efecto del cromosoma X partimos de dos series de muestras, cuya característica diferencial es la presencia o ausencia de cromosoma Y: la serie 45,XO, 46,XX, 47,XXX, 48,XXXX, 49,XXXXX y la serie 46,XY, 47,XXY, 48,XXXY. Mientras que para estudiar el efecto del cromosoma Y utilizamos las series 45,XO, 46,XX y 46,XX, 47,XXY, ya que no disponíamos de varones con polisomías del cromosoma Y.
CONCLUSIONES:
1. EL síndrome de Turner es la gonosomopatía detectada con mayor frecuencia en nuestro entorno, en concordancia con los datos de la literatura general. Sin embargo la frecuencia de individuos diagnosticados con síndrome de Klinefelter y polisomía X en nuestra área geográfica es menor de la que cabría esperar, lo que nos hace pensar dadas las características fenotípicas de estos síndromes, en una tasa de detección baja.
2. El presente estudio dermatoglífico es el más exhaustivo de los realizados en individuos con alteraciones de los cromosomas sexuales, lo que nos ha permitido comparar nuestros resultados con los diferentes estudios publicados independientemente de su metodología.
3. Nuestros resultados indican que el método Tradicional y el Topológico ofrecen una información semejante en general, pero más o menos detallada para determinados rasgos, sin que ninguno de ellos presente ventajas claras respecto al otro a excepción de la mayor rapidez y comodidad del criterio topológico, por lo que consideramos ambos métodos no como excluyentes, sino como complementarios.
4. La clasificación de Weninger y Navratil resulta ser más informativa que la clasificación convencional en la determinación del tipo de pliegue anómalo más frecuente en los grupos patológicos.
5. El estudio comparativo de los rasgos dermatoglíficos cualitativos ha revelado que los individuos con dotación cromosómica 45,XO presentan significativamente:
a) Más bucles ulnares y menor frecuencia de arcos y vorticilos en los dedos.
b) Mayor frecuencia de bucles periféricos, bucles tienda y bucles centrales (III, IIIT, (III) ̂) considerados conjuntamente en el área palmar III.
c) Mayor frecuencia de figuras hipotenares (H, H ̂, Hr); en concreto más bucles ulnares (Lu) o periféricos (H) y más vorticilos (W).
d) Mayor frecuencia de terminación de la línea A en la base del pulgar.
e) Mayor frecuencia de terminación de la Línea T en el área interdigital II.
f) Más trirradios axiales en posición t” utilizando los métodos de Penrose y Ford-Walker en el criterio de clasificación Tradicional y el método de Penrose en el Topológico.
g) Menos trirradios axiales en posición t según el método de Penrose en el criterio de clasificación Tradicional.
h) Más trirradios en el borde ulnar del área hipotenar (tb).
i) Menos surcos Normales según la clasificación convencional.
j) Menos surcos del tipo II y más del tipo V según la clasificación de Weninger y Navratil.
6. El estudio comparativo de los rasgos dermatoglíficos cuantitativos ha revelado que los individuos con dotación cromosómica 45,XO presentan significativamente:
a) Mayor número Dactilar Total (NDT), a pesar de la mayor frecuencia de vorticilos.
b) Menor Índice de Líneas Principales (A+D).
c) Mayor ángulo atd máximo.
d) Mayor distancia porcentual del trirradio axial más distal al pliegue carpal.
7. El estudio comparativo de los rasgos dermatoglíficos cualitativos muestra que los individuos con dotación cromosómica 47,XXY presentan significativamente:
a) Menos bucles radiales (Ir) en el área palmar I.
b) Menos bucles periféricos (II ó L) en el área interdigital II.
c) Menor frecuencia de trirradio accesorio a’.
d) Menos trirradios axiales en posición t utilizando el método de Ford-Walker en el criterio de clasificación Tradicional.
e) Menos surcos Normales según la clasificación convencional.
f) Más pliegues Sidney según la clasificación convencional o del tipo III según la clasificación de Weninger y Navratil.
8. La comparación de los rasgos dermatoglíficos cuantitativos entre el grupo Klinefelter y el control masculino no ha revelado ninguna diferencia significativa.
9. El estudio comparativo de los rasgos dermatoglíficos cualitativos muestra que las mujeres 47,XXX presentan de forma significativa.
a) Más arcos y menos bucles ulnares en los dedos.
b) Menos pliegues Normales según la clasificación convencional.
c) Distinta distribución de surcos según la clasificación de Weninger y Navratil.
10. Respecto a los rasgos cuantitativos, las mujeres con trisomía X presentan un número significativamente menor de crestas entre los trirradios a y b de la palma.
11. Nuestro estudio muestra que el grupo Turner es el que presenta mayor número de diferencias significativas respecto al control, siendo estas diferencias concordantes con las registradas en la literatura. El grupo de Klinefelter y el grupo Triple X muestran menor número de diferencias respecto al control, siendo estas diferencias menos coincidentes en los estudios realizados.
12. El estudio estadístico sobre la variación de los rasgos dermatoglíficos cuantitativos en función de número de cromosomas sexuales, presenta muchas dificultades debido a la baja incidencia de polisomías con más de tres cromosomas sexuales.
13. Nuestro estudio descriptivo sobre la variación de los rasgos dermatoglíficos cuantitativos en función del número de cromosomas sexuales, muestra que el aumento del número de cromosomas X en el cariotipo parece estar asociado con la disminución del Número Dactilar Total (NDT) manifestándose este efecto reductor tanto en la serie de varones como en la de mujeres.
14. El aumento del número de cromosomas X en el cariotipo parece estar asociado, además con cierta tendencia a la disminución del Número de crestas a-b.
15. Por otra parte el efecto reductor del cromosoma X sobre el Número Dactilar Total y el Número de crestas a-b parece ser mayor que el del Y.
16. Por último las alteraciones numéricas de los cromosomas sexuales, parecen estar relacionadas en general con la aparición de ángulos atd más abiertos.
2018-12-10T07:16:54Z
2018-12-10T07:16:54Z
1988-02-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Álvarez-Ossorio Vicente, A. (1988). Contribución al estudio dermatoglífico en las alteraciones cromosómicas sexuales. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80873
6017149
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-10-27T09:27:07Z
urn:hdl:11441/102277
Estudio poblaciones celulares en pacientes con linfoma difuso de células B grandes refractarios o en recaída: papel de las células supresoras de origen mieloide en respuesta al tratamiento R2-GDP
Sánchez Margalet, Víctor
Cruz Merino, Luis de la
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La inmunoedición, que se caracteriza por el escape que realizan las células malignas de la inmunovigilancia antitumoral, fue reconocida hace unos años como un nuevo hallmark del cáncer. En diversos tipos de neoplasias, como el cáncer de mama o algunos linfomas, se ha comprobado cómo la infiltración linfocitaria tumoral y ciertos marcadores del perfil inmune en sangre periférica pueden suponer factores pronósticos y/o predictivos de respuesta a determinados tratamientos oncológicos.
En esta Tesis Doctoral, enmarcada en el estudio titulado “Ensayo fase II para valorar la combinación de lenalidomida con R-GDP (R2-GDP) en pacientes con linfoma difuso de células grandes B refractarios o en recaída (R/R DLBCL) no candidatos a quimioterapia a altas dosis y trasplante de células progenitoras hematopoyéticas”, se ha analizado por citometría de flujo el perfil inmune de los pacientes que padecen dicha enfermedad antes, durante y tras el tratamiento R2-GDP, basado en lenalidomida, rituximab, gemcitabina, dexametasona y cisplatino. Asimismo, los resultados obtenidos se han comparado con una cohorte de sujetos sanos que ha sido empleada como control y se han correlacionado con otros parámetros, como los subtipos de DLBCL, los niveles de vitamina D antes de iniciar el tratamiento o la tasa de respuesta objetiva.
Entre todos los parámetros del perfil inmune analizados cabe destacar las células supresoras de origen mieloide (MDSC), que comprenden un subconjunto heterogéneo de células inmaduras que, entre otras funciones, son capaces de inhibir la respuesta inmune antitumoral que ejercen los linfocitos T y promover la angiogénesis. En los últimos años, diversos estudios han demostrado altos niveles de estas células en el microambiente tumoral, por ello se ha analizado también la correlación existente en sangre periférica entre estas (y otras poblaciones celulares) con la respuesta a la terapia empleada.
Los resultados obtenidos arrojan datos prometedores de respuesta a este tratamiento para los pacientes con DLBCL que son refractarios o sufren recaídas de la terapia de primera línea. En general, con la inmunoterapia R2-GDP se ha establecido un score inmunológico en el que determinados conjuntos celulares podrían ser un posible marcador pronóstico y/o predictivo de respuesta. En particular, este tratamiento ha hecho disminuir de forma significativa el nivel de MDSC, al menos en los pacientes que han obtenido una buena respuesta, lo cual podría permitir establecer a este conjunto celular como una importante diana terapéutica contra la progresión tumoral, así como ser un potencial marcador de respuesta al tratamiento.
2020-10-27T09:27:07Z
2020-10-27T09:27:07Z
2020-07-13
2023-07-13
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Jiménez Cortegana, C. (2020). Estudio poblaciones celulares en pacientes con linfoma difuso de células B grandes refractarios o en recaída: papel de las células supresoras de origen mieloide en respuesta al tratamiento R2-GDP. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/102277
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2021-06-10T15:43:15Z
urn:hdl:11441/111670
Capacidad antioxidante de la melatonina, vitamina E y vitamina C sobre el estrés oxidativo celular inducido por hiperfenilalaninemia fetal
Osuna Fernández, Carmen
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La fenilcetonuria (PKU) es una hiperfenilalaninemia autosómica recesiva causada por la deficiencia de la fenilalanina hidroxilasa, esta caracterizada por el bloqueo de la conversión de fenilalanina a tirosina. El objetivo de nuestra memoria es examinar el efecto de la hiperfenilalaninemia maternal sobre la morfología y desarrollo bioquímico en cerebro y cerebelo de ratas jóvenes. En nuestro modelo de PKU, nosotros evaluamos un número de marcadores de estrés oxidativo tales como la formación de adductos de Ehrlich, peroxidación lipídica, niveles de glutatión reducido y oxidado y la actividad de la glutatión peroxidasa y reductasa. Nosotros también estudiamos de estrés oxidativo. En este trabajo nosotros demostramos que la hiperfenilalaninemia prenatal incrementa fuertemente los marcadores estudiados e induce un significativo daño morfológico. Nosotros también demostramos que la melatonina, vitamina e y vitamina c previnieron el daño oxidativo biomolecular en cerebro y cerebelo. En conclusión la hiperfenilalaninemia induce un evidente estado de estrés oxidativo que de alguna manera involucra daños en cerebro, cerebelo y cuerpo como ocurre en los errores innatos. Además la melatonina y otros antioxidantes son capaces de prevenir completamente el daño inducido por el estado de hiperfenilalaninemia fetal.
2021-06-10T15:43:15Z
2021-06-10T15:43:15Z
2002-04-04
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Martínez Cruz, F. (2002). Capacidad antioxidante de la melatonina, vitamina E y vitamina C sobre el estrés oxidativo celular inducido por hiperfenilalaninemia fetal. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/111670
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-10-02T17:01:52Z
urn:hdl:11441/79022
Estudio del proceso de modificación postraduccional de proteínas por unión del polipéptido sumo en condiciones simuladas de isquemia.
García Domínguez, Mario
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
SUMO (Small Ubiquitin-like MOdifier) es un pequeño polipéptido compuesto por alrededor de 100 aminoácidos que orquesta una variedad de procesos en el interior celular. Se ha descrito que la SUMOilación (modificación postraduccional de proteínas por unión del polipéptido SUMO) tiene efectos neuroprotectores. Sin embargo, las proteínas diana y los mecanismos de regulación han sido poco investigados y se necesita un conocimiento exhaustivo de ello para poder realizar intervenciones con fines terapéuticos a través de la modificación de los niveles de SUMO. Para llevar a cabo esta investigación se sometieron células P19 en estado de proliferación así como neurodiferenciadas a tratamientos de estrés que produjeran escenarios simulados de isquemia, como condiciones de cultivo en ausencia de oxígeno y glucosa (OGD, Oxygen and Glucose Deprivation).
Para conocer las proteínas dianas de SUMO es preciso purificarlas selectivamente, por lo que en este trabajo hemos puesto a punto un método para la purificación de las proteínas SUMOiladas (SUMOiloma). Así mismo, a través del uso de una línea celular de células P19 que expresaba de forma estable una construcción de SUMO2 etiquetado con una cola de 10 His hemos conseguido aislar dicho SUMOiloma en condiciones de OGD y tras restablecer las condiciones normales de cultivo (ROGD, Recover from OGD). A través de espectrometría de masas hemos hallado más de 200 proteínas diferentes modificadas por SUMO2 que, en gran proporción, realizan funciones relacionadas con el proceso de transcripción.
Para estudiar los mecanismos de regulación por los cuales se producen variaciones en los niveles de SUMO en condiciones de isquemia es importante analizar los cambios en los niveles de expresión de los genes de las proteínas más importantes del ciclo de SUMOilación. En este trabajo hemos hallado que los niveles de expresión de los genes de varias SUMOproteasas descienden mientras que los de varias ligasas ascienden.
La alteración de los niveles de expresión de varias proteínas identificadas en nuestro estudio proteómico (NAB2, OCT4 y SOX2), así como de sus mutantes no SUMOilables, y de proteínas del ciclo de SUMOilación como PIAS4, SENP3 y SENP7 produjo cambios significativos en los niveles de supervivencia celular en condiciones de OGD en células P19. Además, un análisis de supervivencia de pacientes con determinados tipos de cáncer correlacionó en el mismo sentido con los niveles de expresión de algunos de estos genes de proteínas del ciclo de SUMOilación.
Por todo ello, debido a los efectos que produjeron en los niveles de apoptosis celular en condiciones de OGD así como por su correlación con los niveles de supervivencia de pacientes con varios tipos de cáncer, en este trabajo se han identificado una serie de proteínas participantes en el ciclo de SUMOilación que son candidatos prometedores para la intervención terapéutica tanto en relación al cáncer como a la isquemia.
2018-10-02T17:01:52Z
2018-10-02T17:01:52Z
2018-09-21
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Gallardo Chamizo, F.d.A. (2018). Estudio del proceso de modificación postraduccional de proteínas por unión del polipéptido sumo en condiciones simuladas de isquemia.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/79022
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-17T07:06:05Z
urn:hdl:11441/72971
Mecanismo de acción de la ciclosporina A en el páncreas endocrino y células HIT
Bedoya Bergua, Francisco Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2018-04-17T07:06:05Z
2018-04-17T07:06:05Z
1991
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Martín Bermudo, Francisco Manuel (1991). Mecanismo de acción de la ciclosporina A en el páncreas endocrino y células HIT (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/72971
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-05T07:10:04Z
urn:hdl:11441/71793
Estudio de las alteraciones inmunovirológicas de pacientes VIH "escasos repobladores": potenciales predictores y mecanismos implicados.
Leal Noval, Manuel
Pacheco López, Yolanda María
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La infección por VIH provoca una depleción masiva de linfocitos T CD4 (CD4)
que finalmente evoluciona a SIDA si no se inicia tratamiento. El tratamiento
antirretroviral combinado (TARc) consigue suprimir la viremia VIH permitiendo un aumento del recuento de CD4. Sin embargo, existe un grupo de individuos, denominados “Escasos Repobladores” (ER), que no recuperan sus niveles de CD4 a pesar del TARc. Diversos factores hacen necesario el estudio de estos sujetos. En primer lugar, los ER constituyen un 25% de los sujetos que comienzan el TARc con bajos CD4. Por otro lado, los ER presentan un mayor riesgo de experimentar eventos clínicos no definitorios de SIDA (ENOS) y de muerte. Desafortunadamente, todas las intervenciones terapéuticas dirigidas a aumentar los recuentos de CD4 de los ER han
fallado, dejando patente la necesidad de comprender mejor los mecanismos
inmunológicos implicados y así diseñar nuevas estrategias terapéuticas.
Se han propuestos diversos mecanismos inmunopatogénicos como potenciales desencadenantes de la escasa recuperación de CD4 tras el TARc. Sin embargo, todos los estudios previos se han llevado a cabo cuando los ER estaban bajo TARc, no pudiéndose descartar que las alteraciones descritas sean consecuencia de sus bajos recuentos CD4 en el momento de estudio. Para responder a dicha cuestión, nos propusimos estudiar los ER antes del inicio del TARc, cuando estos sujetos presentan recuentos de linfocitos T CD4 similares a los del grupo control. Este fue el primer objetivo de la presente Tesis Doctoral y fue abordado en el trabajo: “Higher levels of
IL-6, CD4 turnover and Treg frequency are already present before cART in HIVinfected subjects with later low CD4 recovery”. El estudio de pacientes ER antes del inicio del TARc nos permitió determinar alteraciones inmunológicas que preceden a la escasa recuperación de linfocitos T CD4 y profundizar en potenciales factores asociados a dicha escasa reconstitución inmunológica.
Aunque ya desde el principio de la epidemia de SIDA se conocía que el VIH
provoca una inversión del ratio de linfocitos T CD4/CD8 (ratio CD4/CD8), no ha sido hasta hace poco cuando la inversión de dicho parámetro se ha asociado a un riesgo aumentado a experimentar ENOS y a muerte. Sin embargo, se desconocía si el ratio CD4/CD8 antes del inicio del TARc se asocia con la posterior recuperación de CD4 bajo el TARc. Esta cuestión ha sido abordada en el segundo artículo: “A lower baseline CD4/CD8 T-cell ratio is independently associated with immunodiscordant response to antiretroviral therapy in HIV-infected subjects”. Este estudio nos permitió asociar la escasa recuperación de CD4 con bajos niveles en el ratio CD4/CD8 antes del inicio del TARc. Por otro lado, los mecanismos involucrados en la inversión del ratio CD4/CD8 observada en el escenario VIH no están completamente dilucidados, y ningún trabajo previo había examinado el posible papel del timo, órgano responsable de la producción de novo de linfocitos CD4 y CD8 que se encuentra profundamente afectado en la infección por VIH, en dicho fenómeno. Esta cuestión fue abordada en el tercer artículo de la presente tesis: “Thymic funtion impacts the peripheral CD4/CD8 ratio of HIVinfected
subjects”. Este estudio nos permitió dilucidar una asociación entre el ratio
CD4/CD8 de sangre periférica y la función tímica antes del inicio del tratamiento antirretroviral, además de un papel del timo en la posterior normalización del ratio CD4/CD8 durante el TARc. La producción de nuevos linfocitos T por parte del timo tiene un papel fundamental en la recuperación de CD4. Sin embargo, hasta la fecha, no se había valorado el posible papel de los mecanismos de compensación periféricos o proliferación homeostática (PH) en dicho proceso. En primer lugar quisimos conocer más acerca del proceso de PH de linfocitos T CD4 humanos, ya que la mayoría de
información existente había sido generada en modelos animales. Para ello desarrollamos un sistema de cultivos in vitro que nos permitió estudiar distintos tipos de PH e identificar marcadores celulares asociados a dicho fenómeno. Los resultados generados del estudio de la PH en linfocitos humanos, y la caracterización del modelo, fueron abordados en el quinto artículo de la presente tesis doctoral: “An in vitro system of autologous lymphocytes culture that allows studying the homeostatic proliferation
mechanims of human naïve CD4 T-cells”. A continuación, para determinar la
contribución de la PH sobre la escasa recuperación de linfocitos T CD4 de ER, determinamos la expresión de diversos marcadores celulares asociados al proceso de PH en ER antes del inicio del TARc y tras 24 meses de TARc supresor. Estos resultados fueron englobados en el quinto artículo de la presente tesis doctoral: “A high homeostatic proliferation precedes a poor CD4 T-cell recovery in response to HIV antiretroviral therapy”.
2018-04-05T07:10:04Z
2018-04-05T07:10:04Z
2018-03-19
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Rosado Sánchez, I. (2018). Estudio de las alteraciones inmunovirológicas de pacientes VIH "escasos repobladores": potenciales predictores y mecanismos implicados.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/71793
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2014-11-27T12:08:50Z
urn:hdl:11441/15942
Regulación IgE-Mediada de la Ciclooxigenasa-2 y la Interleuquina-8 en leucocitos humanos
Monteseirín Mateo, Francisco Javier
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Medicina
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Leucocitos
Sistema inmunitario
2014-11-27T12:08:50Z
2014-11-27T12:08:50Z
2005
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Chacón Fernández, P.J. (2005). Regulación IgE-Mediada de la Ciclooxigenasa-2 y la Interleuquina-8 en leucocitos humanos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/15942
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/15942
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2018-11-21T12:21:15Z
urn:hdl:11441/80440
Implantación de islotes de Langerhans en el hígado de la rata
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
OBJETO
Desde que Banting y Best en 1921 descubrieron la insulina se dio un gran paso en el tratamiento de la diabetes por deficiencia insulinica.
Dado que la insulina es una proteína, por vía oral se degrada por los enzimas proteolíticos, perdiendo totalmente su actividad, siendo necesario que el tratamiento de los diabéticos (dependientes de la insulina) sea la inyección diaria de la hormona. Las sulfonil-ureas no solucionan el problema, ya que estas hormonas movilizan únicamente la insulina endógena.
El páncreas endocrino segrega la insulina necesaria estimulado por la concentración de glucosa circulante. En el tratamiento actual con insulinas administradas por vía parenteral, la absorción de la misma es constante con independencia de la concentración de glucosa. Es por lo tanto una terapéutica, a todas luces imperfecta que se aleja de la fisiología normal de la célula beta de los islotes de Langerhans.
¿Cómo solucionar el problema?. Dos son las soluciones hipotéticas que se plantean actualmente.
a) Trasplantes del páncreas o de los islotes de Langerhans.
b) Páncreas artificial (descripción en la revisión histórica de este trabajo).
Nosotros hemos planteado el problema del trasplante con la posibilidad de poder implantar islotes aislados en otro órgano, por ejemplo el hígado.
CONCLUSIONES
1. La incubación a 37,5º C de un homogenizado de páncreas en presencia de colagensa hace posible el aislamiento de islotes de Langerhans.
2. Los islotes de Langerhans aislados con colagenasa son funcionantes, dado que su incubación y perifusión “in vitro” responden con elevados niveles de secreción insulínica frente a una glucosa elevada en el medio.
3. Los islotes aislados pueden permanecer intactos y con todas sus propiedades fisiológicas durante una semana a 4º C en medio glucosado con penicilina.
4. La extirpación quirúrgica del páncreas provoca la aparición de una diabetes como modelo experimental de la segunda parte de este trabajo.
5. Con el fin de conseguir una localización particular de los islotes de Langerhans en el hígado, realizamos hepatectomias parciales previas a la implantación de islotes por vía portal. La hepatectomía parcial no modifica la glucemia.
6. La introducción en vena porta de una solución de suero fisiológico, conteniendo entre 500 y 800 islotes consiguió la implantación de estos en el hígado.
7. Doce días después de la implantación de islotes por vía portal se realizan cortes sistemáticos del hígado, demostrándose la presencia de los mismos en el parénquima hepático.
8. La sobrecarga intravenosa de glucosa realizada en nuestro modelo experimental (ratas homozigoticas pancreatectomizadas y con islotes implantados en el hígado 12 días antes) provocó la secreción de insulina a unos niveles algo inferiores a los normales, pero muy superiores a los de las ratas pancreatectomizadas simplemente. (La diferencia es estadísticamente muy significativa).
2018-11-21T12:21:15Z
2018-11-21T12:21:15Z
1976-09-01
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Bataller Ferrándiz, M. (1976). Implantación de islotes de Langerhans en el hígado de la rata. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80440
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-12-10T07:04:52Z
urn:hdl:11441/31665
Producción de ROS y mecanismos antioxidantes bajo condiciones adversas en neutrófilos humanos: estado hipertensivo y estrés metabólico
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Sistema inmunitario
Neutrófilos
La respuesta inmune es dividida en inmunidad innata e inmunidad adquirida. Una particularidad del sistema inmune, respecto del resto de órganos y sistemas anatómico-funcionales, es que no está estructurado en forma de tejidos fijos y bien localizados, sino que se caracteriza por la continua movilidad de los elementos celulares que los integran, y por los distintos órganos del sistema linfático. (Marrack y Kappler, 1994) (Scott y Kaufmann, 1991) (Stout, 1993). Este punto es crucial en la respuesta inmune innata, ya que es la capacidad de las células fagocíticas de trasladarse hasta el lugar donde se han producido el foco de infección. Una de las células del sistema inmune con capacidad fagocítica y de migración es el neutrófilo. Ante la entrada de un patógeno, la primera respuesta que se desencadena en el individuo es la movilización y activación de la respuesta inmune innata, cuya función es la eliminación de forma masiva e inespecífica del patógeno. Esta respuesta no requiere sensibilización previa y es mediada por las células fagocíticas. Sin embargo, la respuesta adquirida es una respuesta específica y se desarrolla sobre la sustancia que indujo su iniciación, esta respuesta es mediada por los linfocitos y los elementos solubles liberados por ellos como son los anticuerpos y las linfocinas. Pero a pesar de la gran especialización y alta eficacia en la acción de la respuesta inmune adquirida, no deja de ser sorprendente que en un individuo sano, la inmunidad innata es la principal vía de eliminación de aquellos organismos que logran entrar en el individuo.
- Objetivos Primeros:
La HO-1 es una enzima que realiza importantes funciones anti-inflamatorias, antioxidantes, citoprotectoras y al igual que el NOS tiene unas importantes y similares propiedades anti-hipertensivas. Sin embargo, la relación entre ambos y sus niveles de expresión en condiciones patológicas no está aclarado totalmente. Incluso, en la literatura aparecen observaciones contradictorias. Así pues:
Los objetivos del presente estudio fueron los siguientes:
1) Analizar la capacidad de expresión y actividad de la HO-1 en los neutrófilos humanos.
2) Analizar las vías de señalización intracelulares implicadas en la expresión de la HO-1 en neutrófilos humanos.
3) Analizar la actividad de la HO-1 en neutrófilos de pacientes hipertensos o en células de sujetos normotensos tratados con Ang II. Así como las vías de señalización implicadas en ambas situaciones.
4) Analizar la expresión de la NOS2 en condiciones de hipertensión o bajo tratamientos con Ang II en los neutrófilos de sujetos normotensos.
5) Relación entre la expresión NOS2 y la expresión de la HO-1 en los neutrófilos humanos en condiciones normotensivas e hipertensivas.
2015-12-10T07:04:52Z
2015-12-10T07:04:52Z
2008-05-09
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Alba Jiménez, G. (2008). Producción de ROS y mecanismos antioxidantes bajo condiciones adversas en neutrófilos humanos: estado hipertensivo y estrés metabólico. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31665
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31665
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2020-01-29T18:54:05Z
urn:hdl:11441/92511
Frucosa 2,6-Difosfato y glucolisis en macrófagos peritoneales de rata. Modulación por diversos factores
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-01-29T18:54:05Z
2020-01-29T18:54:05Z
1992-01-22
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Bustos Guillén, R.d.l.V. (1992). Frucosa 2,6-Difosfato y glucolisis en macrófagos peritoneales de rata. Modulación por diversos factores. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/92511
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2016-09-07T10:46:10Z
urn:hdl:11441/44776
Papel del timo en la repoblación de linfocitos CD4+ en adultos infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana bajo terapia antirretroviral de alta potencia. Influencia de la interleuquina-7 y el fenotipo vírico
Leal Noval, Manuel
Rubio Calvo, Amalia Macarena
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Desde la introducción del HAART se ha especulado acerca del origen de los TCD4+, aceptándose hoy en día que junto con los fenómenos de redistribución y proliferación de los linfocitos preexistentes, es la nueva generación por parte del timo uno de los mecanismos implicados en estos aumentos. Actualmente existen diferentes técnicas para medir la función tímica por métodos indirectos, siendo la cuantificación de células con fenotipo virgen, la cuantificación de células portadoras de TRECs y las medidas radiológicas del timo, las determinaciones más aceptadas. Sería interesante evaluar como se comporta el timo antes y tras la instauración del HAART, utilizando estas tres herramientas en conjunto. De este modo, podríamos obtener una aproximación de la función tímica tras el tratamiento, así como una idea acerca de en qué medida el timo puede contribuir en los cambios de los TCD4+ tras el HAART. En este sentido nos planteamos conocer si los marcadores de función tímica estaban asociados con la rapidez y/o con la magnitud con la que se recuperan TCD4+ tras el HAART, o por el contrario otros parámetros inmuno-virológicos guardan más estrecha relación con esta recuperación inmune. Esta información sería de gran interés ya que podríamos conocer que variables medidas antes del inicio del tratamiento predicen la rapidez y la magnitud de la recuperación de TCD4+. Esta recuperación de TCD4+ tras HAART puede terne distinta naturaleza cualitativa y/o cuantitativa en función del origen de estos linfocitos. Sería interesante conocer si individuos con una función tímica mayor antes del tratamiento repueblan de forma distinta a como lo hacen individuos con una función tímica menor, tratando así de explicar la heterogeneidad de la recuperación de las subpoblaciones virgen y memoria tras el inicio del tratamiento.
Por otro lado, existen una serie de factores inmunológicos y virológicos que pueden actuar potenciado o inhibiendo la función tímica. Desde el punto de vista virológico, cepas con tropismo X4 han sido descritas como capaces de infectar timocitos y por tanto como potencialmente inhibidoras de la timopovesis. Por ello sería interesante conocer el tropismo de aislados virales de adultos bajo HAART y relacionarlo con los marcadores de función tímica. Desde el punto de vista inmunológico, se ha descrito que la IL-7 está implicada en la homeostasis de células T y se ha comprobado en modelos animales como tras situaciones de depleción de células T, esta citocina favorece la generación de linfocitos por vías tanto timo-dependientes como timo-independientes. Sería importante estudiar esta citocina en el modelo humano en el contexto VIH y en relación con la función tímica.
OBJETIVOS:
1.- Analizar la evolución de los parámetros de función tímica tras la instauración del HAART y su relación con los cambios en los TCD4+.
2.- Estudiar el papel del timo en la rapidez y magnitud de la repoblación de TCD4+ en adultos bajo HAART.
3.- Determinar la cinética de repoblación de subpoblaciones virgen y memoria en adultos bajo HAART en relación con la función tímica.
4.- Analizar el papel de la IL-7 y del fenotipo vírico sobre la timopoyesis en adultos bajo HAART.
2016-09-07T10:46:10Z
2016-09-07T10:46:10Z
2004-06-30
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Ruiz-Mateos Carmona, E. (2004). Papel del timo en la repoblación de linfocitos CD4+ en adultos infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana bajo terapia antirretroviral de alta potencia. Influencia de la interleuquina-7 y el fenotipo vírico. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/44776
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/44776
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1430062023-02-27T11:24:58Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2023-02-27T11:24:58Z
urn:hdl:11441/143006
Valoración funcional de los efectos beneficiosos de biopéptidos de origen vegetal en la aterosclerosis y el síndrome metabólico
Carrillo Vico, Antonio
Cruz Chamorro, Iván
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
En la última década, los péptidos bioactivos derivados de proteínas vegetales han ganado la atención de la comunidad científica por sus numerosas propiedades funcionales (antioxidantes, inmunomoduladores, antihipertensivos, hipoglucemiantes, hipolipemiantes, etc.). Resultados previos han mostrado los efectos antioxidantes, antiinflamatorios e hipolipidémicos de un hidrolizado proteico procedente de la hidrólisis con Alcalasa de la semilla del L. angustifolius (abreviado como LPH), tanto en sistemas in vitro como en un ensayo clínico alimentario (Lupine-1). En base a estos resultados, el presente trabajo se ha centrado en la evaluación del efecto del LPH sobre la hipercolesterolemia, estrés oxidativo e inflamación asociados a la aterosclerosis y la enfermedad del hígado graso asociada a disfunción metabólica (MAFLD). Para ello, se realizó un estudio in vivo con el fin de evaluar el efecto de la administración de LPH en ratones ApoE-/-, considerados como modelo murino de aterosclerosis y síndrome metabólico. El tratamiento con LPH mejoró el perfil lipídico y el status antioxidante y antiinflamatorio aórtico, plasmático y hepático. Además, el hidrolizado del lupino redujo los niveles de marcadores claves en el inicio y desarrollo de la aterosclerosis y MAFLD. Finalmente, la evaluación del mecanismo molecular de acción del LPH que subyace a sus efectos hipocolesterolémicos mostró que el LPH es capaz de modular la vía de señalización de la biosíntesis y captación hepática de colesterol. La presente tesis doctoral apoya el potencial uso del LPH como ingrediente de futuros alimentos funcionales que podrían constituir una mejora en la práctica clínica a medio plazo.
2023-02-27T11:24:58Z
2023-02-27T11:24:58Z
2022-12-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Santos Sánchez, G. (2022). Valoración funcional de los efectos beneficiosos de biopéptidos de origen vegetal en la aterosclerosis y el síndrome metabólico. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/143006
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-07-13T07:21:23Z
urn:hdl:11441/26779
Modulación de lxrα por polifenoles y ácido oleico mediada por proteínas quinasas en células fagocíticas humanas
Sobrino Beneyto, Francisco
Santa-María Pérez, Consuelo
Alba Jiménez, Gonzalo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
cultivo celular
Los receptores nucleares LXR (Liver X receptors) están implicados en la regulación de numerosos procesos fisiológicos, fundamentalmente la homeostasis del colesterol y ácidos grasos, y la expresión de genes implicados en las respuesta inflamatoria.
Las enzimas quinasas son proteínas que también están comprometidas con el metabolismo energético (Ej.: AMPK) y la regulación de la respuesta inflamatoria (Ej.: p38 y ERK1/2), entre otras muchas funciones. La activación de las proteínas quinasas en células fagocíticas humanas mediante curcumina, naringenina y ácido oleico, indujo e incrementó (en el caso de los compuestos los fenólicos), la activación del receptor nuclear LXR¿. Los niveles de ARNm de LXR¿ aumentaron en células fagocíticas estimuladas por el TO901317, la curcumina, la naringenina y el ácido oleico; al igual que los niveles de expresión de ARNm de sus genes diana ABCA1, G1 y SREBP1c. Así mismo, se observó un aumento proporcional en los niveles de expresión proteica de LXR¿ en las células THP-1 diferencias con PMA. Estos cambios a nivel molecular modificaron distintas funciones celulares como son la migración celular, el transporte reverso del colesterol y el estado redox de la célula. La estimulación de LXR¿ por estos compuestos a través de las proteínas quinasas se inhibió la producción de ROS en las células fagocíticas humanas tanto en sus niveles basales como en los producidos por la acción del H2O2. Del mismo modo, disminuyó la migración celular frente a estímulos quimiotácticos (fMLP) y promovió el transporte reverso del colesterol. Estas observaciones muestran la relación existente entre el receptor nuclear LXR¿ y proteínas con actividad quinasa como son la AMPK y las proteínas MAPK p38 y ERK1/2.
2015-07-13T07:21:23Z
2015-07-13T07:21:23Z
2015-05-29
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
http://hdl.handle.net/11441/26779
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/26779
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2020-02-13T18:54:56Z
urn:hdl:11441/93148
Estudio de la capacidad antioxidante del suero: papel de la melatonina
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-02-13T18:54:56Z
2020-02-13T18:54:56Z
1998
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Benot López, S. (1998). Estudio de la capacidad antioxidante del suero: papel de la melatonina. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/93148
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-17T08:52:45Z
urn:hdl:11441/73097
Expresión del gen FMR1 y su represión por Óxido Nítrico vía metilación del promotor
Pintado Sanjuán, Elizabeth
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2018-04-17T08:52:45Z
2018-04-17T08:52:45Z
2000
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Hmadcha Afif, Abdelkrim (2000). Expresión del gen FMR1 y su represión por Óxido Nítrico vía metilación del promotor (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/73097
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-11T13:17:06Z
urn:hdl:11441/72445
Diagnóstico y tratamiento de los derrames pleurales paraneumónicos y empiemas según la presión parcial de dióxido de carbono de líquido pleural
León Justel, Antonio
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Delgado Pecellín, Carmen
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Pulmones
El derrame pleural se define como la acumulación de líquido en el espacio pleural, delimitado por la pleura visceral y parietal, debido a la afectación de enfermedades pleurales o sistémicas que alteran la producción y/o reabsorción de líquido pleural. E
2018-04-11T13:17:06Z
2018-04-11T13:17:06Z
2009
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Santotoribio Camacho, José Diego (2009). Diagnóstico y tratamiento de los derrames pleurales paraneumónicos y empiemas según la presión parcial de dióxido de carbono de líquido pleural (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
9788469234051
https://hdl.handle.net/11441/72445
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-04T15:22:15Z
urn:hdl:11441/71773
Papel de la proteína S100B en suero y en orina como marcador pronóstico de mortalidad tras el traumatismo craneoencefálico grave
Egea Guerrero, Juan José
Carrillo Vico, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Neurología
Análisis clínicos
La proteína S100B es una proteína de unión a calcio, liberada al torrente circulatorio por los astrocitos como consecuencia de una lesión cerebral [1]. Es una proteína de origen neuronal que presenta un comportamiento bimodal: concentraciones nanomolares estimulan el crecimiento y supervivencia neuronal, mientras que concentraciones micromolares pueden inducir la apoptosis y liberación de citoquinas proinflamatorias [2, 3]. La determinación durante la fase aguda del traumatismo cráneo encefálico (TCE) se ha visto correlacionada, no sólo con la detección de lesión intracraneal en los pacientes con buen grado neurológico, sino como marcador pronóstico a largo plazo en los pacientes tras sufrir un TCE grave [4, 5, 6]. Existen pocas evidencias sobre la utilidad de este marcador como herramienta pronóstica a corto plazo, que nos permita obtener una información precoz de la situación del paciente durante la fase aguda del TCE, su posible evolución a una situación de muerte encefálica (ME) así como pronóstico de muerte a corto/medio plazo.
2018-04-04T15:22:15Z
2018-04-04T15:22:15Z
2013-07-12
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Rodríguez Rodríguez, A. (2013). Papel de la proteína S100B en suero y en orina como marcador pronóstico de mortalidad tras el traumatismo craneoencefálico grave. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/71773
20530840
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-06-12T13:44:37Z
urn:hdl:11441/97745
Receptores de melatonina en el sistema inmune: caracterización y transducción de señal
Calvo Gutiérrez, Juan Ramón
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Son muchos los trabajos que demuestran una clara relación entre la melatonina y el sistema inmune. En estados de inmunosupresión o de baja inmunoestimulación, la melatonina puede estimular la respuesta inmune, aumentando la producción de anticuerpos y la actividad citolítica a las células inmunes, como por ejemplo la capacidad citolítica de las células Natural Killer(NK) y la citotoxicidad celular dependientes de anticuerpos. Sin embargo, es poca la información existente acerca de los mecanismos de transdrución de señal para melatonina en sistema inmune.
En esta tesis doctoral se ha realizado la caracterización de receptores para melatonina en macrófagos peritoneales de ratón, así como el estudio de los mecanismos de transducción de señal de los receptores de membrana para melatonina en linfocitos humanos y macrófagos peritoneales de ratón.
Los linfocitos humanos presentan receptores de membrana de alta afinidad(Kd=0,45 nM) por la melatonina. Estos receptores que están asociados a proteínas G y acoplados a mecanismos de transducción de señal por segundos mensajeros, inhibiendo la producción de AMPc(efecto mediado por proteínas Gi) y estimulando la producción de DAG. (efecto mediado por proteínas Gi/o).
La unión de melatonina a los macrófagos peritoniales de ratón cumple todos los criterios de unión de un ligando a su receptor: fue dependiente de tiempo, temperatura y concentración celular, estable, reversible, saturable y específica. Los macrófagos presentan dos sitios de unión para melatonina, uno con alta afinidad(Kd=0,58-0,71 nM) y baja capacidad de unión, y otro con baja afinidad(Kd=2,2 uM) y alta capacidad de unión. Los macrófagos presentan receptores de membrana acoplados funcionalmente al sistema efector adenilil ciclasa, inhibiendo la producción de AMP cíclico a través de proteínas G, posiblemente una proteína G i.
2020-06-12T13:44:37Z
2020-06-12T13:44:37Z
1999-05-20
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/97745
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-12-02T13:30:43Z
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Melatonina exógena y endógena en el sistema inmune: Efecto biológicos y mecanismos de acción
Guerrero Martínez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Biología molecular
Inmunología
La melatonina es un compuesto que se describió por primera vez en 1958 como una hormona sintetizada por la glándula pineal.
Actualmente, se puede considerar como un compuesto pleiotrópico con importantes propiedades cronobióticos, antioxidantes, oncostáticas e inmunomodulares. Ejerce sus funciones a través de diversos mecanismos de acción, entre ellos, por medio de la unión a receptores de membrana y nucleares. En los últimos años, se ha puesto de manifiesto la presencia de este compuesto en un gran número de órganos, tejidos y células, lo cual ha puesto de manifiesto la posibilidad de fuentes extrapineales de melatonina, contribuyendo a redefinir la línea clásica de pensamiento acerca de la melatonina como una hormona exclusivamente pineal.
En función de estos antecedentes, los objetivos planteados fueron los siguientes:
1,- Localizar e identificar sitios de unión para melatonina en células de timo y bazo de ratón.
2,- Detectar la expresión génica de los receptores para melatonina MT1, MT2 y RORalfa, así como la expresión de las proteínas MT1 y RORalfa1 en timo y bazo de ratón.
3,- Analizar el efecto de la melatonina a través de sus receptores de membrana sobre la inhibición de la producción de IL-2 inducida por la PGE2, en cultivos primarios de PBMCs humanas.
4,- Identificar síntesis activa de melatonina en cultivos primarios de PBMCs humanas.
5,- Analizar los efectos y los mecanismos de acción de la melatonina endógena sobre el sistema IL-2/IL-2R.
Las conclusiones a las que llega el estudio tras evaluar los resultados fueron:
1,- Existen sitios de unión para melatonina en membrana plasmática y núcleo de células de timo y bazo de ratón.
2,- Los genes que codifican los receptores de melatonina MT1 y RORalfa se expresan en timo y bazo de ratón, mientras que la expresión de MT2 sólo se detecta en timo.
3,- Tanto el timo como el bazo de ratón presentna las proteínas M
2015-12-02T13:30:43Z
2015-12-02T13:30:43Z
2005-12-22
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Carrillo Vico, A. (2005). Melatonina exógena y endógena en el sistema inmune: Efecto biológicos y mecanismos de acción. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31421
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31421
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-07-10T07:24:56Z
urn:hdl:11441/77058
Prevalencia del déficit de vitamina D y significado pronóstico en pacientes ancianos ingresados por síndrome coronario agudo.
Recio Mayoral, Alejandro
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Introducción: La deficiencia de vitamina D (25-OH-VITD) se ha relacionado con la génesis de la ateroesclerosis coronaria así cómo con el desarrollo de eventos cardiovasculares. Sin embargo, los estudios que reflejan esta evidencia no se han realizado en población anciana, por lo que se desconoce el impacto de los niveles de la misma en pacientes ancianos con síndrome coronario agudo (SCA). Nuestro objetivo es determinar la prevalencia del déficit de 25-OH-VITD en pacientes ancianos ingresados por SCA y evaluar el valor pronóstico en cuánto a morbimortalidad en estos pacientes.
Material y métodos: Registro prospectivo multicéntrico de pacientes 70 años ingresados por SCA, reclutados entre 2014 y 2016. Se obtuvieron muestras plasmáticas en las primeras 48 horas del ingreso hospitalario determinándose 25-OH-VITD. A priori, se establecieron los siguientes puntos de corte según los valores de determinación de vitamina D: “deficiencia severa” valores de 25-OH-VITD (DS) < 8 ng/ml ,“deficiencia” (D) 25-OH-VITD de 8 a 15 ng/ml y “No déficit” (ND) aquellos pacientes con valores >15 ng/ml. Durante el ingreso hospitalario se evaluó la mortalidad global, la incidencia de eventos isquémicos (reinfarto de miocardio e ictus) y el evento combinado de mortalidad, reinfarto e ictus. Así mismo, durante un periodo de seguimiento de un año se analizó la incidencia de mortalidad total y del evento combinado de muerte, reinfarto e ictus.
Resultados: De los 446 pacientes incluidos en el estudio, se obtuvieron determinaciones de 25-OH-VITD en 384 pacientes (151 mujeres (39.2%), mediana de edad de 81 años [77-85 años]; rango 70-103 años). Globalmente la mediana de 25-OH-VITD sérica fue 13,15 [9,10-20,40] ng/ml, presentando el 58.85% de los pacientes niveles séricos de vitamina D inferiores a 15ng/ml, con un 20.05% de pacientes con cifras <8 ng/ml. El déficit severo de 25-OH-VITD al ingreso del SCA se asoció con una mayor tasa de eventos intrahospitalarios (DS 15,2%, D 9,4%, ND 3,2%; p=0,004) así cómo a una mayor mortalidad tanto intrahospitalaria (DS 12,7%, D 8,1%, ND 1,9%; p=0,003) cómo al año (DS 25,4%, D 13,9%, ND 11%; p=0,02). Tras ajustar por diferentes variables potencialmente confusoras (FEVI, niveles de creatinina, fragilidad, realización de cateterismo y clasificación Killip) el nivel de 25-OH-VITD se mantuvo cómo predictor independiente de mortalidad durante el año de seguimiento (HR 0.95 [IC95%] 0,92-0,99; p=0,003;). En cuánto al evento combinado, el déficit severo de vitamina D se relacionó con una mayor aparición de muerte, reinfarto e ictus intrahospitalarios y durante el año de seguimiento (DS 15,2%, D 9,4%, ND 3,2%; p=0,004 y DS 46,8%, D 30,9%, ND 20%; p=<0,001, respectivamente)
Conclusiones: El déficit de vitamina D es un hallazgo frecuente en la población anciana ingresada por SCA. La hipovitaminosis D se asocia de forma significativa con la mortalidad global y la aparición de eventos cardiovasculares mayores, tanto en el ingreso hospitalario cómo en el año de seguimiento.
2018-07-10T07:24:56Z
2018-07-10T07:24:56Z
2018-06-19
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
García Guerrero, A. (2018). Prevalencia del déficit de vitamina D y significado pronóstico en pacientes ancianos ingresados por síndrome coronario agudo.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/77058
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-17T08:56:14Z
urn:hdl:11441/73138
Efecto del etanol sobre los receptores del peptido intestinal vasoactivo y sobre el sistema adenil ciclasa en enterocitos de rata
Goberna Ortiz, Raimundo
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2018-04-17T08:56:14Z
2018-04-17T08:56:14Z
1986
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Jiménez Carrasco, Juan (1986). Efecto del etanol sobre los receptores del peptido intestinal vasoactivo y sobre el sistema adenil ciclasa en enterocitos de rata (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/73138
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-03-06T07:26:32Z
urn:hdl:11441/83835
Factores inmunológicos asociados a la aparición de eventos no sida y al control espontáneo de la infección por el VIH.
Leal Noval, Manuel
Ruiz-Mateos Carmona, Ezequiel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La presente Tesis Doctoral se ha centrado en estudiar uno de los principales problemas clínicos de los pacientes infectados por VIH bajo tratamiento antirretroviral combinado (TARc), que es la prevalencia y morbi-mortalidad de procesos no definitorios de SIDA, entre los que se incluyen las enfermedades cardiovasculares. En un diseño longitudinal nosotros hemos observados que, elevados niveles de linfocitos T-CD8+ que expresan el marcador CCR5 junto a altos niveles de monocitos que expresan diferentes marcadores de activación, preceden a la aparición de eventos cardiovasculares en pacientes infectados por VIH bajo TARc supresor (Tarancon-Diez L et al. Throm Haemost. 2017). En este mismo escenario también hemos estudiado la asociación de un polimorfismo en el receptor 4 tipo-toll (TLR4) con el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Encontramos que la variante genética TLR4 Asp299Gly se asocia con eventos cardiovasculares, así como con un perfil proinflamatorio de los monocitos (Tarancon-Diez L et al. AIDS 2018). Además de la importancia del polimorfismo Asp299Gly, en este trabajo encontramos una asociación entre la coinfección por VHC e infecciones bacterianas con la aparición de enfermedades cardiovasculares. Estas observaciones fueron posteriormente corroboradas en una cohorte mayor, confirmando el papel de la coinfección por VHC junto con el efecto acumulativo de otras infecciones en el desarrollo de estas patologías (Genebat M, Tarancon-Diez L et al. Manuscrito en preparación). En relación con estos resultados, también hemos encontrado una asociación de la deleción delta32 en el gen CCR5 (CCR5Δ32) en heterocigosis, con una mejor progresión clínica en pacientes infectados por VIH durante la era de Tratamientos Antirretrovirales de Gran Actividad (TARGA) (Ruiz-Mateos E, Tarancon-Diez L et al. Antiviral Res. 2017). El escenario descrito hasta ahora se refiere a lo que ocurre en la mayoría de los pacientes. Sin embargo, existe una pequeña proporción (<1%) que tienen la peculiaridad de mantener espontáneamente la carga viral indetectable durante largos periodos de
tiempo en ausencia de tratamiento antirretroviral; son los “controladores de élite” (CE). La segunda parte de la presente Tesis Doctoral se ha centrado en el fenómeno de control espontáneo del VIH. Hemos identificado diferencias inmunológicas y virológicas entre CE que a lo largo del tiempo, pierden el control virológico espontáneo del VIH y CE que mantienen persistentemente el control virológico; nuestros hallazgos permiten una definición fenotípica más exhaustiva del controlador, que puede constituir un modelo de “cura funcional”, con potencial impacto en el diseño de vacunas y estrategias inmunoterapéuticas. Adicionalmente en estos sujetos observamos un perfil
proteómico y metabólico característico, bajo nivel de marcadores de inflamación, baja diversidad viral y alta polifuncionalidad anti-VIH específica (Rodriguez-Gallego E, Tarancon-Diez L et al. J Infect Dis. 2018, Tarancon-Diez L et al. Manuscrito en preparación).
2019-03-06T07:26:32Z
2019-03-06T07:26:32Z
2019-02-26
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Tarancon Diez, L. (2019). Factores inmunológicos asociados a la aparición de eventos no sida y al control espontáneo de la infección por el VIH.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/83835
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-12-10T07:20:46Z
urn:hdl:11441/31670
Acción y mecanismo de acción de la leptina humana en la placenta
Goberna Ortiz, Raimundo
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Leptina
Placenta
Obstetricia
La Leptina no es sólo una hormona del tejido adiposo que regula la ingesta y el gasto energético a nivel central, sino que tiene múltiples efectos en tejidos periféricos. Las publicaciones más recientes apuntan a las acciones de la hormona en el sistema reproductivo. Uno de los órganos más importante de este sistema es la placenta. Entonces, para estudiar el papel trófico de la leptina en la placenta nos propusiomos como objetivos: Objetivo 1. Caracterizar el posible efecto proliferativo de la leptina sobre células placentarias. Objetivo 2. Caracterizar el posible efecto antiapoptótico de la leptina sobre células placentarias. Objetivo 3. Caracterizar las rutas de señalización estimulada por la leptina. Objetivo 4. Determinar las rutas de señalización que median el efecto antiapoptótico de la leptina. Las conclusiones obtenidas de los resultados de esta Tesis Doctoral son las siguientes: 1. La leptina estimula la proliferación de células trofoblásticas JEG-3. 2. La leptina previene la muerte celular programada (apoptosis), inducia por deprivación de suero, en células trofoblásticas JEG-3. 3. La leptina activa en células trofoblásticas JEG-3 las vías de señalización JAK/STAT, MAPK y PI3K, implicadas en el control del crecimiento y proliferación celular. 4. El efecto antiapoptótico de laleptina está mediado fundamentalmente por la vía MAPK. En resumen, la leptina tendría pues un efecto trófico sobre las células trofoblásticas mediado por la activación de la isoforma larga del receptor de leptina por medio de la activación de la vía MAPK
2015-12-10T07:20:46Z
2015-12-10T07:20:46Z
2007-06-28
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Pérez Pérez, A. (2007). Acción y mecanismo de acción de la leptina humana en la placenta. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31670
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31670
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2017-10-26T15:50:51Z
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Estudio de variantes genéticas y análisis epigenético de loci asociados a esclerosis múltiple
Lucas Lucas, Miguel
Matesanz del Barrio, Fuencisla
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Biología molecular
La Esclerosis Múltiple es una enfermedad autoinmune y neurodegenerativa de patogenia compleja, en la que en su mecanismo de susceptibilidad se barajan fenómenos multifactoriales genéticos y ambientales. El haplotipo DRB5*0101-DRB1*1501-DQA1*0102-DQB1*0602 del antígeno leucocitario humano (HLA) presenta la susceptibilidad genética más fuerte. Gracias a los estudios de GWAS (Genome-Wide Association Studies), se han determinado loci asociados a la susceptibilidad de padecer Esclerosis Múltiple fuera de la región del HLA (en su mayor parte, en estas regiones se codifican genes relacionados con el sistema inmune). No obstante, el conjunto de factores genéticos asociados hasta la fecha no explican claramente el componente hereditario de la enfermedad, es por ello que están emergiendo trabajos de investigación enfocados a otro tipo de mecanismos, como los epigenéticos. Por otro lado, el componente inmunológico tiene un peso importante en el desarrollo de la Esclerosis Múltiple. El mecanismo de acción del sistema inmune no es sencillo, ya que convergen los componentes innato, adaptativo y las propias células inmunológicas del Sistema Nervioso Central. Basándonos en los antecedentes de enfermedad compleja tanto en la aparición, desarrollo y respuesta a tratamientos, y en la bibliografía descrita hasta la fecha, se consideró de gran interés estudiar en profundidad ciertos aspectos genéticos e inmunológicos de la Esclerosis Múltiple. Es por ello que el objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido el de estudiar las bases genéticas de los procesos inmunológicos que se dan a lo largo del desarrollo de la Esclerosis Múltiple. Para ello hemos dividido el trabajo en 4 bloques: 1. El estudio del haplotipo HLA en pacientes de Esclerosis Múltiple del Hospital Universitario Virgen Macarena de Sevilla, para determinar si nuestra población de estudio concuerda con otras poblaciones estudiadas a nivel mundial. Comprobando que los genotipos referentes al sistema HLA en nuestra cohorte son muy similares a los descritos, confirmando que el haplotipo HLA DRB1*1501-DQB1*0602 es el componente genético mejor asociado a la susceptibilidad de padecer Esclerosis Múltiple. 2. Estudio de asociación de variantes del gen KCNJ10 con la susceptibilidad a padecer Esclerosis Múltiple, con el objeto de explorar el posible origen genético de la aparición de autoanticuerpos anti-KIR4.1 (la proteína que codifica) en la enfermedad. Este hallazgo cuenta actualmente con cierta discrepancia científica debido a que existe disparidad de resultados. Encontrando que el único polimorfismo detectado en la zona codificante del gen KCNJ10, rs1130183, no se asocia con la susceptibilidad a padecer Esclerosis Múltiple, con lo que la aparición de autoanticuerpos no parece estar relacionado con la alteración de secuencia de la proteína. 3. Otros mecanismos asociados al desarrollo de la Esclerosis Múltiple. Es el caso del mecanismo epigenético de acetilación/desacetilación de histonas, que hemos considerando necesario estudiar por ser un componente clave en otras patologías. Para ello, hemos estudiado el efecto de dos potentes inhibidores de desacetilasas de histonas, el ácido valproico y el fenilbutirato, en la regulación de ciertos genes inmunológicos asociados a Esclerosis Múltiple en estudios previos de GWAS. Los resultados obtenidos proponen al ácido valproico como un componente que in vitro activa la expresión de genes inmunológicos bajo el ambiente inflamatorio en el que se encuentran las células mononucleares de pacientes con Esclerosis Múltiple, no obstante, los mecanismos bajo los que actúa no están clarificados. 4. Análisis de variantes del locus donde se codifican los genes de la cadena pesada de la inmunoglobulina (IGHC) respecto a la presencia de bandas oligoclonales IgG, IgM y niveles de inmunoglobulinas intratecales en pacientes de Esclerosis Múltiple, con el objeto de explorar la posible implicación genética en estos importantes marcadores de la enfermedad y la progresión. Observando que la variante, rs11621145, se asocia con la susceptibilidad a padecer Esclerosis Múltiple. Además, encontramos que el alelo de riesgo para la enfermedad se asocia también con un menor índice de IgG y mayor de IgM intratecal, así como, una mayor presencia de bandas oligoclonales IgM en los pacientes de Esclerosis Múltiple. Estos resultados apuntan a que esta variante está alterando el cambio de isoformas de IgM a IgG. En este trabajo hemos explorado la implicación genética y epigenética en la patología de la Esclerosis Múltiple. Hemos corroborado el importante papel del HLA en la susceptibilidad genética a padecer la enfermedad y hemos descrito por primera vez la asociación del locus IGHC asociado a la enfermedad y los niveles de inmunoglobulinas.
2017-10-26T15:50:51Z
2017-10-26T15:50:51Z
2014-07-10
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Delgado García, M. (2014). Estudio de variantes genéticas y análisis epigenético de loci asociados a esclerosis múltiple. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/65475
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-01-14T08:20:15Z
urn:hdl:11441/81490
Composición de los infiltrados celulares en las biopsias de órganos trasplantados y su relación con el rechazo del injerto.
Aguilera García, Isabel
Núñez Roldán, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El trasplante de órganos constituye en la actualidad la opción terapéutica de elección para muchos pacientes con enfermedades terminales. Según datos de la Organización Nacional de Trasplantes (ONT), en el año 2013 se realizaron 2552 trasplantes renales y 1093 hepáticos en España, de ellos, 412 renales y 195 hepáticos se realizaron en Andalucía.
El sistema inmune tiene la finalidad de defender al organismo frente a la agresión de parásitos, bacterias y virus pero, en el contexto del trasplante, el alorreconocimiento viene determinado por la identificación de antígenos no propios en el tejido injertado. En la respuesta inmunitaria al aloinjerto contribuye principalmente el reconocimiento de antígenos mayores de histocompatibilidad, HLA (del inglés Human Leukocyte Antigen) y también antígenos menores de histocompatibilidad como es el caso de la enzima glutatión S-transferasa T1 (GSTT1). El sistema HLA forma parte del complejo de presentación de antígenos a la célula T, se caracteriza por ser poligénico y polimórfico y sus moléculas son de dos tipos: las de clase I y las de clase II. Por otro lado, la proteína citosólica GSTT1 está codificada por un solo gen y pertenece a una familia de enzimas relacionadas con la detoxificación de fármacos y eliminación de metabolitos de especies reactivas de oxígeno. En la población general caucásica, existe un 20% que presenta en homocigosis el alelo nulo del gen que codifica la GSTT1. Dado que existen enzimas con funciones similares, ésto no supone una desventaja evolutiva, salvo en la situación particular en la que un paciente con genotipo nulo para la GSTT1 reciba un órgano trasplantado de un donante positivo para esta misma proteína, donde puede desarrollarse un rechazo denominado rico en células plasmáticas o hepatitis inmune de novo. En el contexto de incompatibilidad en el complejo mayor y/o menor de histocompatibilidad, el paciente receptor de un órgano o tejido reconoce epítopos en el injerto recibido como extraños y es capaz de desencadenar una respuesta inmune de rechazo.
Atendiendo a una clasificación diagnóstica, los tipos de rechazo se pueden clasificar en: rechazo mediado por anticuerpos (AMR, del inglés antibody mediated rejection) o rechazo humoral, donde los anticuerpos específicos de donante se anclan al tejido donado y desencadenan la respuesta de ataque a la célula reconocida; y rechazo mediado por células T (TCMR, del inglés T cell mediated rejection) o rechazo celular, donde los linfocitos T efectores activados atacan específicamente al aloinjerto. Debemos tener en cuenta que se trata de una respuesta integrada donde realmente puede existir un
solapamiento de las respuestas de diferente naturaleza e intensidades.
Teniendo en cuenta que en la mayoría de ocasiones el seguimiento del trasplante conlleva la realización de una biopsia y que entre los diferentes criterios diagnósticos aceptados por la comunidad científica y recogidos por el grupo de trabajo de Banff para trasplante renal y hepático, algunos de los hallazgos genéricos que se incluyen son la presencia de infiltrados intersticiales, hemos realizado un estudio exhaustivo de la composición celular en los infiltrados inflamatorios. Como resultado del estudio de investigación que compone esta tesis doctoral, se han realizado diferentes publicaciones científicas en revistas de relevancia internacional e
indexadas en el Journal Citation Report, con significativos índices de impacto. Tres trabajos ya están publicados y uno más está preparación.
Este proyecto de investigación ha permitido identificar y cuantificar las células presentes en los infiltrados inflamatorios en diferentes cohortes de pacientes trasplantados de riñón, de hígado, así como en una paciente trasplantada de progenitores hematopoyéticos, a través de un novedoso abordaje mediante microscopía y análisis de imagen. Hemos identificado un perfil celular característico en el rechazo rico en células plasmáticas en una cohorte de pacientes con hepatitis inmune de novo tras un trasplante hepático. Además, hemos descrito por primera vez el caso de una paciente receptora de un
trasplante de progenitores hematopoyéticos que ha desarrollado un cuadro similar al del rechazo rico en células plasmáticas, con un perfil celular que coincide con el descrito en el trasplante de hígado. Todo ello permite abrir una nueva línea de trabajo sobre la relevancia y las bases patológicas del rechazo de órganos sólidos y de la enfermedad injerto contra huésped hepática.
2019-01-14T08:20:15Z
2019-01-14T08:20:15Z
2018-12-11
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Aguado Domínguez, E. (2018). Composición de los infiltrados celulares en las biopsias de órganos trasplantados y su relación con el rechazo del injerto.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/81490
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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2021-08-05T11:20:08Z
urn:hdl:11441/116627
Preclinical evaluation of the immunometabolic effects of octapeptide Gpetaflr
Montserrat de la Paz, Sergio
Millán-Linares, María del Carmen
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Existe un fuerte y creciente interés por las leguminosas como fuente de proteína que puede sustituir a la proteína animal, tanto por su menor coste de producción como por su menor impacto en la contaminación ambiental. Entre estas legumbres se encuentra el género Lupinus, que además de su interés nutricional se presenta como ingrediente en la industria nutracéutica. GPETAFLR es un octapéptido que fue aislado en un hidrolizado proteico de la legumbre Lupinus angustifolius L. Nuestra hipótesis es que GPETAFLR puede ser utilizado como un potencial co-tratamiento en enfermedades relacionadas con la inflamación sistémica, debido a su actividad antiinflamatoria. En esta tesis, se utilizan varios enfoques para evaluar los beneficios derivados de la ingesta de este péptido en un modelo de ratón obeso inducido por una dieta alta en grasas, en macrófagos derivados de monocitos primarios y en células microgliales BV-2, donde se estudió su actividad biológica sobre la neuroinflamación, el hígado graso no alcohólico y la plasticidad de los macrófagos.
2021-08-05T11:20:08Z
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2021
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Lemus Conejo, A. (2021). Preclinical evaluation of the immunometabolic effects of octapeptide Gpetaflr. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/116627
eng
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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oai:idus.us.es:11441/734312021-05-03T13:10:37Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2018-04-24T10:07:11Z
urn:hdl:11441/73431
Influencia de marcadores genéticos del hospedador en la historia natural de la infección por el virus de la Hepatitis C
González Escribano, María Francisca
García Lozano, José Raúl
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Enfermedades infecciosas
Inmunología
Genética
La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) constituye un serio problema de salud pública debido a su elevada prevalencia, ya que afecta a más de 180 millones de personas en el mundo. Tras la infección aguda, alrededor de un 25% de los pacientes eliminan el virus espontáneamente, proceso denominado aclaramiento viral espontáneo (AVE), pero en el resto de los pacientes la viremia persiste cronificándose la infección. Posteriormente, los pacientes evolucionan de manera muy diferente y presentan respuestas diversas al mismo tratamiento aún en el caso de condiciones homogéneas de infección. Por tanto, deben existir factores genéticos del hospedador que condicionen estas diferentes respuestas. Uno de los objetivos de numerosos grupos de investigación es determinar qué genes del hospedador pueden estar implicados en la historia natural de la infección por el VHC así como de replicar en distintas poblaciones los marcadores genéticos ya identificados para poder validarlos, y así podamos predecir el curso clínico de la infección y optimizar el uso de los diversos agentes terapéuticos disponibles.
El objetivo principal de este trabajo ha sido replicar en nuestra población la asociación descrita entre el aclaramiento viral espontáneo o la respuesta al tratamiento en la infección por el virus de hepatitis C y los genes IL28B, HAVCR1, TANK, TNFSF18 e IL18BP. Así, el diseño experimental utilizado consistió en un estudio caso-control analizando varios polimorfismos en estos genes candidatos. El primer gen seleccionado, la interleuquina 28B (IL28B), se incluyó en este estudio tras publicarse en tres GWAS una asociación entre el locus IL28B y la respuesta a la terapia combinada con IFN-¿ y ribavirina (RBV) en pacientes infectados por el VHC de genotipo 1 (G1) (Ge et al, 2009; Suppiah et al, 2009; Tanaka et al, 2009). Poco después de la identificación de IL28B, los otros 4 genes incluidos en este trabajo, fueron identificados, de entre 112 genes seleccionados por su función inmunológica, por su asociación con la resolución espontánea del VHC en un estudio con pacientes americanos de origen europeo o africano (Mosbruger et al, 2010). Para estudiar la influencia o relación de estos 5 genes con la infección por el VHC, se utilizó una cohorte de pacientes españoles monoinfectados con el VHC, de los que teníamos datos de respuesta al tratamiento y del grado de fibrosis, y otra de pacientes que aclararon el VHC de manera espontánea. Debido a la relación entre la respuesta al tratamiento y el genotipo viral que causa la infección, tuvimos en cuenta en nuestros análisis el genotipo viral de los pacientes, e incluimos una tercera cohorte de coinfectados con VIH (VHC/VIH) que aportaba un mayor número de pacientes infectados por genotipo viral no 1 (No-G1) para confirmar determinadas asociaciones encontradas.
En nuestro estudio en población española se confirmó que el genotipo rs12979860CC estaba asociado con una mejor respuesta al tratamiento, tanto en la cohorte de pacientes monoinfectados (60,2% vs. 39,8%) como en la cohorte de coinfectados (66,2% vs. 33,8%). Los pacientes con genotipo rs12979860CC respondían mejor al tratamiento independientemente de que el tratamiento recibido hubiese sido monoterapia (60,3% vs. 39,7%) o terapia combinada (60% vs. 40%). Por otra parte, los pacientes con genotipo rs12979860CC eran mayoritariamente infectados por No-G1 en comparación con G1 (66,7% vs 39,1%). Nuestros resultados demostraron también que el genotipo rs12979860CC era mucho más frecuente en los individuos con aclaramiento viral espontáneo que en los individuos VHC crónicos (72,5% vs 45,6%). Con respecto al gen HAVCR1, demostramos que había una relación entre este gen y el genotipo viral. Entre los 4 haplotipos (A-D) descritos en este gen, los pacientes con haplotipo C tenían la mayor tasa de infección por virus G1 (75,82%), por el contrario los individuos con haplotipo D tenían la menor tasa de infección por virus G1 (57,72%), mientras que los individuos con haplotipo A o B tenían valores intermedios (66%). Con respecto al gen TANK, se encontró asociación con el grado de fibrosis en las dos cohortes de pacientes estudiadas, monoinfectados y coinfectados, mientras que los genes TNFSF18 e IL18BP no se asociaron con ninguna de las variables estudiadas.
En conclusión, nuestros resultados confirman que factores genéticos del hospedador influyen en el curso natural de la infección, y tendrían implicaciones en el manejo terapéutico de los pacientes.
2018-04-24T10:07:11Z
2018-04-24T10:07:11Z
2015-06-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Abad Molina, C. (2015). Influencia de marcadores genéticos del hospedador en la historia natural de la infección por el virus de la hepatitis C. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/73431
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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2018-04-16T11:34:28Z
urn:hdl:11441/72944
Estudio de variaciones genéticas en pacientes con infección por virus de la hepatitis C
González Escribano, María Francisca
Aguilar Reina, José
Núñez Roldán, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Universidad de Sevilla. Departamento de Medicina
Hepatitis vírica
2018-04-16T11:34:28Z
2018-04-16T11:34:28Z
2007
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Montes Cano, Marco Antonio (2007). Estudio de variaciones genéticas en pacientes con infección por virus de la hepatitis C (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/72944
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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oai:idus.us.es:11441/444752024-02-13T21:58:12Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2016-08-24T09:07:55Z
urn:hdl:11441/44475
Esclerosis lateral amiotrófica: investigaciones en el modelo sod1g93a y correlaciones de interés clínico
Roodveldt, Cintia
Pozo Pérez, David
Caballero Hernández, Diana Elia
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa, incurable y de carácter fatal en un plazo de 3-5 años desde su diagnóstico. Esta enfermedad se caracteriza por la degeneración progresiva de neuronas motoras. Actualmente se sabe que el sistema nervioso central (SNC) no representa una zona inmunológicamente privilegiada, de hecho cada vez cobra mayor importancia el papel que el sistema inmunitario pudiera tener en la fisiopatología asociada al curso de ciertas enfermedades neurodegenerativas, la ELA sería un ejemplo de ello. Este hecho se hace especialmente evidente debido al componente neuroinflamatorio asociado a esta enfermedad. Hasta la fecha han sido numerosas las evidencias experimentales publicadas en las que se pone de manifiesto la implicación tanto del sistema nervioso como del sistema inmunitario en la ELA.
La respuesta inflamatoria es mediada en gran parte por los receptores de tipo Toll (TLRs), presentes tanto a nivel periférico como a nivel central. Estos receptores son fundamentales en el control inicial de la replicación de agentes patógenos, en el reclutamiento y activación de células del sistema inmunitario adaptativo para su posterior eliminación, y en el reconocimiento de productos derivados del daño tisular. Existen evidencias que demuestran el posible nexo entre infecciones bacterianas/víricas sistémicas y el transcurso de la enfermedad en modelos de ELA. En este sentido se hace interesante explorar la respuesta derivada del estímulo de TLRs en las células inmunitarias periféricas durante el curso de la ELA. Nuestros resultados muestran que existe una desregulación de la respuesta inmunitaria mediada por TLRs en el contexto de esta enfermedad, tanto en el modelo SOD1G93A como en pacientes con ELA. Se observa una reducción general de la respuesta frente a ligandos específicos para TLRs en términos de secreción de citoquinas, IL-6, IFN- e IL-10 y un aumento de la respuesta derivada de la estimulación mediada específicamente por TLR-3.
La ELA lleva consigo asociado un importante componente inflamatorio crónico, por ello es de especial interés el estudio del neuropéptido VIP como potencial agente terapéutico, debido a la gran capacidad inmunomoduladora asociada a este neuropéptido. En este sentido, es también de interés explorar el efecto terapéutico de la molécula bioactiva NAP, péptido fragmento de la proteína ADNP, en el contexto de esta enfermedad. Siendo ADNP una proteína capaz de mediar las acciones de VIP. NAP es considerado un potente neuroprotector capaz de evitar la muerte neuronal asociada al bloqueo eléctrico por tetrodotoxina y a la excitotoxicidad por NMDA. Por todo ello decidimos explorar el efecto de la administración exógena de VIP y NAP, tanto desde un punto de vista profiláctico, comenzando en fase pre-sintomática, como terapéutico, comenzando tras el inicio de los primeros síntomas en el modelo. Nuestros resultados ponen de manifiesto que la terapia con los neuropéptidos VIP y NAP afecta al transcurso del proceso patológico que acontece en el modelo animal SOD1G93A, observamos que el momento de inicio de la enfermedad se adelanta, sin embargo, se reduce la velocidad de avance de la misma. Con el fin de evaluar también el papel que VIP endógeno presentaba en el curso del proceso patológico en el modelo, estudiamos la evolución de la enfermedad en ausencia parcial y completa de VIP endógeno. Los resultados obtenidos muestran que dicho neuropéptido presenta un papel como modulador del proceso patológico asociado a esta enfermedad. La ausencia completa de VIP endógeno hace que se retrase el inicio de la enfermedad, aunque, por otra parte, el curso de la misma es más agresivo una vez iniciada. En la ELA no existen biomarcadores específicos para el diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad, debido en parte a la complejidad del proceso fisiopatológico asociado. El metaboloma refleja el fenotipo de un organismo dado y podría constituir una herramienta útil en el estudio de enfermedades de etiología poco conocida. En este sentido, decidimos explorar el perfil metabólico de diferentes regiones anatómicas de relevancia en el modelo SOD1G93A con el fin de identificar potenciales biomarcadores asociados a la ELA. Nuestros resultados muestran que el cerebro y la zona cervical de la médula espinal son las regiones donde varía en mayor medida el perfil metabolómico durante el transcurso del proceso patológico en el modelo SOD1G93A. Más aún, observamos que el perfil metabolómico asociado a las diferentes regiones exploradas permite clasificar en un alto porcentaje a los animales como transgénicos o como animales no portadores del transgen en diferentes fases de progresión de la enfermedad.
2016-08-24T09:07:55Z
2016-08-24T09:07:55Z
2016-06-03
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Cejudo Guillen, M. (2016). Esclerosis lateral amiotrófica: investigaciones en el modelo sod1g93a y correlaciones de interés clínico. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/44475
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/44475
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/557452024-02-13T09:37:41Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2017-03-13T13:29:02Z
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Transducción de señales en linfocitos. Implicación de la calcineurina y activación a través de antígenos de superficie (CD69)
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El conocimiento de la respuesta inmune como sistema de defensa frente a la invasión de organismos extraños ha alcanzado en los últimos años un alto nivel. El sistema inmune además de significar un elemento esencial en el sistema de defensa también ha sido tomado por gran número de investigadores como un modelo experimental para el estudio de multitud de procesos, tales como los mecanismos de proliferación, diferenciación y apoptosis celular. Descubrimientos de los últimos diez años han revelado que en las células del sistema inmune convergen, además de las clásicas rutas bioquímicas estudiadas en otras células somáticas, unos nuevos mecanismos tales como la síntesis y autorregulación por linfocinas altamente específicas. Hoy en día existen unas áreas de intensa investigación que se dirigen al descubrimiento de estas nuevas hormonas autocrinas, así como los mecanismos intracelulares que ellas ponen en marcha. Otros estudios se dirigen hacia el análisis de los mecanismos nucleares que, regulados por factores de transcripción, son puestos en marcha por acción de estas citoquinas. Así pues, se puede hoy en día dibujar un esquema altamente complejo en el cual las citoquinas y otros factores hormonales clásicos inciden sobre las células del sistema inmune y conducen a su destrucción, a su proliferación o a la síntesis de nuevos factores que van a interaccionar con las células vecinas. Todos estos procesos conllevan a cambios en lo que se conoce hoy en día como transducción de señales. En un sentido amplio podríamos definirla como el conjunto de modificaciones en proteínas, derivados de ácidos grasos, y otros segundos mensajeros, que finalmente pueden converger en el núcleo a través de señales (tales como factores de transcripción), induciendo o reprimiendo la transcripción de genes específicos.
En nuestra investigación, objeto de esta Tesis Doctoral, hemos intentado analizar de forma muy específica algunas de estas señales. En primer lugar nos referimos a estudios centrados en el papel de la calcineurina en del p53 y del NFKβ cuando se une al promotor HVI-1 LTR. Hay que resaltar que la calcineurina, una enzima descubierta a principios de los años setenta como una fosfatasa dependiente del calcio y la calmodulina, se considera hoy en día como una etapa central en la regulación de la actividad de muchos factores de transcripción. Esta función fue descubierta gracias a estudios realizados con la ciclosporina. A esta molécula, actuando como inmunosupresor no citotóxica, es capaz de enlazar con su receptor citoplasmático, una proteína llamada ciclofilina; y el complejo activo de ambos inhibe la actividad calcineurina. Este enzima fosfatasa (serina/treonina fosfatasa) no inhibible por acción del ácido okadaico, participa en la activación del NFAT defosforilándolo y permitiendo su traslocación al núcleo. Allí en conjunción con los factores c-Fos y C-Jun se une a la región promotora de genes muy específicos (IL-2) induciendo su transducción. Descubrimientos recientes han puesto de manifiesto que la calcineurina se encuentra también en el núcleo en donde defosforila a factores específicos en contraposición a otras cinasas que utilizan como substractos a estos factores.
Otra línea de investigación que hemos seguido trataba de analizar la función de la calmodulina en estos procesos. Por problemas metodológicos centrados en la unión débil de la calmodulina a las membranas usadas para la transferencia, estos estudios han quedado relegados a la espera de unas soluciones técnicas. Presentamos como trabajo tanto la producción y purificación de anticuerpos policlonales anti CaM, así como una metodología tendente a la mejora técnica del inmunoblotting con anti CaM. También presentamos un método alternativo al inmunoblot para la detección de la CaM usando técnicas de marcaje de proteínas con I125. Estos problemas han sido parcialmente resueltos gracias a la donación de anticuerpos monoclonales anti CaM, los cuales detectan la CaM con más sensibilidad que lo hacía nuestro anticuerpo policlonal.
Por último, presentamos como materia de esta Tesis Doctoral un trabajo realizado en colaboración con el Departamento de Inmunología del Hospital de la Princesa de Madrid en el cual se investigan las señales de transducción implicadas en la capacidad mitogénica de un anticuerpo dirigido contra una proteína de la superficie de los linfocitos denominada CD69. Aunque no se conoce el ligando fisiológico de este receptor, la estimulación con mAb contra esta proteína induce la activación de linfocitos T. hemos estudiado la fosforilación en tirosina del p56lck, así como la modulación de su actividad.
Es nuestro objetivo continuar este tipo de análisis incluyendo la participación de la calcineurina, ya que como se describe en el trabajo la CsA inhibe tanto la fosforilación en tirosina como la disociación del p56lck en una forma más lenta (p60lck).
En resumen también además de los trabajos referidos, se describen una serie de técnicas que hemos utilizando a lo largo del período de este período de formación y que incluye tanto la purificación de proteínas, producción de anticuerpos, técnicas de electroforesis y medida de actividades enzimáticas.
2017-03-13T13:29:02Z
2017-03-13T13:29:02Z
1998-06-12
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
http://hdl.handle.net/11441/55745
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/750262018-05-23T13:21:34Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2018-05-23T13:21:34Z
urn:hdl:11441/75026
Contribución de un desayuno de tipo mediterráneo a la prevención del desarrollo de aterosclerosis en individuos obesos
Sánchez Perona, Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
INTRODUCCIÓN:
La obesidad es considerada en la actualidad una enfermedad inflamatoria crónica de bajo grado, relacionada con un desorden en el metabolismo postprandial de los lípidos que, a largo plazo, acaba generando otras complicaciones como resistencia a la insulina, hiperglicemia e hipertensión. Es por ello que las personas obesas tienen mayor riesgo de desarrollar ECV. El contenido graso de los alimentos ha demostrado ser una pieza clave en la determinación de una salud óptima en el individuo debido a su capacidad para influir sobre los factores de riesgo CV y de estar implicado directamente en el proceso aterosclerótico. Las intervenciones dietéticas han sido identificadas como una herramienta importante de prevención primaria y tratamientos secundarios. La adherencia a la dieta Mediterránea ha demostrado aportar beneficios cardioprotectores principalmente gracias a su elevada concentración de MUFA proporcionados por el aceite de oliva, su fuente de grasa mayoritaria. En la actualidad, podemos encontrar en la literatura científica estudios sobre las propiedades cardioprotectoras proporcionadas por dietas ricas en grasas insaturadas y de su capacidad para reducir la aterosclerosis. Sin embargo, pocos trabajos han sido realizados con la participación de personas obesas. En este contexto, proponemos que un desayuno tipo mediterráneo enriquecido en MUFA sería capaz de contribuir a mejorar el perfil lipídico postprandial y la respuesta inflamatoria presente en los sujetos obesos participantes del estudio, así como a reducir la formación de células espumosas durante las primeras fases del desarrollo de la aterosclerosis, con respecto a un desayuno de tipo occidental.
HIPÓTESIS: En este contexto, proponemos la hipótesis de que un desayuno tipo mediterráneo enriquecido en MUFA contribuye a mejorar el perfil lipídico postprandial y la respuesta inflamatoria presente en los sujetos obesos participantes del estudio, así como a reducir la formación de células espumosas durante las primeras fases del desarrollo de la aterosclerosis, con respecto a un desayuno de tipo occidental.
OBJETIVOS:
1. Valorar la influencia de una carga lipídica sobre el metabolismo lipídico postprandial e inflamación vascular en adultos obesos frente a controles normopesos. 2. Determinar los efectos diferenciales de un desayuno de tipo mediterráneo frente a un desayuno de tipo occidental sobre el metabolismo lipídico postprandial en adultos obesos. 3. Determinar los efectos diferenciales de un desayuno de tipo mediterráneo frente a un desayuno de tipo occidental sobre la síntesis de marcadores de inflamación en sujetos obesos con respecto a sujetos normopesos. 4. Estudiar el efecto de las lipoproteína ricas en triglicéridos postprandiales aisladas de adultos obesos sobre la formación de células espumosas. 5. Analizar la capacidad del componente lipídico de las lipoproteínas ricas en triglicéricos para modular la actividad de la LPL en macrófagos.
RESULTADOS:
1. La medición de los parámetros basales de los participantes del estudio confirmó que los sujetos obesos presentaban dislipidemia, así como niveles de glucosa e insulina significativamente superiores a los del grupo control, aunque no eran insulinorresistentes, ni presentaban hipertensión arterial. El consumo de los dos tipos de desayunos experimentales no alteró los niveles basales de colesterol total ni HDL-c durante el periodo postprandial analizado en ninguno de los dos grupos del estudio. En cambio, la concentración postprandial de TG sufrió un rápido incremento inmediatamente después de que los sujetos obesos consumieran las dos comidas, especialmente tras la ingesta del desayuno de tipo occidental. En ellos, la formación de nuevas partículas TRL también fue inmediata. Esta misma respuesta la experimentaron los individuos normopesos, aunque únicamente cuando consumieron el desayuno de tipo occidental. Estos resultados indican que el desayuno rico en MUFA favorece una respuesta lipídica postprandial más reducida en individuos obesos que las comidas ricas en SFA. Se observó que los individuos obesos tenían a su vez un retraso en el aclaramiento de las partículas TRL en comparación con los de peso normal, y que el consumo del desayuno rico en SFA requirió una síntesis significativamente mayor de insulina para que los sujetos obesos mantuvieran los niveles de glucosa. Por tanto, un consumo continuado de este tipo de comida podría contribuir a la resistencia a la insulina en los obesos. En cambio, en los individuos normopeosos, el consumo del desayuno rico en MUFA demostró ayudar a que fueran más sensibles a la insulina y mostraran un perfil lipídico menos aterogénico. 2. El perfil inflamatorio basal del grupo obeso reveló un estado inflamatorio crónico al compararse con el de los individuos normopeso, ya que los niveles basales de leptina, Cp, PCR y MCP-1 detectados en ayunas en el grupo obeso fueron significativamente superiores, aunque no hubo importantes diferencias en los niveles de adiponectia, TNF-α ni IL-1β entre ambos. Demostrada la capacidad de los AG para activar/reducir la respuesta inflamatoria y para modular la liberación de los mediadores de inflamación en circulación, se evaluó la capacidad de la comida experimental rica en MUFA para reducir el estado inflamatorio crónico establecido en los pacientes obesos. El consumo del desayuno de tipo mediterráneo tuvo el efecto cardioprotector esperado en las personas con peso normal, al inducir una menor liberación postprandial de Cp y MCP-1 y un incremento de los niveles totales postprandiales de adiponectina; mientras que el consumo del desayuno de tipo occidental colaboró a que presentaran un peor pefil inflamatorio, debido principalmente la reducción de los niveles de adiponectina en circulación. En el grupo de los obesos, en cambio, no observó una mejoría en la concentración postprandial de adiponecina, leptina y PCR con respecto a la basal tras el consumo del desayuno de tipo mediterráneo. Ello parece sugerir que sería necesaria una previa pérdida de peso para que los individuos obesos se vieran beneficiados de las propiedades anti-inflamatorias de una dieta rica en MUFA. 3. . La caracterización de la composición de AG de las TRL aisladas en ayunas fue similar en los dos grupos, normopeso y obeso, mostrando el mismo perfil de aterogenicidad antes de comenzar los ensayos postprandiales. El consumo del aceite de oliva con el desayuno de tipo mediterráneo incrementó el contenido de MUFA total en los TG de las nuevas TRL de ambos grupos experimentales, debido a una mayor incorporación de ácido oleico en las partículas principalmente. Por el contrario, la ingesta del desayuno de tipo occidental generó partículas más aterogénicas al incrementar su concentración de SFA total. Se demostró por tanto que el perfil de AG de las nuevas partículas fue un reflejo de la composición lipídica de la fuente de grasa de la que procedían. No obstante, se observó una significativa incorporación de PUFA n-3 solo en las nuevas TRL aisladas de los sujetos normopeso después de consumir la comida de tipo occidental. Ello parecía sugerir que el consumo de una dieta rica en SFA por personas normopeso estimula la incorporación de PUFA endógenos en las nuevas TRL. La composición de AG de los FL extraídos de las partículas procedentes del grupo nomopeso no se vio alterada por el contenido lipídico de las comidas experimentales con respecto al perfil de AG en ayunas, mientras que en el grupo obeso sí se reflejó de nuevo la composición lipídica del desayuno ingerido. Estos resultados podrían indicar que en caso de padecer obesidad, el contenido graso de la dieta adquiere aún más importancia sobre la composición de AG de las TRL y, en consecuencia, sobre su perfil aterogénico, que si se tiene un peso corporal normal.
4. Tras incubar los cultivos de macrófagos con las TRL en ayunas y las aisladas a las 2 y 4 horas de ingerir las comidas experimentales, la caracterización de los AG de los TG intracelulares reveló que, de acuerdo con trabajos previos, las partículas procedentes de la hora 4 del periodo postprandial de ambos grupos fueron las captadas por las células más eficientemente, ya que el contenido lipídico intracelular reflejaba la composición de AG de las partículas. Con las TRL aisladas en ayunas en los sujetos obesos sucedió algo similar, indicando que también colaboran con la formación de células espumosas, aunque de forma más discreta que las TRL-4h. También se estudió con las imágenes tomadas al microscopio de los lípidos intracelulares, el tamaño de las gotículas lipídicas formadas en el interior de las células según la composición de las TRL. Las TRL-4h procedentes de los sujetos normopesos derivadas del consumo del desayuno de tipo mediterráneo generaron células espumosas con una carga lipídica muy similar a las TRL-0h, mientras que las derivadas del consumo del desayuno de tipo occidental provocaron una mayor incorporación de lípidos por parte de los macrófagos. Las TRL-4h aisladas de los sujetos obesos, independientemente de cual fuera la fuente de grasa de la que derivasen, provocaron en ambos casos una exacerbada incorporación lipídica en los macrófagos. La caracterización de los AG intracelulares reveló que cuando los macrófagos se incubaron con las TRL derivadas de la ingesta del desayuno de tipo mediterráneo de los dos grupos, el contenido intracelular de SFA totales se redujo significativamente, pero no se incrementó la concentración de los MUFA; y la ingesta del desayuno de tipo occidental por el grupo obeso causó un importante incremento de los SFA intracelulares y redujo los MUFA, generando un perfil lipídico intracelular más aterogénico. Estos resultados indican que los alimentos ricos en SFA aumentan las propiedades aterogénicas de las TRL de las personas con obesidad, pero no en los individuos normopeso, mientras que el consumo de alimentos con alto contenido en MUFA mejoran el perfil lipídico intracelular solo de los individuos normopeso. 5. Las diferencias observadas en los lípidos intracelulares se relacionaron con las modificaciones en la expresión génica de los receptores de membrana. Se detectó que, coincidiendo con el momento en el cual las TRL aisladas del grupo normopeso son incorporadas más eficientemente y causan los mayores depósitos de lípidos intracelulares (4 horas tras la ingesta), los niveles de expresión de los receptores celulares son los más bajos. Además, el incremento intracelular de los MUFA tras la captación de las TRL aisladas después de consumir el desayuno de tipo mediterráneo provocó que se obtuvieran los menores niveles de ARNm de prácticamente todos los receptores celulares. De modo que el consumo del desayuno mediterráneo estaría proporcionando tanto a la población obesa como a la normopesa una actividad cardioprotectora al colaborar con la reducción de la formación de células espumosas. En contra, se ha detectado el efecto perjudicial causado en las personas con obesidad cuando consumen el desayuno occidental, ya que éste parece potenciar la relación colaborativa LDLR-LRP1, además de inducir un incremento significativo de la expresión del receptor CD36 durante el periodo postprandial, no detectado en los sujetos normopeso, colaborando así a la formación de células espumosas. 6. 6. El tratamiento de los cultivos de macrófagos con partículas CRLP compuestas por AG de distinto grado de saturación reveló que, a las 6 horas de incubación, momento en el que la LPL es más activa, fueron las CRLP-LLL las que causaron una mayor reducción de los niveles de actividad de LPL localizada en la superficie celular, y las CRLP-POP la menor. Estos resultados coinciden con la literatura científica, pues se ha establecido que los complejos formados entre ANGPTL4 y los AG son más fuertes con SFA, colaborando a mantener la actividad de LPL, y los más débiles con PUFA, reduciéndose por tanto su actividad. En cambio, a las 24 horas, la capacidad moduladora de la actividad catalítica de la enzima por parte de las diferentes partículas CRLP es muy similar, viéndose ésta reducida sin diferencias significativas entre los AG componentes de las partículas. Estos resultados coinciden con los niveles de actividad detectados en el medio de cultivo y en el espacio intracelular, siendo el control de la actividad de LPL en esta última fracción atribuido a la acción moduladora de los AG sobre PPARs, y no ANGPTL4. La cuantificación de la abundacia relativa de ARNm LPL y ANGPTL4 mostró que el contenido de PUFA y MUFA de las CRLP causó una importante reducción en los niveles de expresión de LPL y una sobreexpresión de ANGPTL4, siendo este efecto más acusado cuando los macrófagos fueron tratados con CRLP-LLL. Estos resultados apoyan la función protectora de MUFA y PUFA ante la formación de células espumosas, al contribuir a reducir la interacción entre TRL y los receptores celulares mediante la reducción de la actividad de la LPL. En cambio, en contenido de SFA en las CRLP parece ayudar a mantener la actividad de LPL de macrófagos, estimulando la acumulación de lípidos en el interior de las células.
CONCLUSIÓN: En general, los resultados obtenidos permiten concluir que el consumo de un desayuno de tipo mediterráneo ayuda a reducir la respuesta lipidémica postprandial en las personas obesas, y contribuye a una menor formación de células espumosas mediante la reducción de los niveles de expresión de los receptores celulares, así como la actividad de la LPL. No obstante, para que la respuesta inflamatoria establecida en la obesidad se reduzca por la ingesta de una dieta rica en MUFA, sería necesario que éstos individuos perdieran previamente peso corporal.
2018-05-23T13:21:34Z
2018-05-23T13:21:34Z
2017-10-23
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sinausía Nieva, L. (2017). Contribución de un desayuno de tipo mediterráneo a la prevención del desarrollo de aterosclerosis en individuos obesos. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/75026
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Estados Unidos de América
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2019-01-16T09:35:10Z
urn:hdl:11441/81613
Caracterización de pacientes controladores del VIH. Mecanismos implicados en el control espontáneo del VIH y virus de la hepatitis C.
Leal Noval, Manuel
Ruiz-Mateos Carmona, Ezequiel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Los controladores del VIH son un grupo minoritario (<1%) de pacientes capaces de mantener viremias muy bajas o indetectables en ausencia de tratamiento antirretroviral durante largos periodos de tiempo. El estudio de este grupo de sujetos es muy importante, puesto que pueden servir como un modelo natural de cura funcional del VIH. Sin embargo, de todos los estudios realizados en grandes cohortes se desprende la idea de que existe gran heterogeneidad dentro del conjunto de controladores. Por lo tanto, en los trabajos desarrollados en esta Tesis Doctoral se han examinado distintas fuentes de heterogeneidad que nos ha permitido identificar fenotipos extremos dentro de los controladores, lo cual nos acerca a encontrar el grupo de sujetos que se ajusta mejor al modelo de cura funcional del VIH. Se ha descrito la tasa de desarrollo de Eventos no SIDA y su distribución en sujetos de la Cohorte Controladores de la Red de Investigación en SIDA (ECRIS). Hemos identificado el fenotipo extremo de controladores “Long Term Non-Progressor (LTNP-C)”, que se corresponde con aquellos sujetos que conservan niveles sostenidos de linfocitos T CD4 por encima de 500 células/mm3 durante al menos 7 años desde el diagnóstico VIH, basándonos en dos factores genéticos: el genotipo HLA-B*57 y polimorfismos asociados a IFNλ4. También hemos descrito el perfil de coinfección con Virus de la Hepatitis C (VHC) en la cohorte ECRIS. De este estudio observamos que los controladores tienen tasas de aclaramiento espontáneo del VHC mayores que sujetos no controladores y pudimos identificar otro fenotipo extremo, los supercontroladores, que son controladores del VIH que simultáneamente, aclaran espontáneamente el VHC. Valiéndonos de este modelo examinamos mecanismos inmunológicos asociados a este extraordinario fenómeno. Realizamos un análisis exhaustivo de respuesta inmunológica adaptativa
frente al VIH y al VHC, así como un inmunofenotipado de células de la respuesta innata, tanto en sangre periférica como en ganglio linfático. Entre los elementos involucrados en la inmunidad innata, destacamos el papel de las células plasmacitoides dendríticas (pDCs) en el control espontáneo del VIH y VHC. Nuestros datos sugieren que este tipo celular es una potencial diana terapéutica ya que se puede modular su capacidad antiviral directa, demostrado en experimentos in vitro. Además, se puede promover un estado de maduración que fomente una comunicación con la inmunidad adaptativa. Asimismo, hemos observado su potencial implicación en la recuperación de respuestas T CD8 foliculares en ganglio linfático vía comunicación con otras células dendríticas y vía eje PD1/PDL1. Por todo ello, el estudio de estrategias inmunomoduladoras enfocadas a la pDC podría ser esencial para el desarrollar estrategias que consigan la cura funcional del VIH, así como el desarrollo de vacunas antivirales, tanto para VIH como para VHC.
2019-01-16T09:35:10Z
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2018-12-17
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Domínguez Molina, B. (2018). Caracterización de pacientes controladores del VIH. Mecanismos implicados en el control espontáneo del VIH y virus de la hepatitis C.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/81613
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2014-11-27T11:58:31Z
urn:hdl:11441/15616
Estudio antropológico de las nuevas poblaciones de Sierra Morena comparación con la población andaluza autóctona y germánica, mediante el estudio del polimorfismo HLA de clase I
Núñez Roldán, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Inmunogenética
Antígenos
Hemos estudiado los antígenos HLA de Clase I, de 50 familias de Andalucía y otras 50 procedentes de las nuevas poblaciones de Sierra Morena (La Carolina, Guarroman, Navas de Tolosa, Carboneros y Acebuchal), en las que se produjo, hace ahora algo más de doscientos años una importante colonización de individuos procedentes de Europa central. Uno de los objetivos más importantes del presente estudio ha sido investigar la evolución de los haplótipos en desequilibrio de asociación en las familias de las nuevas poblaciones de sierra morena. los resultados obtenidos nos han permitido concluir que ha existido una autentica panmixión. Las frecuencias de ciertos alelos HLA de Clase I en las nuevas poblaciones de Sierra Morena son intermedias entre las frecuencias observadas en las poblaciones originales, especialmente en A3, A10, A29, B7 y B14. Existen en las dos poblaciones originales (Andaluza y Germánica) un total de 12 haplótipos en desequilibrio de asociación. En cambio, en la población de Sierra Morena, han desaparecido cinco de ellos y no se observa ninguno de nueva aparición. Así, los haplótipos formados por A2 y B8, y por A2 y B35, que se encuentran asociados negativamente en Alemania, ya no lo están en las nuevas poblaciones de sierra morena. También han desaparecido los desequilibrios A1-B35 (presente en Alemania) y A24-B7 (presente en Andalucía), por lo que creemos que algunas asociaciones gaméticas significativas podrían ver vestigios de poblaciones ancestrales que van desapareciendo a medida que las diferentes poblaciones de la tierra se van mezclando. Por último, el estudio de las distancias genéticas permite afirmar que las existentes entre las tres poblaciones (Andaluza, Germánica y de Sierra Morena) son pequeñas, aunque indican que se trata de tres poblaciones claramente definidas.
2014-11-27T11:58:31Z
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2010
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Díaz Oller, J. (2010). Estudio antropológico de las nuevas poblaciones de Sierra Morena comparación con la población andaluza autóctona y germánica, mediante el estudio del polimorfismo HLA de clase I. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/15616
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/15616
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2016-09-08T08:59:05Z
urn:hdl:11441/44811
Estudio de genes candidatos en la susceptibilidad y curso clínico del lupus eritematoso sistémico
González Escribano, María Francisca
Núñez Roldán, Antonio
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Las enfermedades autoinmunes sistémicas constituyen un grupo de patologías donde existen disfunciones del sistema inmunitario con manifestaciones clínicas floridas que se traducen en la afectación simultánea o sucesiva de la mayoría de los órganos y sistemas. El prototipo de este tipo de enfermedades es el lupus eritematoso sistémico (LES). La etiopatogenia de las enfermedades autoinmunes es compleja y en ella intervienen factores genéticos, hormonales y ambientales. Se sospecha que la contribución de los factores genéticos a la susceptibilidad a las enfermedades autoinmunes es múltiple, participando un gran número de genes con una pequeña aportación individual por parte de cada uno de ellos. Una de las metas principales de la medicina moderna es identificar los genes responsables del control de las rutas que desencadenan las distintas enfermedades.
Una de las estrategias utilizadas para abordar el estudio genético de las enfermedades complejas es el establecimiento de genes candidatos. Existen diferentes métodos genéticos para la detección de genes que contribuyan a la susceptibilidad o resistencia en enfermedades poligénicas complejas. Entre ellos encontramos los estudios de rastreo sistemático del genoma con análisis de ligamiento, los análisis de asociación en casos y controles, y el test de desequilibrio de transmisión (TDT) en familias (Tsuchiya y col., 2002). Estos métodos no son excluyentes sino complementarios. Así, mediante análisis de ligamiento se determinan regiones candidatas donde posteriormente mediante alguno de los otros métodos se buscan genes polimórficos que pueden estar relacionados con la enfermedad. La estrategia que se ha venido utilizando hasta ahora para proponer genes candidatos se basa en el hecho de que las características funcionales de la proteína codificada por éstos genes permita plantear que pudiera estar implicada de alguna manera en la patogénesis de la enfermedad.
El objetivo principal de este trabajo fue profundizar en el conocimiento de las bases genéticas del lupus eritematoso sistémico. Como quiera que, desde el punto clínico se trata de una enfermedad enormemente compleja, nuestro objetivo fue doble:
1. Estudiar diferentes polimorfismos genéticos que pudieran contribuir a la susceptibilidad a padecer la enfermedad.
2. Analizar si algunos de estos polimorfismos contribuyen a la diversidad de formas clínicas y a la evolución de la enfermedad.
Para alcanzar estos objetivos planteamos un diseño experimental basado en un estudio de casos y controles utilizando una estrategia mixta basada en proponer genes candidatos seleccionados de acuerdo con su localización y/o función. La estrategia seguida fue la siguiente:
1.- Seleccionar regiones cromosómicas que, de acuerdo con estudios de rastreo sistemático, han demostrado una cierta asociación con el lupus. Concretamente se seleccionaron las siguientes regiones cromosómicas:
1q22-24, 1q41-42, 2q33-37, 4p15-16, 6p11-22 y 16q12-13.
2.- Seleccionar, dentro de estas regiones, aquellos genes que por su función pudieran estar involucrados en el desarrollo de esta patología. Concretamente se seleccionaron:
* Región 1q22-24, los genes de los receptores para la región Fc de la inmunoglobulina G: FcγRIIa, FcγRIIIa y FcγRIIIb.
* Región 1q41-42: el gen de la poli-ADP ribosa polimerasa (PARP).
* Región 2q33-37: el gen CTLA-4.
* Región 4p15-16: el gen CD38.
* Región 6p11-22: Diversos genes y marcadores situados dentro del complejo mayor de histocompatibilidad humano (HLA): C125, BAT2, factor de necrosis tumoral A (TNFA), factores 2 y 4 del complemento, HLA-DRB1* y HLA-DQB1*.
* Región 16q12-13: el gen NOD2/CARD15.
3.- Seleccionar genes que, por la función de la proteína que codifican, pudieran estar involucrados en el desarrollo de esta patología, aunque no existiesen evidencias previas de asociación en estudios de ligamiento. Concretamente se seleccionaron los genes de la quimiocina MCP-1 y de los receptores de quimiocinas CCR2 y CCR5.
4.- Analizar la posible influencia de todos estos genes en la susceptibilidad, manifestaciones clínicas y evolución de un grupo de pacientes procedentes de un mismo centro, el Hospital Universitario Virgen del Rocío.
2016-09-08T08:59:05Z
2016-09-08T08:59:05Z
2004-06-29
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Aguilar Silva, F.J. (2004). Estudio de genes candidatos en la susceptibilidad y curso clínico del lupus eritematoso sistémico. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/44811
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/44811
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-05-14T17:55:51Z
urn:hdl:11441/96720
Estudio de los cambios producidos durante el envejecimiento en las principales proteinas enzimaticas implicadas en los procesos digestivos
Machado de la Quintana, Alberto
Mateos-Nevado Artero, Benito
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2020-05-14T17:55:51Z
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1991-06-27
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/96720
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2023-12-20T10:21:56Z
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Obtención de proteínas y péptidos vegetales de chía (salvia hispanica l.) y el estudio de sus propiedades bioactivas
Millán-Linares, María del Carmen
Carrera Sánchez, Cecilio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Universidad de Sevilla. Departamento de Ingeniería Qímica
Según la Organización Mundial de la Salud (WHO) las enfermedades crónicas no transmisibles (ECNT) como las enfermedades cardiovasculares, cáncer, obesidad, enfermedades respiratorias crónicas, diabetes e hipertensión, se cobran la vida de 41 millones de personas todos los años, por lo que se hace necesaria la búsqueda de nuevos compuestos bioactivos alimentarios como alternativa eficaz al tratamiento farmacológico, pudiendo actuar como inmunomodulador de las enfermedades relacionadas con estados crónicos oxidativos e inflamatorios. En este trabajo se ha obtenido un hidrolizado proteico a partir de semillas de chía (Salvia hispanica L.), considerada hoy en día un superalimento, y de la que existen múltiples evidencias científicas sobre sus propiedades nutricionales y funcionales, así como que, la hidrólisis enzimática de sus proteínas genera péptidos bioactivos con efectos positivos en la salud. En este trabajo, se han demostrado las propiedades tecnofuncionales de un hidrolizado de chía obtenido con la enzima Alcalase, interesantes para su incorporación en diferentes matrices y productos de la industria alimentaria. Por otra parte, se ha secuenciado, identificado y estudiado su biodisponibilidad en un sistema de absorción intestinal tipo transwell utilizando la línea celular Caco-2, mediante el estudio del peptidoma de los hidrolizados proteicos de chía original y tras la absorción intestinal, así como el estudio in silico de su potencial bioactivo para la selección de los péptidos responsables de dicha actividad. Por último, y mediante ensayos in vitro en monocitos humanos primarios, se ha demostrado que el hidrolizado proteico de chía, disminuyó el estrés oxidativo, la expresión génica y liberación de citoquinas proinflamatorias, aumentó la expresión génica y liberación de marcadores antiinflamatorios favoreciendo la polarización de los macrófagos derivados de monocitos hacia el fenotipo antiinflamatorio M2, pudiendo ser considerado por tanto, un candidato potencial de alimentos funcionales en enfermedades crónicas.
2023-12-20T10:21:56Z
2023-12-20T10:21:56Z
2023-10-27
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Villanueva Lazo, Á. (2023). Obtención de proteínas y péptidos vegetales de chía (salvia hispanica l.) y el estudio de sus propiedades bioactivas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/152725
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-04-11T13:18:12Z
urn:hdl:11441/72455
Epigenética de los procesos de autorrenovación, pluripotencialidad y diferenciación de las células troncales
Soria Escoms, Bernat
Sánchez Margalet, Víctor
Hmadcha, Abdelkrim
Universidad de Sevilla. Departamento de Fisiología Médica y Biofísica
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Células madre
El objetivo general de esta tesis ha sido definir la importancia que poseen los procesos epigenéticos sobre el mantenimiento del estado pluripotente y el proceso de diferenciación de las células troncales embrionarias. Para ello se llevaron a cabo dos mod
2018-04-11T13:18:12Z
2018-04-11T13:18:12Z
2010
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Horrillo Ledesma, Angélica (2010). Epigenética de los procesos de autorrenovación, pluripotencialidad y diferenciación de las células troncales (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
9788469399491
https://hdl.handle.net/11441/72455
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-11-22T17:50:42Z
urn:hdl:11441/90465
Aspectos moleculares de la acción del óxido nitríco como mediador de la apoptosis inducida por citocinas en células secretoras de insulina
Bedoya Bergua, Francisco Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2019-11-22T17:50:42Z
2019-11-22T17:50:42Z
1999-07-16
info:eu-repo/semantics/article
Bernabé Ortiz, J.C. (1999). Aspectos moleculares de la acción del óxido nitríco como mediador de la apoptosis inducida por citocinas en células secretoras de insulina. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/90465
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2016-06-15T15:31:23Z
urn:hdl:11441/42366
Estudio de marcadores tumorales y bioquímicos en el seguimiento del cáncer de mama
Codes Manuel de Villena, Manuel
Malagón Cobos, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular
Falta palabras clave
El papel de los Marcadores Tumorales y Bioquímicos en el Cáncer Mama es creciente ya que, si bien no existe en la actualidad ningún marcador “específico” del carcinoma mamario (máxima sensibilidad y especificidad), son muchos los trabajos publicados en este sentido, con resultados más o menos concordantes en cuanto a la relación de dichas substancias con: tamaño tumoral, afectación ganglionar, presencia o ausencia de metástasis en el diagnóstico, estadiaje clínico, valoración de la respuesta a la terapéutica, etc. Los trabajos de Krebs y cols., Pons-Anicet y cols., Van Dalen y cols., y Jäger y cols. entre otros son quizás los que han demostrado de forma más concienzuda la utilidad de los marcadores tumorales, fundamentalmente del Antígeno Carcinoembrionario (CEA) y del Antígeno Carcinoide 15.3 (CA 15.3), en el seguimiento de la enfermedad, en cuanto a su valor como parámetros indicadores de recidiva de la enfermedad, o de respuesta de la misma al tratamiento.
Otras moléculas, como el Acido Siálico Total (AS), han sido también estudiadas por algunos autores, con resultados discordantes en el cáncer de mama. No obstante, la documentación existente sobre el metabolismo de las glicoproteínas y sialoglicoproteínas de superficie en las células tumorales, estimulan al estudio de estos componentes, como posibles marcadores tumorales en sangre ya que, parece ser que existe una posible relación entre los glicoesfingolípidos y la formación de metástasis en ciertos tumores experimentales. Ciertos carbohidratos complejos, incluyendo a los esfingolípidos, pueden determinar o, al menos, participar en la adhesión celular. La Fosfohexosa Isomerasa (PHI) ha sido arduamente estudiada por Molinas y cols., quienes opinan que, en pacientes con cáncer de mama MO, los valores observados son sensiblemente mayores a los obtenidos en la muestra control, y en las pacientes M1, notablemente superiores a los observados en las pacientes MO y en los controles. Asimismo, establecen la correlación existente entre esta enzima y el número de ganglios afectados, o la localización metastásica (altos niveles en las metástasis hepáticas).
2016-06-15T15:31:23Z
2016-06-15T15:31:23Z
1992-04-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Vivancos Arigita, J.A. (1992). Estudio de marcadores tumorales y bioquímicos en el seguimiento del cáncer de mama.. (Tesis doctoral inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/42366
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/42366
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2021-04-30T16:51:19Z
urn:hdl:11441/108284
Gestión de laboratorio para la toma de decisiones
Arjona Rueda, Isidoro
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Los actuales cambios y tendencias de la sanidad, así como la propia evolución en los últimos años de los laboratorios clínicos, han hecho necesario un abordaje integral de la problemática surgida en estos. La aplicación de las técnicas de Gestión total de la calidad RS capaz de agrupar todas las acciones emprendidas tanto en la organización y la calidad, como en el abordaje de los costes de los laboratorios clínicos para conseguir la satisfacción del cliente al mínimo coste.
2021-04-30T16:51:19Z
2021-04-30T16:51:19Z
2001-02-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Vázquez Rico, I. (2001). Gestión de laboratorio para la toma de decisiones. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/108284
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-06-12T17:49:51Z
urn:hdl:11441/97761
Papel regulador de la fructosa-2, 6-difosfato en la glucolisis de diferentes tejidos
Sobrino Beneyto, Francisco
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Se ha comprobado el papel regulador de la fructosa-2,6-bifosfato en la glucolisis de diferentes tejidos, dichos tejidos fueron estudiados en circunstancias control y/o sometidos a diferentes estados metabólicos y hormonales. En el tejido adiposo blanco la estalación de la glucolisis por insulina parece estar mediada por la fructosa-2,6-bifosfato. La concentración de este metabolito está además incrementada durante la realimentación que sigue a una fase de ayuno. En el tejido adiposo marrón la fructosa-2,6-bifosfato estimuló la glucolisis durante el periodo de aclimatación al frío. Este efecto fue potenciado por las hormonas tiroideas. En el tejido cardiaco la concentración de fructosa-2,6-bifosfato disminuyó durante el hipotiroidismo experimental. Se observó un descenso de las actividades pfk-1 y pfk-2 que se cree debido a una disminución en la síntesis del enzima. La actividad pfk-1 del corazón hipotiroideo respondió al efecto de sus estimuladores. Se describe la presencia de fructosa-2,6-bifosfato en los hematies de rata. El 2,3-difosfoglicerato resultó ser inhibidor de las actividades pfk-2 y ppi-fgp-1-fosfotransferasa, enzima auxiliar de la medida de fructosa-2,6-bifosfato. En las células de tumor adrenal y-1 la fructosa-2,6-difosfato parece mediar la estalación de la glucolisis por efecto de la acth.
2020-06-12T17:49:51Z
2020-06-12T17:49:51Z
1990-03-06
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/97761
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-03-19T16:29:42Z
urn:hdl:11441/94342
Identificación de un nuevo autoantigeno mediante la producción de anticuerpos monoclonales humanos
Sánchez Sánchez, Berta
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Una de las caracteristicas esenciales de las enfermedades autoinmunes es la presencia en el suero de los pacientes de anticuerpos que reaccionan frente a moleculas propias. En el presente trabajo hemos utilizado linfocitos b procendentes de una paciente con esclerodermia, para generar dos anticuerpos monclonales humanos (acmo) distintos capaces de reconocer un autoantigeno desconocido, el acmo b-24 con un patron de union como el descrito para los anticuerpos polireactivos y el acmo b-33 monoespecifico. Frente a este autoantigeno tambien reaccionaban cinco sueros procedentes de pacientes con diversas manifestaciones autoinmunes. Investigando la naturaleza del compartimento celular reconocido mediante inmunofluorescencia y microscopia electronica, pudimos asignar al endosoma tardio como diana de estos autoanticuerpos. Por otra parte, y tras la secuenciacion del extremo amino terminal del antigeno purificado por cromatografia de afinidad con el acmo b-33, se identifico mediante busqueda por homologia de secuencia en una base de datos este nuevo autoantigeno, que resulto ser el receptor de la manosa 6-fosfato independiente de calcio (ci-mpr). La generacion de anticuerpos monoclonales humanos nos permitio por tanto, no solo estudiar con todo detalle la biologia de la organela diana, sino tambien el aislamiento y purificacion de este nuevo autoantigeno para su porterior identificacion y estudio molecular.
2020-03-19T16:29:42Z
2020-03-19T16:29:42Z
1996-09-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/94342
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2016-03-09T18:16:21Z
urn:hdl:11441/38304
Descifrando las bases genéticas de enfermedades complejas: enfermedad de Behçet
González Escribano, María Francisca
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Enfermedad de Behçet
Falta resumen
2016-03-09T18:16:21Z
2016-03-09T18:16:21Z
2015-12-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Ortiz Fernández, L. (2015). Descifrando las bases genéticas de enfermedades complejas: enfermedad de Behçet. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/38304
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/38304
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
oai:idus.us.es:11441/1484722024-02-14T19:30:54Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2023-08-18T09:13:18Z
urn:hdl:11441/148472
Implicación de acuaporina-4 en las bases celulares y moleculares del desarrollo postnatal del sistema nervioso central murino
Echevarría Irusta, Miriam
Ramírez Lorca, Reposo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El agua es un elemento básico en la fisiología de los seres vivos. A escala celular, su transporte
se encuentra facilitado por las acuaporinas (AQPs), una familia de proteínas integrales de
membrana ubicuamente distribuidas por los distintos sistemas del organismo. En el Sistema
Nervioso Central (SNC), acuaporina-4 (AQP4) es la AQP más ampliamente expresada y juega un
papel clave en la homeostasis de los distintos líquidos que fluyen en el sistema. No obstante,
pocos estudios han abordado el papel de esta proteína durante el desarrollo. En este trabajo,
hemos caracterizado el curso de aparición de la proteína AQP4 durante el desarrollo postnatal
del SNC, destacando dos regiones que manifestaron perfiles de expresión singulares: el
acueducto cerebral y el cuerpo calloso. Profundizando en el sentido fisiológico de estas
observaciones, utilizamos el ratón transgénico con deleción de AQP4 (AQP4-KO) y evaluamos
parámetros relacionados con el neurodesarrollo postnatal en ambas regiones. Mediante varias
aproximaciones, determinamos la existencia de defectos asociados a la diferenciación y
desarrollo de estructuras ciliares en las células ependimarias del acueducto cerebral del ratón
AQP4-KO. Asimismo, en el cuerpo calloso de este animal, identificamos déficits en la abundancia
y maduración de oligodendrocitos, así como en la formación de mielina. Interesantemente, el
análisis de ambas regiones nos hizo hallar un subtipo microglial CD11c+ que, con una huella
transcripcional asociada al neurodesarrollo, mostró una presencia exclusiva en el animal AQP4-
KO durante el estadio postnatal estudiado. Por último, para analizar la posible influencia de esta
población microglial, evaluamos el efecto que su depleción (realizada por vía farmacológica con
el compuesto PLX5622) generó en las regiones de interés, indicando un papel relevante en el
desarrollo del tejido ependimario. En conclusión, este trabajo apoya la importancia de la
expresión de AQP4 en el desarrollo temprano del SNC, y plantea cómo su defecto podría
subyacer a alteraciones estructurales y funcionales ligadas a patologías del neurodesarrollo.
Water transport facilitated by aquaporins (AQPs) is an indispensable mechanism to
achieve fluid homeostasis in the different compartments of the organism. In the central
nervous system (CNS), aquaporin-4 (AQP4) is the most abundantly expressed AQP and,
given its localised pattern in the border regions, it is considered a determining element in the
aqueous exchange between the different fluids of the system. In recent years, this property
has been especially reinforced by the proposal of the existence of the glymphatic system,
which highlights AQP4 as a key component in the establishment of a convective flow linked
to the clearance of compounds in the brain parenchyma. This new scenario has prompted
numerous studies focused on understanding how brain clearance of substances occurs and
developing new clinical strategies to eliminate neurotoxic protein accumulations, a plausible
therapy against neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease.
A major role in these approaches has been played by the characterisation of the AQP4
knockout mouse (AQP4-KO), a model that, in addition to presenting a greater susceptibility
to develop symptoms compatible with Alzheimer's disease, has been associated with a
predisposition to suffer pathologies associated with early CNS development, such as
congenital hydrocephalus. Postnatal CNS development is one of the major phases of
activation of processes such as proliferation, differentiation and changes in cellular and
molecular components of the parenchyma. These involve significant water movement and
osmotic imbalances in which the role of AQP4 has not been studied in detail.
In this work, we provide a better understanding of the distribution of AQP4 during
postnatal murine CNS development and its contribution to the development of different
periventricular neural tissues. To this end, we first sought to characterise when and where
AQP4 expression arises in the CNS, assessing the levels and distribution of its gene
expression. From this analysis, we highlighted two regions, the cerebral aqueduct and the
corpus callosum, which followed specific dynamics regarding the evolution of the abundance
of AQP4 during development.
Thus, in the aqueductal ependyma, AQP4 expression showed an increase during the first
two postnatal weeks and then stabilised in adult tissue. In contrast, in the corpus callosum,
AQP4 expression gradually decreased until the adult stage, following an expression profile
that results similar to that of oligodendrocytic progenitor (OPCs) markers and opposed to
tissue myelination. This expression was identified in developing astrocytes, following
delocalised expression patterns, which did not correspond to those identified in astrocytes
of adult tissue (highly polarised toward the perivascular space).
To determine the functional relevance of early expression of AQP4 in both regions, we
used the AQP4-KO model and explored by microarrays the transcriptomic profiles of the
tissues of interest from 11-day-old mice (P11). In the cerebral aqueduct, reductions in the
expression levels of genes involved in the development of ependymal and ciliary were
highlighted, which were translated into alterations, evidenced in this study by
immunohistochemical and electron microscopy approaches. On the other hand, we also
found increases in the expression of genes related to components of the immune system,
which we attribute to the presence of a CD11c+ microglial subtype preferentially located in
the subependymal space and that showed a transcriptomic signature associated with
neurodevelopment.
Transcriptomic analysis of the corpus callosum also showed differential overexpression
in genes linked to the microglial subtype, strongly suggesting that the microglial population,
CD11c+, detected in both tissues (aqueduct and corpus callosum), corresponds to the same
microglial population or subtype. In the corpus callosum, we also observed gene changes in
oligodendroglial development that we confirmed histologically by changes in the proportions
of cell types of this lineage, as well as in the degree of myelination of the axons that make up
the tissue.
To identify the influence of the microglial population on tissue development, we
implemented a microglial depletion system based on the administration of the drug PLX5622
during the postnatal window (P6-P11) of development. The results of this study have pointed
to the existence of defects in the maturation of ependymal cells of the depleted animals,
however, no relevant changes were identified in the corpus callosum.
In conclusion, the results shown in the present PhD Thesis propose that AQP4 has a
relevant role in the neurodevelopment of wild-type mice and that its loss in the AQP4-KO
animal could contribute to the development of congenital hydrocephalus by altering the
normal structural and functional development of the aqueductal ependyma. A role for AQP4
in the process of myelination has also been highlighted and remains to be tested.
2023-08-18T09:13:18Z
2023-08-18T09:13:18Z
2023-06-02
2024-06-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Mayo Leon, F. (2023). Implicación de acuaporina-4 en las bases celulares y moleculares del desarrollo postnatal del sistema nervioso central murino. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/148472
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2022-11-07T10:18:40Z
urn:hdl:11441/139049
Estudio de variantes genéticas asociadas a esofagitis eosinofílica
García Lozano, José Raúl
Quiralte Enríquez, Joaquín
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
1. Introducción:
La EoE es una enfermedad inflamatoria crónica, en cuyo origen existe
una alteración de la regulación de la respuesta inmune del huésped frente a la
microbiota y a otros antígenos intraluminales (especialmente alergenos
alimentarios) en sujetos susceptibles genéticamente, produciéndose
alteraciones en la función y regulación del sistema inmune innato y adaptativo,
así como una disfunción de la barrera epitelial que daría lugar al proceso
inflamatorio y posterior remodelado de este epitelio esofágico.
2. Hipótesis y Objetivos:
La hipótesis de este proyecto de investigación es que determinadas
variantes de los genes TSLP, TLR3. TLR4, FOXP3 y FLG pueden influir en la
susceptibilidad a padecer EoE y repercutir en los distintos fenotipos (modos de
expresión clínica) de esta enfermedad.
3. Objetivos:
1. Evaluar la asociación de variantes en los genes TSLP, TLR3, TLR4,
FOXP3 y FLG con la susceptibilidad a desarrollar EoE en la población
española.
2. Evaluar la asociación de las variantes de los genes TSLP, TLR3, TLR4,
FOXP3 y FLG con las comorbilidades alérgicas asociadas a la EoE.
4. Material y Métodos:
Pacientes y controles:
Se incluyeron un total de 218 pacientes adultos de raza caucásica
diagnosticados de EoE, 131 pacientes del área sanitaria del HUVR (Sevilla) y 87
del área sanitaria del Hospital General de Tomelloso (Ciudad Real) y 376
donantes de médula ósea sanos de raza caucásica. Para evitar los efectos de
confusión de las asociaciones genéticas investigadas con otras afecciones, se
excluyeron pacientes EoE que tenían otras afecciones autoinmunes (es decir,
enfermedad celíaca, diabetes mellitus y trastornos tiroideos).
Fenotipado de los pacientes:
A todos los pacientes se les realizó una entrevista con el objetivo de
detectar comorbilidades atópicas (rinitis, asma, dermatitis atópica) y un estudio
alergológico, pruebas de punción cutánea (SPT) con un panel de 17
aeroalérgenos y 22 alimentos de origen animal y vegetal, con el objetivo de
detectar comorbilidades atópicas (rinitis, asma, dermatitis atópica) y clasificar a
los pacientes en dos fenotipos principales (atópicos y no atópicos).
Estudio genético:
Se seleccionaron 27 polimorfismos de un sólo nucleótido (SNP) en cinco
genes candidatos previamente identificados como relevantes para la
fisiopatología EoE en base a su función en la respuesta inmune innata (TLR3,
TLR4, FOXP3, FLG y TSLP). Se utilizó la base de datos del proyecto HapMap
para seleccionar los Tag SNPs (tSNPs) con frecuencia del alelo minoritario
(MAF) igual o superior al 0,05 en población CEU, que nos permitieran capturar
en cada una de las regiones el 100% de los SNPs con r2>0,8. De acuerdo con
las reglas anteriores, se seleccionaron 27 tSNP que nos permitieron capturar 52
SNP.
El genotipado se realizó utilizando TaqMan® SNP Genotyping Assays en
un LightCycler. Para verificar la reproducibilidad y precisión inter-experimental,
el 8% de las muestras se duplicaron. Se impuso en el análisis una tasa de control
de calidad de muestra del 90% y una tasa de éxito de genotipado de SNP del
90%.
5. Resultados:
Se encontraron diferencias significativas en las frecuencias alélicas y
haplotípicas en 5 tSNP ubicados en el locus TSLP y un tSNP ubicado en el locus
TLR3, demostrándose una asociación estadística positiva con EoE. Se
analizaron las interacciones entre los loci TLR3 y TSLP. Los individuos
TLR3+/TSLP– y TLR3–/TSLP+ mostraron una susceptibilidad significativamente
reducida a EoE en comparación con los individuos TLR3–/TSLP– (OR=0,66,
p=0,036 y OR=0,23, p=0,00014, respectivamente). Asimismo, los individuos
TLR3+/TSLP+ mostraron una menor susceptibilidad de desarrollar EoE
(OR=0.16, p=0.0001). Sin embargo, la ganancia de interacción atribuida a la
combinación de ambos genes fue negativa (IG= –4,52%), lo que indica
redundancia o efecto independiente. Además, se encontró que el locus TLR3
estaba asociado con la sensibilización a aeroalérgenos y alimentos en pacientes
con EoE (OR=9,67, pc=0,025 y OR=0,53, pc=0,048, respectivamente).
No se encontraron diferencias significativas en el resto de los genes
estudiados (TLR4, FOXP3 y filagrina).
6. Conclusiones:
- Se describe por primera vez en la literatura una asociación del gen TLR3
con la susceptibilidad a padecer EoE.
- Demostramos, también por primera vez la replicación de la asociación del
gen TSLP con susceptibilidad a la EoE, en una población europea.
- En el estudio de interacción de ambos genes (TLR3y TLSP) demostramos
que las interacciones de ambos genes tienen redundancia o efectos
independientes en la susceptibilidad de desarrollar EoE.
- Describimos por primera vez en la literatura, que variantes en el gen TLR3
están estadísticamente asociadas con sensibilización a los aeroalérgenos
y a los alimentos, sugiriendo la posibilidad de que estas variantes puedan
actuar como marcadores de los diferentes endotipos de la EoE.
2022-11-07T10:18:40Z
2022-11-07T10:18:40Z
2022-09-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Ávila Castellano, M.d.R. (2022). Estudio de variantes genéticas asociadas a esofagitis eosinofílica. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/139049
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/710452018-03-16T07:55:46Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2018-03-16T07:55:46Z
urn:hdl:11441/71045
Evaluación de los resultados en salud tras la implementación de la tromboelastometría rotacional en pacientes sometidos a cirugía cardiovascular con circulación extracorpórea.
Sánchez Mora, Catalina
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
La cirugía cardiovascular asociada a circulación extracorpórea
ocasiona importantes trastornos en el sistema hemostático. Aproximadamente el 20% de los pacientes sometidos a cirugía cardiaca experimenta algún tipo de sangrado. En consecuencia, estos procesos se caracterizan por un alto consumo de productos hemoderivados, lo cual se traduce en un incremento de la morbilidad-mortalidad asociada a este tipo de procesos. Hasta el momento, la práctica transfusional empleada estaba basada en test clásicos de laboratorio, unido a la experiencia y toma de decisiones individuales del personal clínico. Ante las limitaciones de la metodología actual, nos planteamos que el uso de test viscoelásticos, como ROTEM®, junto a la implementación de algoritmos de transfusión específicos, debe conllevar un mejor manejo de la coagulopatía y el sangrado durante el proceso quirúrgico, y en consecuencia una terapia transfusional más específica y dirigida.
2018-03-16T07:55:46Z
2018-03-16T07:55:46Z
2018-03-12
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Rodríguez Martin, I. (2018). Evaluación de los resultados en salud tras la implementación de la tromboelastometría rotacional en pacientes sometidos a cirugía cardiovascular con circulación extracorpórea.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/71045
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-09-19T10:08:01Z
urn:hdl:11441/78637
Estudio de la interacción del VIP con linfocitos
Goberna Ortiz, Raimundo
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El péptido intestinal vasoactivo (VIP) fue aislado en 1970 por SAID y MUTT a partir del intestino delgado de cerdo. Desde esa fecha hasta la actualidad, el VIP ha pasado de ser considerado como una hormona de acción local o paracrina (POLAK, 1974) a ser considerado como un neuromodulador de acción local (GIACHETTI et al., 1977). Es por esto que, al VIO que se encuentra circulando libremente por el plasma, se le ha llegado a considerar como un simple remanente del liberado a nivel local por las terminaciones nerviosas. Por otro lado, los receptores y las acciones del péptido solo han sido estudiadas en diversas especies animales, ya que el estudio en la especie humana muestra, por la obtención del material de trabajo, una gran complejidad.
Debido a todo ello, tiene un gran interés el haber caracterizado el sistema receptor-efector para el VIP así como la activación por VIP de proteínas quinasas dependientes de AMPc en células mononucleares sanguíneas humanas (GUERRERO et al., 1981a y 1984), ya que estas células son células libres y no están inervadas. Es importante comentar el hecho de que esta población mononuclear no es una población homogénea, sino que es una mezcla de varios tipos celulares, por lo que, la subpoblación que liga específicamente al péptido, es desconocida.
Por todo lo anteriormente expuesto, el objetivo del presente trabajo es triple:
1. Caracterizar la subpoblación celular que, dentro de la población mononuclear total, liga específicamente al VIP.
2. Estudiar el posible papel que juega el VIP en la fisiología de las células mononucleares sanguíneas humanas. Para ello se ha elegido como tema de estudio el efecto del VIP sobre la proliferación linfocitaria, utilizando como modelo experimental el cultivo de linfocitos.
3. Estudiar las modificaciones que sufre el sistema receptor para el VIP en determinadas condiciones fisiopatológicas. Como situación fisiopatológica se ha elegido el ayuno y como modelo experimental células mononucleares sanguíneas de rata.
CONCLUSIONES
1. La población de células mononucleares sanguíneas humanas muestra una unión específica para el péptido intestina vasoactivo (VIP). En estas células, la constante de disoaciación global aparente (Kd) tiene un valor de 0,3 nM. La representación de Scatchard permite distinguir dos tipos de receptores: uno de alta afinidad (Kd = 0,11 nM) y baja capacidad de unión (4,6 fmol/106 cel) y, otro, de baja afinidad (Kd = 80 nM) y alta capacidad de unión (800 fmol/106 cel). En estas msimas células, el VIP estimula la producción de AMPc con un valor de Km = 0,09 nM.
2. La subpoblación mononuclear empobrecida en linfocitos T muestra una unión específica de VIP, con u valor de Kd = 2,4 nM. La representación de Scatchard revela la existencia de dos poblaciones de receptores: una de alta afinidad (Kd = 0,20 nM) y baja capacidad de unión (5,0 fmol/106 cel) y, otra, de baja afinidad (Kd = 80 nM) y alta capacidad de unión (590 fmol/106 cel). En esta subpoblación celular, el VIP también incrementa las concentraciones intracelulares de AMPc, con un valor de Km = 0,02 nM.
3. La subpoblación mononuclear empobrecida en monocidos también muestra una unión específica del péptido, con un valor de Kd = 10 nM. El análisis de Scatchard muestra la existencia de dos tipos de receptores: uno de alta afinidad (Kd = 0,16 nM) y baja capacidad de unión (4,0 fmol/106 cel) y, otro, de baja afinidad (Kd = 36 nM) y alta capacidad de unión (450 fmol/106 cel). También en esta subpoblación celular el VIP estimula la producción de AMPc, teniendo la Km un valor de 0,06 nM.
4. La subpoblación celular enriquecida en linfocitos T, con las condiciones experimentales utilizadas, no muestra ninguna unión específica para el VIP, ni revela un aumento en las concentraciones intracelulares de AMPc bajo la acción del VIP.
5. La subpoblación celular enriquecida en monocitos no muestra, con las condiciones experimentales utilizadas, ninguna unión específica para el VIP. Tampoco se ha observado ninguna correlación positiva entre la cantidad de 125I-VIP unido a una oblación mononuclear total y el número de monocitos presente en dicha población, tal y como indica el coeficiente de correlación (r = -0,3376) y el test de la t de Student (p < 0,05).
6. Otros tipos celulares, tal y como hematíes y plaquetas, no muestran con las condiciones experimentales utilizadas ninguna unión específica del VIP.
7. A partir de lo expuesto en los puntos anteriores, se concluye que la subpoblación celular que liga específicamente al VIP es la formada por linfocitos B t células del sistema K-NK.
8. El VIP muestra un efecto estimulador sobre la incorporación de 3H-Timidina en linfocitos humanos. Este efecto es dependiente del tiempo y de la concentración de VIP utilizada.
9. Las células mononucleares sanguíneas de rata muestran una unión específica para el VIP, obteniéndose una Kd = 1 nM. La representación de Scatchard muestra dos tipos de receptores: uno de alta afinidad (Kd = 0,05 nM) y baja capacidad de unión (2,6 fmol/106 cel) y, otro, de baja afinidad (Kd = 142 nM) y alta capacidad de unión (1966 fmol/106 cel).
10. La unión del VIP a estas células es un proceso dependiente del tiempo y es reversible, teniendo lugar la disociación según una cinética de segundo orden, lo cual indicia la existencia de dos poblaciones de receptores que tienen respectivamente 380 y 27 minutos de tiempo de semidisociación.
11. Las células mononucleares sanguíneas de ratas ayunadas muestran una mayor unión para el VIP. Esta unión se incremente conforme aumenta el periodo de ayuno (1,3 y 5 días).
12. Esta mayor unión, tal y como indican los datos estequiométricos (Kd = 0,3 nM) y el análisis de Scatchard (Kd = 0,025 y 83,0 nM y 2,8 y 1730 fmol/106 cel de capacidad de unión para los receptores de alta y baja afinidad respectivamente), es debida a una mayor afinidad del receptor por el péptido y no a un aumento en el número de sitios de unión.
13. El incremento en la afinidad encontrado en el ayuno es debido a una menor velocidad de disociación del complejo hormona-receptor.
14. El aumento de la afinidad encontrado durante el ayuno es revertido con la realimentación.
2018-09-19T10:08:01Z
2018-09-19T10:08:01Z
1985-02-01
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/78637
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/801792024-02-14T09:19:52Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2018-11-14T13:12:50Z
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Valoración de los efectos saludables de péptidos bioactivos vegetales: efectos inmunomoduladores, antioxidantes y metabólicos.
Carrillo Vico, Antonio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El uso de péptidos bioactivos, procedentes de los alimentos, es un nuevo hallazgo en el campo de la nutrición. El objetivo último del uso de estos péptidos es modular las funciones biológicas y tratar, prevenir o reducir el riesgo de enfermedad. La hidrólisis enzimática es uno de los métodos más utilizados para la obtención de estos péptidos, debido al mantenimiento
del valor nutricional de la proteína de origen y a la falta de formación de compuestos indeseables. En este estudio hemos evaluados si la administración in vitro de péptidos procedentes de los aislados proteicos de altramuz (LPHs), obtenidos utilizando la endopeptidasa Alcalasa 2.4 L, ejercen un efecto inmunomodulador y antioxidante sobre células de sangre periférica humana (PBMCs) de voluntarios sanos. Tras evaluar que estos péptidos redujeron la proliferación celular sin ejercer ningún efecto citotóxico, se estudiaron la producción de citoquinas pro- y antiinflamatorias y la expresión génica y actividad de enzimas clave implicadas en la prevención
del estrés oxidativo. Los LPHs disminuyeron la respuesta Th1, aumentando el balance Th2/Th1 y, además, aumentaron la capacidad antioxidante total de las PBMCs a través del aumento en las actividades de las enzimas superóxido dismutasa y catalasa. Estos hallazgos nos llevaron a formular una bebida experimental basada en estos hidrolizados, para evaluar in vivo, a través de un ensayo alimentario en voluntarios sanos, su seguridad, su tolerabilidad y su eficacia terapéutica. La ingesta diaria de esta bebida durante 28 días fue segura y bien tolerada. Además de confirmar los resultados obtenidos en los estudios in vitro sobre su acción inmunomoduladora y antioxidante, ésta mostró tener efectos protectores sobre el perfil lipídico, sobre todo en aquellos varones con altos niveles basales de algunos parámetros indicadores de un mayor riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. Estos resultados establecen evidencias científicas robustas sobre la bioactividad y las propiedades de estos LPHs. El objetivo último de esta tesis doctoral es poder transferir estos conocimientos a las empresas interesadas en el diseño y producción de alimentos biofuncionales (bebidas, geles, snacks, etc.) enfocados en mejorar el bienestar y la calidad de vida de la población humana.
2018-11-14T13:12:50Z
2018-11-14T13:12:50Z
2018-11-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Cruz Chamorro, I. (2018). Valoración de los efectos saludables de péptidos bioactivos vegetales: efectos inmunomoduladores, antioxidantes y metabólicos.. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80179
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2016-02-04T11:39:00Z
urn:hdl:11441/34087
Papel de la proteína quinasa dependiente de cGMP (PKG) y de la c-Src tirosina quinasa en la regulación antagónica del óxido nítrico sobre la apoptosis
Bedoya Bergua, Francisco Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Proteína quinasa
En los últimos años se han acumulado evidencias concernientes al papel de la apoptosis en el control de la población de células beta en la patogénesis de la IDDM. Así se ha visto que la apoptosis en células beta de roedores está mediada por la generación de óxido nítrico (NO) en un proceso regulado por citoquinas inflamatorias. Sin embargo respecto al papel del NO en el control de la apoptosis se han encontrado varios mecanismos por los que altas concentraciones de NO la inducen y bajas concentraciones la previenen. En la primera parte de esta Tesis mostramos que altas concentraciones de No inducen la muerte celular por apoptosis en las célula productoras de insulina RINm5F. Nuestros resultados indican que altas concentraciones de No inducen la activación de acciones proapoptóticas como la fragmentación de ADN, activación de caspasa 3, liberación de citocromo c, y degradación de Bcl-2. Además induce la activación de acciones antiapoptóticas como la activación de la PKG. Debido a su mayor intensidad las acciones proapoptóticas predominan sobre las acciones antiapoptóticas. Las acciones proapoptóticas son independientes del sistema de señalización sGC/PKG, aun más nuestros resultados muestran que los índices apoptóticos aumentan de magnitud cuando en condiciones de apoptosis se inhibe la actividad de la PKG con el KT-5823, indicando que el NO activa a la PKG como parte de una respuesta anti-apoptótica. En estudios comparativos realizados tanto in vivo como in vitro utilizando dadores de No y el atractilósido encontramos que la regulación de la liberación de citocromo c por las mitocondrias es un elemento crítico en la apoptosis inducida por el NO y que dicha acción está relacionada con mecanismos dependientes de la apertura del poro de membrana responsable de la permeabilidad transitoria (PT) de la mitocondria. En la segunda parte de esta Tesis mostramos que la retirada de suero del medio de cultivo induce la muerte celular por apoptosis en células productoras de insulina RINm5F, la apoptosis fue seguida a través del estudio de índices como la liberación de citocromo c de la mitocondria, activación de caspasa 3, degradación de Bcl-2 y un nuevo índice llamado actividad de Bcl-2 quinasa, que consiste en determinar la capacidad que tienen los homogeneizados de fosforilar a Bcl-2 inmunoprecipitada. Nuestros resultados muestran por primera vez que bajas concentraciones de DETA/NO (10 μM) inducen la reducción de la liberación de citocromo c, disminución de la activación de caspasa 3, prevención de la degradación de Bcl-2 y aumento de la actividad Bcl-2 quinasa. Estudios con inhibidores del sistema sGC/PKG, el ODQ y el KT 5823, revelan que estas acciones son dependientes de la activación de la sGC y de la PKG. El DETA/NO induce la autofosforilación de la c-Src tanto in vivo como in vitro y la c-Src activa es capaz de inducir la fosforilación en tirosina de Bcl-2 in vitro. Debido a que la inhibición de la c-Src por el PP1 cancela las acciones del DETA/NO sobre la activación de la PKG, disminución de la activación de caspasas, disminución de la liberación de citocromo c de la mitocondria, prevención de la degradación de Bcl-2, e incremento de la actividad de Bcl-2 quinasa, proponemos que tanto la generación de cGMP y la activación de la c-Src son requeridos para la señalización de las acciones antiapoptóticas del NO sobre la mitocondria.
2016-02-04T11:39:00Z
2016-02-04T11:39:00Z
2000-12-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Tejedo Huamán, J.R. (2000). Papel de la proteína quinasa dependiente de cGMP (PKG) y de la c-Src tirosina quinasa en la regulación antagónica del óxido nítrico sobre la apoptosis. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/34087
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/34087
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2021-02-15T19:49:40Z
urn:hdl:11441/105000
Valoración de un sistema automatizado de flujo continuo en bioquímica clínica
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
El objetivo de la presente tesis ha sido exponer de forma critica y sistematizada la experiencia acumulada durante tres años en el uso de sistemas automatizados de flujo continuo en bioquimica clinica para conocer sus ventajas reducir inconvenientes y tratar de ampliar el campo de sus aplicaciones en el futuro. Eliminar la rutina reducir el tiempo y costo de las determinaciones son tres ventajas evidentes de los sistemas automatizados que junto con el incremento de determinaciones que la clinica actual precisa han hecho casi obligatorio el uso de estos sistemas en los servicios centralizados de analisis clinicos. El estudio realizado en la presente tesis de los sistemas de flujo continuo demuestra su alta fiabilidad reproductibilidad y sensibilidad. Para obviar posibles errores metodologicos el autor ha estudiado diversos sistemas de control en los pasos mas importantes del procesamiento de las muestras hasta su valoracion final seleccionando el mas adecuado. En el futuro se prevee su aplicacion para radioinmunoensayo y los controles en continuo de pacientes en estado critico.
2021-02-15T19:49:40Z
2021-02-15T19:49:40Z
1978-09-14
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Mateo Cañas, J. (1978). Valoración de un sistema automatizado de flujo continuo en bioquímica clínica. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/105000
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-05-23T12:47:17Z
urn:hdl:11441/75022
Relaciones entre el núcleo amigdalino y el hipocampo en el gato, determinadas por medio de post-descargas
Mir Jordano, Diego
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
A lo largo de nuestro siglo, los conocimientos sobre la fisiología del sistema nervioso se han incrementado extraordinariamente. La aparición y el progresivo desarrollo de las técnicas electrofisiológicas, así como el perfeccionamiento de los métodos estereotáxiso han hecho posible tales avances.
Dentro del sistema nervioso central, diversas escuelas han orientado sus estudios hacia parcelas muy concretas del mismo. En especial, la escuela de Yale, representada por Fulton, MacLean, Delgado, Kaada, Klüver y Pribram, se ha ocupado del estudio del sistema límbico. Tales estudios se han orientado bien hacia el análisis de su papel regulador del comportamiento emocional o bien hacia su posible participación en la génesis de la epilepsia psicomotora. Otro núcleo de estudios se ha centrado sobre las interrelaciones funcionales de las distintas estructuras que forman el sistema límbico, siendo quizás este último aspecto el que se muestra más confuso en la literatura actual.
Ya dentro del sistema límbico, son el núcleo amigdalino y el hipocampo las estructuras a las que se ha prestado mayor atención (Magnus y Naquet, 1961). Por otra parte, y como señala Jasper (1961), las post-descargas (PDs en adelante) de corta duración y relativamente localizadas, pueden ser utilizadas como medio para estudiar las conexiones funcionales entre distintas áreas cerebrales.
El propósito de nuestra investigación ha sido el siguiente:
a) Determinar los umbrales de estimulación necesarios para la obtención de PDs en el núcleo amigdalino y en el hipocampo.
b) Analizar las características de las PDs obtenidas.
c) Registrar las respuestas motoras y vegetativas provocadas por la estimulación del núcleo amigdalino y del hipocampo.
d) Utilizar los resultados obtenidos como medio de análisis de las relaciones funcionales entre ambas estructuras.
También se ha realizado un estudio introductorio sobre la anatomía y fisiología del sistema límbico, haciéndose especial referencia a las estructuras objeto de nuestro estudio.
CONCLUSIONES
1. En la presente investigación se han utilizado las PDs como medio de análisis de las relaciones funcionales entre el núcleo amigdalino y el hipocampo. Para ello se ha puesto a punto la metodología a seguir.
2. Se señala la necesidad de dejar suficiente intervalo de tiempo entre estimulaciones sucesivas para obtener respuestas eléctricas cerebrales de características idénticas. Este intervalo se ha fijado entre 5 y 10 minutos.
3. Los umbrales precisos para la obtención de PDs son inferiores en hipocampo que en amígdala. Dentro del núcleo amigdalino, los menores umbrales corresponden al núcleo basal y los más altos al núcleo central. El hipocampo produce PDs en las estructuras contralaterales con menores umbrales que en los núcleos amigdalinos homolaterales; en los núcleos amigdalinos ocurre un hecho opuesto.
4. Se describen como características de los núcleos amigdalinos PDs con frecuencias de 10-12 cps. Las PDs de mayor duración corresponden al núcleo basal, mientras que la duración menor corresponde al núcleo central. En hipocampo, frecuencias de 20-30 cps son características del hipocampo dorsal y posterior, mientras que el hipocampo ventral muestra un ritmo muy constante de 7-8 cps. PDs de hasta 80 segundos de duración se obtienen en el hipocampo ventral, mientras que las PDs de mayor amplitud se obtienen en el hipocampo doral y posterior.
5. Se presentan los modelos de PDs correspondientes a cada estructura estudiada, así como los modelos que en cada una de ellas produjo la estimulación de las restantes. Con arreglo a sus características las PDs se clasifican en propagadas cuando reproducen el modelo típico de la estructura estimulada y provocadas cuando reproducen el modelo de la estructura en que se realizó el registro.
6. Se describe un efecto inhibidor de la estimulación del núcleo central de la amígdala sobre las puntas que espontáneamente aparecen en el registro de hipocampo ventral.
7. Se señala una acción inhibidora de la producción y propagación de PDs de el núcleo central de la amígdala, mientras el núcleo basal tiene un papel facilitador. En conjunto, la amígdala inhibe la propagación de las PDs producidas en el hipocampo dorsal y posterior.
8. La actividad en brotes que se registra en los núcleos amigdalinos está en relación con la respiración y es activada por los estímulos olfatorios y por la estimulación eléctrica de los núcleos central y lateral de la amígdala. Dicha estimulación aumenta la amplitud y frecuencia de los brotes, pudiendo propagarse al hipocampo ventral. Los estímulos olfatorios provocan la aparición de estos brotes en el hipocampo dorsal y posterior, por lo cual existen relaciones funcionales entre las estructuras olfatorias y los núcleos amigdalinos y el hipocampo.
9. La estimulación del núcleo amigdalino provoca en un 90% de los casos la aparición de respuestas motoras y vegetativas; la estimulación del hipocampo produce estas respuestas en menor grado.
10. Las estimulaciones con intensidades de valor supra-umbral aumenta la frecuencia, duración y amplitud de las PDs sobre todo en el núcleo lateral de la amígdala y en el hipocampo doral y posterior. Las PDs que sufren menos modificaciones son las obtenidas en el núcleo central de la amígdala.
11. Los resultados obtenidos muestran que la anestesia barbitúrica, en contra de lo afirmado por otros autores, no repercute ni sobre los umbrales ni sobre la propagación de PDs dentro del sistema límbico.
2018-05-23T12:47:17Z
2018-05-23T12:47:17Z
1972-01-04
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Delgado García, J.M. (1972). Relaciones entre el núcleo amigdalino y el hipocampo en el gato, determinadas por medio de post-descargas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/75022
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Estados Unidos de América
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2017-06-09T06:31:53Z
urn:hdl:11441/61143
Alpha-synuclein and immune system crosstalk in parkinson's disease; therapeutic approaches of its modulation by molecular chaperones
Roodveldt, Cintia
Pozo Pérez, David
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
This Doctoral Thesis is focused on the interplay between the immune system and the Parkinson’s related protein alpha-Synuclein. The first part of this work was to study the impact of extracellular aSyn priming on the microglial innate immune response following TLR stimulation. As a result we found that extracellular non-aggregated alpha-synuclein could potentially act as a priming factor for microglia to produce exacerbated TLR7 and TLR1/2 responses upon further challenge as compared to the same challenge in the absence of such priming.
The second part of my PhD study was centred in testing immunotherapeutic approaches for Parkinson’s Disease. During the last decade, it has become accepted that there is a link between alpha-synuclein and the sustained neuroinflammation and immune imbalance associated to Parkinson’s disease. As a result, different approximations have been tested to try to restore it. Molecular chaperones have a key role in preventing abnormal protein aggregation by interacting with misfolding proteins, including alpha-synuclein. On the other hand, several members of the chaperome network have shown immune modulatory capabilities and to be potentially useful for treating cancer and certain infections. In order to put in common these two features, which are particularly relevant for PD and other neurodegenerative misfolding diseases, I have characterized the peripheral immune response generated by immunization with the complex-forming Hsp70 and aSyn combination in the absence of added adjuvant. (A.Labrador-Garrido et al. IID 2014); performed a screen of a large set of chaperones on their immune-modulatory capabilities to find other promising candidates, as a result of the screen I have characterized the peripheral immune response elicited by immunization of healthy mice with Grp94 or FKBP4, two selected chaperone candidates (A.Labrador-Garrido et al. FASEBJ 2015). Finally we decided to investigate the peripheral immune response and the associated immunity at the CNS level, elicited in a PD mouse model by prophylactic immunization with Grp94 in combination with monomeric aSyn (A.Labrador-Garrido*, J.Villadiego*, el al. JNeurosci 2017 –in preparation-)
2017-06-09T06:31:53Z
2017-06-09T06:31:53Z
2017-05-22
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Labrador Garrido, A. (2017). Alpha-synuclein and immune system crosstalk in parkinson's disease; therapeutic approaches of its modulation by molecular chaperones. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/61143
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http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1001542024-02-13T09:22:42Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_11524col_11441_10993
2020-08-07T11:11:25Z
urn:hdl:11441/100154
Implicación del sistema GSTT1 en la patogénesis de la hepatitis inmune de novo
Núñez Roldán, Antonio
Aguilera García, Isabel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Con el fin de dilucidar los mecanismos fisiopatológicos implicados en el desarrollo de la
hepatitis inmune de novo planteamos una serie de objetivos, los cuales se recogen en el
siguiente resumen:
1. Explorar la distribución celular de la proteína GSTT1 y estudiar la implicación de los
anticuerpos GSTT1 específicos en el fracaso del órgano trasplantado.
Con el fin de conocer si los anticuerpos GSTT1 específicos juegan un papel importante en el
fracaso del injerto, decidimos estudiar si la proteína en cuestión podía expresarse en la
superficie celular para su posterior reconocimiento por los anticuerpos citados anteriormente.
Para ello realizamos dos abordajes experimentales distintos (inmunocitoquímica y citometría
de flujo) usando la línea celular hepaRG, la cual podía conseguimos diferenciar en hepatocitos
y colangiocitos. Como resultado de los experimentos realizados, podemos determinar que la
proteína GSTT1 puede localizarse en la membrana celular, a pesar de ser una proteína
citoplasmática. De tal forma que la escena patológica ocurriría en un ambiente de alto estrés
oxidativo, provocando que la proteína GSTT1 se exprese en la membrana celular, y por tanto
los anticuerpos GSTT1 específicos podrían reconocer la diana antigénica y poner en marcha los
mecanismos fisiopatológicos responsables de la pérdida del órgano trasplantado.
Teniendo en cuenta lo descrito anteriormente, decidimos estudiar muestras de suero de
pacientes con y sin enfermedad para determinar las subclases de los anticuerpos anti-GSTT1,
con el objetivo de determinar si existe algún patrón característico que nos permita diferenciar
ambos grupos de estudio. Estos experimentos fueron llevados a cabo mediante la técnica de
ELISA. Tras analizar los resultados obtenidos podemos destacar que la combinación IgG1+IgG4
es la característica mayoritaria en ambos grupos de pacientes. Además, pacientes que han
desarrollado la enfermedad presentaban una proporción IgG1/IgG4 superior a 1 en el
momento del diagnóstico, cosa que no ocurría en los pacientes sin esta patología.
2. Determinar la presencia de linfocitos T alo-específicos frente a la proteína GSTT1.
Por otro lado, decidimos estudiar la respuesta celular T y su posible implicación en el
desarrollo de la HI de novo. Inicialmente, realizamos un estudio experimental con el objetivo
de determinar la presencia de linfocitos T alo-específicos frente a la diana antigénica. Para ello
se utilizaron células mononucleares de sangre periférica de pacientes de los distintos grupos
de estudio, la tecnología de los pentámeros/tetrámeros y la técnica de citometría de flujo.
Estos pentámeros/tetrámeros son combinaciones sintéticas de moléculas MHC con una
secuencia peptídica. Mediante un programa de predicción seleccionamos las mejores
combinaciones MHC-péptido. Los pentámeros llevan asociada una molécula MHC de clase I (se
ensayaron 3 combinaciones distintas), mientras que los tetrámeros una molécula MHC de
clase II (se ensayaron 4 combinaciones distintas). Tras analizar los resultados obtenidos,
podemos determinar que tanto el grupo 1 (pacientes con la patología) como el grupo 3
(pacientes que únicamente tienen la condición de riesgo) presentan reactividad en clase I con
el pentámero A*01. Esto concuerda con nuestra hipótesis, ya que los pacientes del grupo 3, al
carecer de anticuerpos GSTT1-específicos, no disponen de linfocitos B alo-específicos que
actúen como células presentadoras de antígeno, a pesar de presentar linfocitos T aloespecíficos. Por tanto, hemos conseguido demostrar la presencia de linfocitos T alo-específicos
frente a una secuencia concreta de la proteína diana en combinación con una molécula MHC
característica en células de pacientes.
3. Dilucidar el papel que desempeñan los linfocitos T alo-específicos de GSTT1 en el
rechazo del injerto.
Una vez hallada la presencia de linfocitos T alo-específicos frente a GSTT1, nos planteamos
esclarecer los posibles mecanismos implicados en el desarrollo de la patología. En este caso se
usaron células mononucleares de sangre periférica aisladas de pacientes de los distintos
grupos de estudio y la técnica de citometría de flujo. La activación de dichas células se realizó
con péptidos de GSTT1. La diana antigénica se añadía al medio de cultivo y se dejaba un
tiempo de incubación de 24 horas. Todos los pacientes con HI de novo presentan activación en
alguna población de linfocitos T, si bien llama la atención que no son las poblaciones
convencionales CD4+
o CD8+
sino sobre todo, las dobles negativas (DN) CD4-
CD8-
. Los datos de
activación linfocitaria registrados en conjunto con la existencia de linfocitos T alo-específicos,
sugieren la participación de la respuesta T en el fracaso del injerto.
2020-08-07T11:11:25Z
2020-08-07T11:11:25Z
2020-07-01
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
https://hdl.handle.net/11441/100154
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2017-10-31T11:22:08Z
urn:hdl:11441/65568
Sird, una proteina con dominio uspa y sustrato de sicipk6, regula la respuesta inmune en solanáceas
Pozo Cañas, Olga del
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Bioquímica
Tesis descargada desde TESEO
2017-10-31T11:22:08Z
2017-10-31T11:22:08Z
2011-09-30
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Gutiérrez Beltrán, E. (2011). Sird, una proteina con dominio uspa y sustrato de sicipk6, regula la respuesta inmune en solanáceas. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/65568
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2022-10-31T12:38:45Z
urn:hdl:11441/138532
Evaluación inmunonutricional del amaranto. Desarrollo de productos proteicos de alto valor añadido
Montserrat de la Paz, Sergio
Millán-Linares, María del Carmen
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2022-10-31T12:38:45Z
2022-10-31T12:38:45Z
2022-07-08
2023-07-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Martínez López, A. (2022). Evaluación inmunonutricional del amaranto. Desarrollo de productos proteicos de alto valor añadido. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/138532
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/859592024-02-14T09:25:22Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2019-04-25T10:39:28Z
urn:hdl:11441/85959
Mecanismos inmunoreguladores implicados en la disminución de respuesta vacunal en distintos escenarios marcados por la inmunosenescencia: sujetos ancianos y sujetos con infección por VIH
Leal Noval, Manuel
Pacheco López, Yolanda María
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
En la actualidad se está produciendo un cambio demográfico debido al envejecimiento de la población. Al aumentar la edad, el sistema inmunitario humano experimenta cambios característicos, conocidos como inmunosenescencia, que generan respuestas inmunológicas subóptimas. La inmunosenescencia natural o “inmunosenescencia cronológica” se refiere al deterioro progresivo del sistema inmunológico asociado a la edad.
Debido a este proceso se produce una alteración homeostática del sistema inmunológico y se generan deficiencias en la función celular B y T. En las células T se originan cambios relevantes, como la reducción de células naïve, debido principalmente a la menor timopoyesis que tiene lugar durante el envejecimiento. Además, se produce por compensación homeostática una acumulación de células T efectoras y memoria con escasa diversidad de sus receptores, con una elevada proliferación, activación, senescencia y resistencia a la apoptosis. Debido a estas alteraciones homeostáticas también se produce una expansión de las células T reguladoras (Treg), células supresoras de la respuesta inmunitaria, que contribuye a la desregulación del sistema. En la población anciana se presenta asimismo una inflamación sistémica característica del envejecimiento, proceso conocido como “inflammaging”, que también dificulta la función inmunitaria. Estas alteraciones conducen a que se generen respuestas inmunológicas subóptimas, provocando, entre otras complicaciones, baja efectividad de las vacunas, lo que contribuye a un aumento de la morbimortalidad de los ancianos.
El virus de la gripe, o virus de la influenza, causa una elevada morbimortalidad en la población anciana. La vacuna frente a este virus es el método más efectivo frente a la infección y las complicaciones relacionadas con la enfermedad, sin embargo, los ancianos presentan una baja eficacia de la vacuna debido a las alteraciones de su sistema inmunológico.
El objetivo de la presente Tesis Doctoral fue explorar la asociación entre distintos parámetros homeostáticos en la población anciana (función tímica, proliferación de lascélulas T, frecuencia y fenotipo de las Treg y biomarcadores de inflamación) con la respuesta a la vacuna frente a influenza. Este estudio se desarrolló en el trabajo “T-cell proliferative homeostatic alterations are negatively associated with the vaccine response against influenza in elderly people” (en revisión). Observamos que las alteraciones homeostáticas proliferativas que se desarrollan en las subpoblaciones de maduración de las células T CD4 y CD8, incluyendo las Treg, se asocian a una menor respuesta a la vacuna frente a influenza. Estas alteraciones homeostáticas podrían estar íntimamente relacionadas con el aumento de inflamación sistémica y con la disminución de la función tímica asociadas al envejecimiento.
Un espectro similar de alteraciones inmunológicas se produce en personas infectadas por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), incluso las que están recibiendo un tratamiento antirretroviral combinado (TARc) supresor, proceso conocido como “inmunosenescencia prematura”, un proceso prematuro y acentuado de la “inmunosenescencia cronológica”. Estos procesos comparten bastantes rasgos, pero no todos. Debido a la exposición al VIH y sus antígenos se produce una depleción masiva de linfocitos T CD4 y un gran desgaste inmunológico, con expansiones oligoclonales. Además, se produce una reducción de la función del timo y, por tanto, de células naïve, debido posiblemente al timotropismo del VIH. Por otro lado, se produce un aumento en los niveles de marcadores de inflamación sistémica. Además, en este escenario también se ha observado una expansión de células Treg y de células efectoras.
Los sujetos infectados por VIH tienen un riesgo elevado de complicaciones hepáticas, puesto que hay una elevada tasa de coinfección por el Virus de la Hepatitis B (VHB) y por el Virus de la Hepatitis C (VHC). La coinfección por el VHB o el VHC aumenta notablemente la morbimortalidad hepática en estos pacientes VIH. La vacunación frente a VHB es la manera más importante de prevenir la coinfección, pero los individuos VIH muestran una baja respuesta a la vacuna. Además de la baja tasa de respuesta a la vacuna, en aquellos pacientes que responden a ella, la magnitud de los anticuerpos protectores es baja y, por consiguiente, se pierden rápidamente. Estudios previos sugieren que Maraviroc (MVC), fármaco antirretroviral, posee propiedades inmunomoduladoras que pueden impactar de manera favorable en la respuesta inmunitaria y por tanto podrían favorecer la respuesta vacunal frente a VHB. Por ello, uno de los objetivos de la presente tesis doctoral fue analizar si un tratamiento antirretroviral combinado (TARc) que contenía MVC se asociaba a una mejor respuesta a la vacuna del VHB en pacientes infectados por VIH. Este objetivo se abordó en el trabajo “Association between a suppressive combined antiretroviral therapy containing maraviroc and the hepatitis B virus vaccine response” Antimicrob Agents Chemother 2017; 62:e02050-17. Observamos que un TARc que incluía MVC se asociaba con una mayor magnitud de la respuesta a la vacuna frente a VHB en sujetos VIH menores de 50 años. Por tanto, un régimen conteniendo MVC durante el protocolo de inmunización podría ser una estrategia terapéutica adecuada para mejorar la respuesta vacunal en estos sujetos.
Tras este trabajo se extendió su análisis, incluyendo variables inmunológicas para conocer los posibles factores, relacionados con la inmunosenescencia, que pudieran mediar en el impacto de MVC sobre la respuesta a la vacuna frente al VHB. Por tanto, exploramos el potencial efecto de un TARc que incluía MVC en diferentes parámetros relacionados con la inflamación, la función de las células T, incluidas las Treg, y de células dendríticas, que pudieran estar relacionados con la efectividad de la vacuna en la población VIH. Este análisis se desarrolló en el trabajo “Improved CD4 T-cell profile in HIV-infected subjects on maraviroc-containing therapy is associated with better responsiveness to HBV vaccination” J Transl Med 2018; 16:238. Observamos que los pacientes tratados con un TARc incluyendo MVC mostraron un perfil inmunológico menos activado, con mayor contribución de las células T recientemente emigradas del timo y una menor frecuencia de células Treg, perfil que se asocia con una mejor respuesta a la vacuna frente al VHB. Estos datos nos llevan a especular que MVC podría tener un efecto regenerador sobre el sistema inmunitario, promoviendo la función tímica y disminuyendo la proliferación homeostática compensatoria, lo que le permitiría repercutir también en un menor estado proinflamatorio.
2019-04-25T10:39:28Z
2019-04-25T10:39:28Z
2019-04-08
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Herrero Fernández, I. (2019). Mecanismos inmunoreguladores implicados en la disminución de respuesta vacunal en distintos escenarios marcados por la inmunosenescencia: sujetos ancianos y sujetos con infección por VIH. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/85959
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/314652024-02-13T21:57:33Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2015-12-03T13:05:50Z
urn:hdl:11441/31465
Efecto de la administración de melatonina en voluntarios sanos mayores de 65 años
Aramburu Bodas, Oscar
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Geriatría
JUSTIFICACIÓN
La evolución de los indicadores demográficos demuestra de forma clara la fuerte tendencia hacia un importante envejecimiento de la población en nuestro país. Con ello cada vez son más frecuentemente patologías o trastornos de la ancianidad, siendo uno de ellos el problema del insomnio. Se le considera un síndrome geriátrico por su alta prevalencia, tiene una etiología multicausal y su tratamiento farmacológico no está exento de riesgo.
HIPÓTESIS
En base a la elevada prevalencia de los trastornos del mayor y los potenciales efectos secundarios de la medicación empleada para su tratamiento, queríamos investigar la eficacia dela melatonina como agente hipnótico natural.
OBJETIVO PRINCIPAL
Determinar los efectos de la administración de melatonina en voluntarios sanos mayores de 65 años sobre la calidad y el ritmo de sueño-vigilia.
OBJETIVOS SECUNDARIOS
Valorar la capacidad de interrumpir el tratamiento hipnótico-sedante durante la administración de melatonina.
Determinar sus posibles efectos sobre: Función Cognitiva, ABVD, Percepción de Calidad de Vida, Sistema Inmunológico, Sistema Metabólico, Sistema Endocrino y H. Nutricional.
DISEÑO
Ensayo clínico cruzado, no secuencial, doble ciego del efecto melatonia vs placebo, de medidas repetidas en el que participaron 22 voluntarios sanos mayores de 65 años.
RESULTADOS
Ninguno de los contrastes resultó significativo al menos con un nivel de riesgo de 0,05 al analizar los parámetros hematológicos, bioquímicos, hormonales y de inmunidad celular y humoral.
Hubo una disminución significativa de los trastornos de sueño entre los voluntarios, de sintomatología ansiosa-depresiva y un aumento o mejoría de percepción de apoyo social al comparar el par basal-melatonina. Ninguno mostró excesiva somnolencia diurna o confusión que desaconsejara su empleo para el tratamiento del insomnio del mayor.
2015-12-03T13:05:50Z
2015-12-03T13:05:50Z
2005-07-02
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Garzón Rodríguez, C. (2005). Efecto de la administración de melatonina en voluntarios sanos mayores de 65 años. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/31465
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/31465
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
oai:idus.us.es:11441/156152018-11-26T10:04:31Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2014-11-27T11:58:30Z
urn:hdl:11441/15615
Acción de la melatonina en las enfermedades autoinmunes artritis reumatoide y Lupus eritemmatoso sistémico
Osuna Fernández, María del Carmen
Molinero Hueso, Patrocinio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Melatonina
Lupus eritematoso
Artritis reumatoide
2014-11-27T11:58:30Z
2014-11-27T11:58:30Z
2004
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Jiménez Caliani, A.J. (2004). Acción de la melatonina en las enfermedades autoinmunes artritis reumatoide y Lupus eritemmatoso sistémico. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/15615
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/15615
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
oai:idus.us.es:11441/935472024-02-13T20:16:03Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2020-02-24T11:34:25Z
urn:hdl:11441/93547
Efecto protector del aceite de oliva sobre la activación de la Microglía
Millán-Linares, María del Carmen
Montserrat de la Paz, Sergio
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Un posible enfoque terapéutico para el tratamiento de enfermedades neuroinflamatorias se podría basar en la inhibición del fenotipo de la microglía M1 mientras se estimula el fenotipo M2.
Nuestra hipótesis es que el tipo de ácidos graso (FA) de la dieta en las lipoproteínas ricas en triglicéridos (TRL) postprandiales humanas podría modular la plasticidad de la microglía. Para ello, aislamos las TRL en el pico hipertrigliceridémico postprandial de muestras de sangre de voluntarios sanos trás la ingesta de una comida rica en FAs saturados (SFAs), FAs monoinsaturados (MUFAs) o MUFAs más FAs poliinsaturados de cadena larga omega-3 (PUFAs). Observamos que las TRL-MUFAs potencian la polarización hacia microglía M2, mientras que las TRL-SFAs hacen que la microglía sea polarizada a un fenotipo M1. Además, en comparación con los SFAs de la dieta, los MUFAs produjeron un perfil proinflamatorio menor en el cerebro de los ratones alimentados con una dieta rica en grasa. Nuestro estudio subraya el papel de las TRL postprandiales como una entidad metabólica en la regulación de la plasticidad de la microglía y ofrece una comprensión de los mecanismos por los cuales los FAs de la dieta juegan un papel en la respuesta inmune innata en el sistema nervioso central.
Del mismo modo evaluamos los efectos neuroprotectores de compuestos menores encontrados en la fracción insaponificable (UF) y en la fracción fenólica (PF) del aceite de oliva virgen (VOO) en células microgliales BV2 y en el cerebro de ratones con obesidad inducida por dieta alta en grasas (HFD) a través de RT-qPCR, ELISA y técnicas de citometría de flujo. Observamos que la UF y la PF potencian la polarización de la microglía hacia un fenotipo M2, mientras que la microglía estimulada con LPS es propensa al fenotipo M1. Además, en comparación con los SFAs de la dieta, el VOO produjo un perfil proinflamatorio menor en el cerebro de los ratones.
Estos interesantes hallazgos abren nuevas oportunidades para desarrollar estrategias nutracéuticas con el aceite de oliva como la fuente principal de MUFAs, especialmente el ácido oleico, y de los compuestos menores del aceite de oliva virgen para prevenir el desarrollo y la progresión de enfermedades relacionadas con la neuroinflamación.
2020-02-24T11:34:25Z
2020-02-24T11:34:25Z
2020-02-06
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Toscano Sánchez, M.d.R. (2020). Efecto protector del aceite de oliva sobre la activación de la Microglía. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/93547
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
info:eu-repo/semantics/openAccess
Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
oai:idus.us.es:11441/1263612024-02-17T17:54:09Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2021-09-30T07:08:07Z
urn:hdl:11441/126361
Análisis del perfil de respuesta inmune en sangre periférica inducido por tratamiento sistémico en el carcinoma de mama avanzado
Cruz Merino, Luis de la
Sánchez Margalet, Víctor
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
MDSC
OX40
sangre periférica
cáncer de mama avanzado
linfocitos T reguladores
La identificación de los diferentes elementos que intervienen en el proceso de inmunoedición, parece clave para explicar la evolución clínica en varios tipos tumorales. En este estudio, se analizó un conjunto de biomarcadores inmunes como células supresoras de origen mieloide (MDSC), linfocitos T reguladores (Treg), y recuentos de linfocitos T OX40+ y PD-1+, en sangre periférica de pacientes diagnosticadas de cáncer de mama avanzado antes y durante la implementación de la terapia antineoplásica de primera línea. En primer lugar, se realizó un análisis comparador de estos biomarcadores, entre las pacientes y la cohorte sana, antes de comenzar el tratamiento de primera línea y a continuación, entre grupos con beneficio clínico versus progresión de la enfermedad, a lo largo del tratamiento.
Los resultados reflejaron que las pacientes mostraban niveles basales más altos de células supresoras derivadas de mieloides (35.43, IR=180.73 vs 17.53, IR=16.96 células/µl; p=0.001) y células T reguladoras (32.05, IR=29.84 vs 22.61, IR=13.57 células/µl), en comparación con la cohorte sana. Además, después de la terapia, un aumento en el número de linfocitos T activados (que expresan OX40) y una disminución de células supresoras, MDSC y Treg y del número de linfocitos T exhaustos o agotados, que expresan PD-1, podrían determinarse en pacientes con beneficio clínico (p≤0.001). Estos hallazgos sugieren, que algunos elementos inmunes críticos pueden ser detectados y medidos fácilmente en sangre periférica, lo que abre una nueva oportunidad para la investigación traslacional, ya que parecen estar claramente correlacionados con la evolución clínica, al menos en cáncer de mama avanzado.
2021-09-30T07:08:07Z
2021-09-30T07:08:07Z
2021-06-09
2022-06-09
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sánchez León, M.L. (2021). Análisis del perfil de respuesta inmune en sangre periférica inducido por tratamiento sistémico en el carcinoma de mama avanzado. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/126361
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2017-11-29T10:27:57Z
urn:hdl:11441/66942
Proteínas de fase aguda en el diagnóstico etiológico de infecciones en pacientes HIV
Recio Quijano, Fernando
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Química
Bioquímica
Enfermedades infecciosas
Ciencias Médicas
Medicina Interna
Proteínas
El manejo clínico-asistencial de los enfermos con SIDA o con infección por el virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV) es extraordinariamente difícil.
La epidemia causa por este virus ha obligado a los clínicos a un completo reciclaje de sus conocimientos para afrontar una patología nueva y distinta.
Muchos de los que se enfrentan cada día a estos pacientes dedican grandes esfuerzos al desarrollo de nuevas estrategias de diagnóstico y tratamiento que faciliten el estudio de enfermos tan complejos.
Siguiendo esta línea de trabajo, en la Unidad de Enfermedades Infecciones del Hospital Universitario de Valme de Sevilla se dedica, desde hace algunos años, especial atención al estudio de la proteína C reactiva, un reactante de fase aguda que parece prometedor como ayuda diagnóstica en la patología asociada al HIV.
Un estudio prospectivo previo mostró la buena capacidad de esta proteína para discriminar entre ciertos tipos de infecciones y, actualmente, se ha convertido en un parámetro bioquímico de uso rutinario en todo individuo infectado por HIV que ingresa para estudio de fiebre sin focalidad.
Animados por este hecho y en un intento de mejorar la información aportada por la PCR, hemos ampliado nuestro interés a otros reactantes de fase aguda menos estudiados, tales como haptoglobina, albúmina, prealbúmina, transferina y alfa-1-antitripsina.
El comportamiento de tales parámetros bioquímicos parece ofrecer una orientación altamente valorable en la caracterización etiológica de las complicaciones infecciosas de pacientes HIV. Este hecho puede ampliar el espectro de aplicación de las determinaciones bioquímica en el terreno del diagnóstico diferencial de la Patología Infecciosa.
La infección por el virus de la inmunodeficiencia Humana (HIV) produce un progresivo y severo deterioro de la inmunidad celular y lesiona directamente determinados elementos celulares no inmunes, tales como células del tejido nervioso central.
La inmunodeficiencia celular causada expone a los individuos infectados a una casi interminable serie de infecciones oportunistas, muchas de ellas inexistentes en la población general y cuya presentación en los pacientes HIV es frecuentemente atípica y de diagnóstico muy complejo.
Las pruebas diagnósticas requeridas en el manejo de estos enfermos son numerosas, agresivas, de alto coste económico y, con excesiva frecuencia, de bajo rendimiento. A ello contribuyen diversos hechos: atipicidad clínica, coexistencia de diversas patologías, adicción a drogas intravenosas, etc.
Por otra parte, es un hecho bien conocido que diversas proteínas séricas que reaccionan a agresiones el medio (los denominados reactantes o proteínas de fase aguda) se comportan de modo diferente según cuál sea el estímulo que desencadene la fase aguda.
Por todo ello, pensamos que el comportamiento de ciertos reactantes de fase aguda podría ser de gran ayuda en el diagnóstico diferencial etiológico de ciertas patologías infecciosas frecuentemente asociadas a la infección por el HIV.
Con ese planteamiento, se han seleccionado para el presente estudio varias proteínas de fase aguda, con los siguientes criterios:
1. Proteína C reactiva. Considerada actualmente como el reactante de fase aguda por excelencia; presenta elevaciones muy importantes y rápidas ante los estímulos adecuados. Tiene comportamiento positivo. Su determinación es fácil, rápida y reproducible.
2. Haptoglobina. Es un reactante positivo de fase aguda, de reacción más lenta y menos intensa que la PCR, pero con elevaciones netas y mantenidas suficientemente en el tiempo. Los factores que pueden influir en sus concentraciones, al margen de la propia reacción de fase aguda, son infrecuentes en el transcurso de la infección por HIV (anemias hemolíticas, reacciones post-transfusionales, síndrome nefrótico, etc.).
3. Alfa-1-antitripsina. Reactante de fase aguda positivo, con perfil de reacción parecido al de la haptoglobina y poso susceptible de interferencias al margen de la reacción aguda en sí. La PCR, la haptoglobina y la alfa-1-antiripsina tienen mecanismos de control de su síntesis (mediante las leukinas) parecidos, pero no idénticos, lo que teóricamente incrementa el interés de sus medida simultánea.
4. Prealbúmina, albúmina y transferina. Son tres reactantes de fase aguda negativos, clásicamente relacionados con el estado de nutrición de los individuos. Aunque sus niveles basales parecen estar descendidos en fases avanzadas de la infección HIV, sus cambios tras infecciones son poco conocidos y pudieran expresar diferencias según el patógeno causal.
Otros reactantes de fase aguda, tales como la amiloide sérica A (SAA) o la Neopterina, no han sido seleccionados por su falta de disponibilidad, aunque serán motivo de posteriores investigaciones.
Las patologías asociadas a la infección HIV y que han sido motivo de estudio se han agrupado en 6 grupos:
1. Infecciones por bacterias piógenas.
2. Infecciones por Mycobacterium tuberculosis.
3. Infecciones parasitarias.
4. Infecciones micóticas.
5. Infecciones víricas.
6. Patologías no infecciosas.
Así pues, se trata de realizar un estudio prospectivo para averiguar sí:
HIPOTESIS 1. Cada una de estas infecciones, causada por agentes patógenos biológicamente muy distintos, presenta un patrón específico y reproducible de cambios en las concentraciones plasmáticas de la combinación de proteínas de fase aguda que se han estudiado.
De cumplirse tal hipótesis, la determinación de este conjunto de proteínas indicaría:
HIPOTESIS 2. Si existe un proceso infeccioso o no.
HIPOTESIS 3. Qué tipo de patógeno sería el responsable de la infección.
Varias son las ventajas que podrían derivarse de los datos aportados:
1. Evitar exploraciones innecesarias.
2. Evitar, en ocasiones, ingresos hospitalarios innecesarios.
3. Complementar, en el proceso diagnóstico, otros datos clínicos, bioquímicos, microbiológicos, etc. para apoyar o descartar determinadas patologías.
4. Posibilitar la disminución de costos asistenciales como consecuencia de todo lo anterior.
La determinación de estas proteínas tiene, además, la ventaja de su rapidez, fiabilidad, reproductibilidad y costo poco elevado, siendo posible su realización automatizada en el laboratorio.
CONCLUSIONES:
1. En la muestra de enfermos HIV analizada, durante la reacción de fase aguda, la proteína C reactiva, α1-antitripsina y haptoglobina incrementan positivamente sus concentraciones plasmáticas mientras que la prealbúmina, albúmina y transferina lo hacen negativamente.
2. Las variaciones globales observadas durante la reacción de fase aguda en las concentraciones de las proteínas estudiadas, en pacientes infectados por HIV, son similares a las descritas para el resto de la población.
3. Las concentraciones de tales proteínas no presentan correlación con la concentración de linfocitos CD4 en sangre periférica, indicando que su comportamiento durante la reacción de fase aguda es independiente del grado de inmunodepresión celular de los pacientes.
4. Las concentraciones de las proteínas estudiadas no muestran correlación con las concentraciones de albúmina o prealbúmina, indicando que su comportamiento durante la fase aguda es independiente del estado nutricional de los pacientes.
5. Las concentraciones medias de las proteínas estudiadas conforman patrones diferentes según que la reacción de fase aguda haya sido desencadenada por un agente bacteriano, tuberculoso, parasitario, vírico o no infeccioso.
6. En pacientes infectados por el HIV que sufran una enfermedad intercurrente secundaria, un análisis discriminante adecuado, basado en las concentraciones plasmáticas de las proteínas estudiadas, ha permitió definir una regla que diferencia, con aceptable grado de probabilidad, el grupo etiológico (bacteriano, tuberculoso, parasitario o vírico-no infeccioso) al que pertenece dicha enfermedad.
2017-11-29T10:27:57Z
2017-11-29T10:27:57Z
1992-12-18
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Gómez Mateos, J.M. (1992). Proteínas de fase aguda en el diagnóstico etiológico de infecciones en pacientes HIV. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/66942
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2019-06-07T09:45:14Z
urn:hdl:11441/87261
Novel molecular mechanisms and signaling pathways of microglial responses in amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
Pozo Pérez, David
Roodveldt, Cintia
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2019-06-07T09:45:14Z
2019-06-07T09:45:14Z
2019-05-22
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Leal Lasarte, M.M. (2019). Novel molecular mechanisms and signaling pathways of microglial responses in amyotrophic lateral sclerosis (ALS). (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/87261
eng
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2022-03-10T10:28:52Z
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Impacto de la fragilidad en los resultados de la revascularización coronaria en pacientes ancianos con síndrome coronario agudo
Recio Mayoral, Alejandro
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Fragilidad
cardiopatía isquémica
síndrome coronario agudo
ancianos
revascularización
Introducción: La población anciana representa un grupo heterogéneo de pacientes con
mayor riesgo de eventos adversos tras un síndrome coronario agudo. La fragilidad refleja la edad biológica, discriminando mejor el pronóstico vital que la edad cronológica. Existe poca información sobre el impacto de la fragilidad en población anciana con SCA. Nuestro objetivo es estudiar la prevalencia de fragilidad en pacientes ancianos ingresados por SCA, analizar su relación con la estrategia de revascularización utilizada y evaluar el impacto pronóstico en los resultados de la revascularización.
Material y métodos: Registro prospectivo multicéntrico de pacientes ³ 70 años ingresados por SCA, reclutados entre 2014 y 2016. Se evaluó la presencia de fragilidad según la escala SHARE-FI durante las primeras 48 horas. Durante el ingreso hospitalario se registró la estrategia de revascularización empleada (conservadora vs invasiva). La variable de resultado principal fue la mortalidad intrahospitalaria y durante el seguimiento a 12 meses.
Resultados: Se incluyeron 417 pacientes, con una prevalencia de fragilidad del 41%. En
58 (13.9%) pacientes se realizó un manejo conservador del SCA sin realización de coronariografía. La fragilidad se asoció con mayor probabilidad de optar por una estrategia conservadora (OR: 3.24 [1.62-6.44], p=0.001). Durante la hospitalización
fallecieron 20 (4.8%), con un mayor riesgo de mortalidad en los pacientes frágiles (OR: 4.38 [1.33-14.3], p= 0.015). Durante el seguimiento a 12 meses fallecieron 78 (18.7%) pacientes, con un mayor riesgo de mortalidad en los pacientes frágiles (HR 4.41 [2.48-
7.83]; p<0.001). El riesgo de mortalidad durante el seguimiento fue mayor en los pacientes que se optó por un manejo conservador del SCA (HR:2.9 [1.8-4.7]; p<0.001).
En el grupo de pacientes con manejo invasivo, la fragilidad incrementó el riesgo de mortalidad a 12 meses (HR:4.2 [2.2-7.9]; p<0.001). Conclusiones: La prevalencia de fragilidad es elevada en población anciana y se asocia con mayor riesgo de optar por un manejo conservador. La fragilidad se asocia de forma significativa con mayor mortalidad intrahospitalaria y durante el seguimiento a 1 año, independientemente de la estrategia de revascularización.
2022-03-10T10:28:52Z
2022-03-10T10:28:52Z
2021-12-13
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Caravaca Pérez, P.J. (2021). Impacto de la fragilidad en los resultados de la revascularización coronaria en pacientes ancianos con síndrome coronario agudo. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/130650
spa
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2017-04-26T09:16:46Z
urn:hdl:11441/58593
Enfermedad de pompe: protocolo diagnóstico por el laboratorio clínico
Jiménez Jiménez, Luis M.
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Bioquímica
Texto completo descargado desde Teseo
En la década de los años 60 aparecen en Europa las primeras referencias bibliográficas en torno al concepto de enfermedad rara (ER)1; pero no es hasta 1983 cuando se constituye en los Estados Unidos de Norteamérica la NORD (Nacional Organization for Rare Disorders), acuñándose de forma oficial el término de Enfermedad Rara, haciendo referencia a enfermedades con baja prevalencia. Posteriormente en los años 90 se constituye EURORDIS (European Organization for Rare Disorders), federación europea homóloga a la americana, y más recientemente FEDER (Federación Española de Enfermedades Raras) en nuestro país, con el fin de dar respuesta a las asociaciones de enfermos con e s- tas patologías que poco a poco han ido proliferando a lo largo de estos años2. La Unión Europea define ER como aquella que tiene una prevalencia inferior a 5 casos por cada 10.000 habitantes, lo que equivale al 6-8% de la población europea3. Este umbral de prevalencia varía según los distintos países atendiendo a criterios epidemiológicos y económicos. En los EE. UU. se considera ER aquella que afecta a menos de 200.000 habitantes4, lo que se corresponde con un 8,4% de la población, en Japón las patologías que afectan a 4 de cada 10.000 habitantes5 y, en Australia, a las que afectan a 1 de cada 10.0006. Pero la realidad que se pretende abarcar con el término ER requiere una definición más amplia. De este modo, una definición más completa de ER sería “aquel conjunto amplio y variado de trastornos que se caracterizan por afectar, cada uno de ellos, a un número reducido de individuos en la población, ser crónicos y discapacitantes, contar con una elevada tasa de morbimortalidad, y para los que los recursos terapéuticos son, en gene- ral, escasos y poco eficaces”7. Algunas cuestiones importantes que reclaman aquellos que padecen estos trastornos, y quienes están relacionados con ellos, son: la falta de conocimiento científico sobre sus enfermedades; la dificultad para el acceso a un diagnóstico correcto y el retraso en dicho diagnóstico, así como la falta de información de calidad y de apoyo en ese momento; la falta de cuidados y atención multidisciplinaria; las consecuencias sociales adversas; la dificultad y la falta de equidad en el acceso al tratamiento, la rehabilitación y los cuida- dos; la pérdida de confianza en los servicios médicos y sociales; y cierto desinterés por parte de los profesionales de la salud. Como hemos referido, el diagnóstico suele ser complicado, no sólo por la sintomatología insidiosa e inespecífica que presentan de forma habitual y que puede llevar a retraso y errores, sino porque muchas veces, las técnicas que requieren son muy costosas y de difícil acceso y, sobre todo, por el gran desconocimiento que los clínicos tienen sobre este tipo de patologías. En España, la investigación en este campo es todavía escasa8-11, y por ello, se hacen necesarios esfuerzos importantes encaminados al desarrollo y potenciación de la investigación en este campo. En este sentido, se ha creado recientemente el Instituto de Investigaciones de Enfermedades Raras (Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Sanidad y Consumo) que, entre otras actividades, ha publicado una Guía-Manual con un enfoque práctico de las ER12. El principal problema con el que nos encontramos es la repercusión sociosanitaria que suponen estas enfermedades13-14. La falta de inversiones y la escasa sensibilización de las distintas áreas implicadas, hacen sentir desamparados e impotentes a los pacientes afectos de ER. El escaso número de afectados por una misma ER es insuficiente para im- pulsar nuevas formas de detección, tratamiento y prevención, lo que agrava todavía más el problema para los pacientes. En los últimos años, la Unión Europea está impulsando la investigación, la formación de profesionales, el conocimiento y la divulgación de estas enfermedades. La solución es compleja, y precisa la colaboración conjunta de instituciones públicas, investigadores, facultativos, empresas farmacéuticas y asociaciones de pacientes15. Dentro de este amplio campo de las ER se encuentran enclavadas las enfermedades por depósito lisosomal, grupo muy heterogéneo donde destaca la enfermedad de Pompe, objeto de estudio del presente trabajo. La Decisión Nº 1295/1999/CE del Parlamento Europeo y del Consejo del 29 de abril de 1999 aprobó un programa de acción comunitaria sobre las enfermedades poco comunes en el marco de acción en el ámbito de la Salud Pública (1999-2003). Su propósito fue el de contribuir, en coordinación con otras medidas Comunitarias, a asegurar un alto nivel de protección sanitaria con relación a enfermedades raras. Se puso una atención específica en mejorar los conocimientos y en facilitar el acceso a la información sobre estas enfermedades, mediante cuatro acciones, siendo la segunda de ellas: Contribuir a la formación y la actualización de los conocimientos de los profesionales para mejorar, en el ámbito de las enfermedades poco comunes, la detección precoz, el reconocimiento, la intervención y la prevención. Por ello, el primer objetivo de esta tesis será contribuir a esta actualización de conocimientos sobre la enfermedad de Pompe a través de una extensa revisión bibliográfica que presente los principales puntos de conocimiento sobre el contexto, diagnóstico y tratamiento de la enfermedad y que quedarán expuestos en el punto I. Introducción.
2017-04-26T09:16:46Z
2017-04-26T09:16:46Z
2012-05-24
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Bobillo Lobato, J. (2012). Enfermedad de pompe: protocolo diagnóstico por el laboratorio clínico. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/58593
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2018-12-05T08:51:25Z
urn:hdl:11441/80797
Acoplamiento estímulo-secreción en los islotes de Langerhans. Papel de las enzimas fosforilantes de la glucosa
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Ciencias médicas
Endocrinología
Medicina Interna
Una vez revisados los conocimientos actuales sobre los mecanismos de secreción de insulina por la célula B, el objetivo del presente trabajo es: a) El estudio a nivel molecular del sistema de reconocimiento de la glucosa por la célula B, y b) si existen variaciones en su sensibilidad en situaciones experimentales en la que la respuesta insulínica a la glucosa esté alterada.
El ayuno es un eficaz modelo experimental que se caracteriza por un bloqueo en la respuesta secretoria de la célula B a la glucosa sin que modifique el contenido de insulina. Por tanto, puede existir un fallo en el sistema receptor de la señal o en el sistema acoplador estímulo-secreción.
Por otra parte, es interesante caracterizar con más precisión la enzima fosforilante de elevada Km para la glucosa. La única enzima descrita en tejidos animales con elevada Km para la glucosa es la glucoquinasa hepática. Esta enzima presenta propiedades importantes como desaparición de su actividad en el ayuno e inducción de su síntesis en la realimentación. Es pues de interés estudiar el comportamiento de la enzima descrita en el islote en similares situaciones experimentales.
Otra característica del ayuno es la marcada utilización de los ácidos grasos por los tejidos como principal aporte energético. En alguno de ellos, concretamente en músculo esquelético y de corazón, se ha descrito un efecto inhibidor de los ácidos grasos sobre la utilización de la glucosa. La hipótesis más aceptada sugiere que algún metabolito común a la oxidación de los ácidos grasos y a la glucolisis actuaría inhibiendo esta última en pasos limitantes de su velocidad.
El primero de ellos en la mayoría de los tejidos es la fosforilación de la glucosa. Por tanto es de interés estudiar la existencia de dicho ciclo en la célula B y si las enzimas que controlan la primera reacción limitante de la utilización de la glucosa están afectadas o no.
Para ello se utilizará un análogo estructural del ácido esteárico, el 2 bromostearato que bloquea la beta oxidación de los ácidos grasos, actuando a nivel de la carnitina transferasa de grupos ácidos mitocondrial.
El estudio se llevará a cabo a tres niveles: organismo entero, tejido y nivel intracelular, analizando a dichos niveles las modificaciones inducidas experimentalmente.
CONCLUSIONES:
1. El ayuno produce un descenso en la glucemia, llegando a un mínimo tras 48 horas y manteniéndose tras periodos más prolongados de ayuno.
2. Diferentes tipos de realimentación recuperan de una manera característica los niveles circulantes de glucosa descendidas durante el ayuno: mientras que la realimentación con dieta standard o selectiva con glucosa recupera la glucemia a las 48 horas de realimentación, la dieta baja en carbohidratos produce una menor recuperación.
3. Los valores basales de insulina plasmáttica descienden en un 63% tras 48 horas de ayuno; dichos valores son similares tras 96 horas de ayuno. La respuesta insulinosecretora de los islotes de Langerhans a la glucosa desaparece parcialmente tras 96 horas de ayuno.
4. Los islotes de Langerhans poseen un sistema enzimático doble que regula la actividad fosforilante de glucosa: uno con alta Km y baja afinidad para la glucosa y otro con baja Km y alta afinidad para la glucosa.
5. La enzima de alta afinidad presenta características cinéticas similares a las descritas para las hexoquinasas de otros tejidos. La enzima de baja afinidad presenta algunas características cinéticas similares a la glucoquinasa hepática.
6. Existe un progresivo descenso de las actividades fosforilantes de glucosa durante el ayuno. Tras 96 horas de ayuno, la actividad de alta Km desaparece prácticamente, mientras que la de baja Km conserva el 23% de actividad residual.
7. La realimentación provoca una paulatina recuperación de ambas actividades, presentando un patrón de reactivación específico para cada tipo de realimentación.
8. La realimentación selectiva con glucosa por vía oral “ad libitum” recupera de una forma importante la actividad de baja afinidad, alcanzado los valores de las ratas alimentadas tras 96 horas de realimentación.
9. La realimentación con dieta standard produce una equilibrada recuperación de ambas actividades, alcanzándose un 80% de los valores en ratas alimentadas tras 48 horas de realimentación.
10. La realimentación con dieta baja en carbohidratos produce una recuperación importante en la actividad de alta afinidad o hexoquinasa. Tras 48 horas de realimentación, alcanza un 85% del valor en ratas alimentadas, mientras que la actividad de baja afinidad apenas alcanza el 50% de los valores en ratas alimentadas con dieta habitual.
11. La glucosa ejerce un efecto inductor específico sobre la actividad de baja afinidad. Dicho efecto es patente tras incubación de los islotes procedentes de ratas ayunadas durante 96 horas en un medio que contiene glucosa 16,7 mM durante 60 minutos.
12. El 2 Bromoestearato, inhibidor de la oxidación de los ácidos grasos, ejerce un efecto inductor patente sobre la actividad de baja afinidad en islotes procedentes de ratas ayunadas durante 96 horas.
13. La incubación de islotes procedentes de ratas ayunadas durante 96 horas con glucosa 16,7 mM y 2 Bromoestearato 0,25 mM durante 60 minutos produce una reactivación plena de la actividad fosforilante de glucosa de baja afinidad. La actividad fosforilante de alta afinidad se recupera en un 60%.
14. El 2 Bromoestearato recupera parcialmente la respuesta insulinosecretora a la glucosa bloqueada en el ayuno.
2018-12-05T08:51:25Z
2018-12-05T08:51:25Z
1982-02-01
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Bedoya Bergua, F.J. (1982). Acoplamiento estímulo-secreción en los islotes de Langerhans. Papel de las enzimas fosforilantes de la glucosa. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/80797
6019726
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2020-02-27T19:16:33Z
urn:hdl:11441/93719
Diversidad y funcionalidad de las tiorredoxinas en cianobacterias: las tiorredoxinas TrxB y TrxQ de Synechocystis sp. PCC 6803 y el sistema NADPH-tiorredoxina reductasa/tiorredoxina en Anabaena sp. PCC 7120
Florencio Bellido, Francisco Javier
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular
2020-02-27T19:16:33Z
2020-02-27T19:16:33Z
2007-10-05
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Pérez Pérez, M.E. (2007). Diversidad y funcionalidad de las tiorredoxinas en cianobacterias: las tiorredoxinas TrxB y TrxQ de Synechocystis sp. PCC 6803 y el sistema NADPH-tiorredoxina reductasa/tiorredoxina en Anabaena sp. PCC 7120. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
https://hdl.handle.net/11441/93719
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional
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2015-08-31T09:19:15Z
urn:hdl:11441/28102
Estudio molecular de la inactivación del cromosoma X en mujeres y su relación con los distintos fenotipos asociados al gen FMR1
Lucas Lucas, Miguel
Pintado Sanjuán, Elizabeth
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Falta por incorporar las palabras clave
Las premutaciones y mutaciones en el gen FMR1 se asocian con diferentes fenotipos. Además, por ser un gen que se localiza en el cromosoma X la afectación es diferente en varones y mujeres. Nuestra hipótesis de trabajo es que el sesgo en la inactivación del cromosoma X determina el grado de afectación en las mujeres portadoras de premutación o de mutación completa. Aunque se postula que en la población general la inactivación del cromosoma X es al azar, desviaciones de la inactivación hacia uno u otro cromosoma X influencia la mayor o menor penetrancia del síndrome. Si el sesgo implica mayor inactivación del cromosoma X normal las manifestaciones del síndrome serán mayores que si el sesgo se corresponde con un porcentaje mayor de inactivación del cromosoma patológico. Objetivos. - Desarrollar la metodología para el análisis del estado de metilación de diferentes loci en el cromosoma X para determinar su estado de activación. - Estudiar la frecuencia del sesgo en la población no X frágil y en las pacientes X frágiles. - Estudiar el sesgo en mujeres con mutación completa y su importancia en la expresión del fenotipo X frágil. - Determinar si la inactivación aberrante del cromosoma X en varones pudiera ser causa del aborto espontáneo. - Analizar el sesgo en mujeres portadoras de premutación y relacionarlo con los diferentes fenotipos asociados a las premutaciones. - Estudiar los niveles de ARNm del gen FMR1 y correlacionarlo con el sesgo en la inactivación del cromosoma X en mujeres portadoras. Conclusiones. - La metodología empleada de digerir con enzimas de restricción sensibles a metilación y PCR posterior aporta resultados coherentes e indicativos de inactivación del cromosoma X. - En las pacientes X frágiles portadoras de mutación completa el sesgo en la inactivación del cromosoma X se corresponde con los niveles de expresión del ARNm del gen FMR1 de la proteínas FMRP, dando lugar a fenotipos diferentes teniendo el mismo tamaño de la mutación. - En las pacientes X frágiles portadoras de premutación, el sesgo en la inactivación del cromosoma X normal puede ser causa de mayor afectación de los síndromes asociados a la premutació. - En las familias estudiadas la ausencia de sesgo no protege de la aparición del fenotipo correspondiente, y la ausencia de síntomas se relaciona con el sesgo hacia el cromosoma X normal. - Las mujeres portadoras de premutación tienen niveles elevados de ARNm del gen FMR1 presentando niveles más elevados aquellas que muestran un sesgo hacia la expansión del cromosoma X afectado. - Locus cercanos en el cromosoma X siguen un patrón idéntico de metilación mientras que aquellos que están más alejados pueden presentar un patrón de mutilación diferente debido al crossing-over. - La inactivación aberrante del cromosoma X en los primeros estadíos de gestación puede ser una posible causa de aborto espontáneo en fetos varones. - Promover el estudio de la inactivación del cromosoma X en los abortos espontáneos de familias cuya causa es desconocida. - Otras mutaciones desconocidas además de las ya descritas pueden ser causa de extremado sesgo.
2015-08-31T09:19:15Z
2015-08-31T09:19:15Z
2008-12-15
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
http://hdl.handle.net/11441/28102
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/28102
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
oai:idus.us.es:11441/156172024-02-17T17:18:14Zcom_11441_11443com_11441_11441com_11441_10989com_11441_10983com_11441_10690col_11441_11503col_11441_10993
2014-11-27T11:58:31Z
urn:hdl:11441/15617
Importancia de la calidad analítica con método POCT para el seguimiento estricto de la glucemia capilar
Sánchez Margalet, Víctor
Goberna Ortiz, Raimundo
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Diabetes
El uso del control estricto de la glucemia está muy extendido en los protocolos hospitalarios, sobre todo en las unidades de cuidados críticos. Hay estudios que demuestran la mejoría de los pacientes, Van den Berghe demostró que el TGC (Tight Glucose Control) provoc& ... oacute; la reducción de la mortalidad en una tercera parte de los pacientes de cuidados intensivos quirúrgicos (Van den Berghe G et al, 2001). Otros estudios también demostraron marcados y significativos beneficios en las tasas de infección y mortalidad, todos los protocolos de TGC tienen el objetivo de mantener el estricto control de la glucemia en pacientes en estado crítico (Wiener RS et al, 2008). El incremento de la diabetes tipo 2 y el reconocimiento de que el logro de objetivos específicos sobre la glucemia puede reducir sustancialmente la morbilidad, han hecho que el tratamiento efectivo de la hiperglucemia sea considerado una de las principales prioridades en el manejo del paciente diabético.
2014-11-27T11:58:31Z
2014-11-27T11:58:31Z
2010
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Rodríguez Oliva, M.S. (2010). Importancia de la calidad analítica con método POCT para el seguimiento estricto de la glucemia capilar. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/15617
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/15617
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2015-04-16T09:18:48Z
urn:hdl:11441/23876
Base Molecular del asesoramiento genético de fibrosis quística
Lucas Lucas, Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
Fibrosis quística
La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva producida por mutaciones en el gen CFTR. Dicho gen produce una proteína (CFTR) implicada en el transporte de iones Cl- a través de la membrana plasmática. La alteración ... La consecuencia de estas secreciones afecta principalmente a pulmones, páncreas exocrino, aparato reproductor masculino y glándulas sudoríparas, provocando un cuadro clínico muy variable de unos pacientes a otros. Tanto la elevada concentración iónica en el sudor como las anomalías del aparato reproductor masculino están presentes en la gran mayoría de los afectos de FQ.Se han detectado más de 500 mutaciones de FQ en todo el mundo, lo que da idea de la heterogeneidad de las mutaciones que la producen. La mutación F508 tiene una frecuencia muy superior al resto. En países del norte de Europa puede llegar a valores de más del 80% mientras que en España y sur de Europa está cercana al 50%. Esto hace que la heterogeneidad genética de la FQ en España ser muy elevada, dato que se apoya también en los análisis de los haplotipos de los microsatélites intragénicos IVS8CA, IVS17BTA e IVS17BCA.La elevada heterogeneidad de las mutaciones de FQ, la variabilidad de su clínica y la elevada frecuencia de mutaciones de FQ en la población general complican el diagnóstico de la FQ. Por ello nos planteamos los siguientes objetivos:1.- Analizar las mutaciones responsables de FQ en nuestra población y las frecuencias de las mismas.2.- Estudias la relación genotipo-fenotipo, es decir, la asociación que existe entre el genotipo recibido y sus principales manifestaciones a nivel de aparato respiratorio, función pancreática, concentración de electrolitos en el sudor y otras características asociadas a la fibrosis quística.3.- Analizar la asociación de los haplotipos de|
2015-04-16T09:18:48Z
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1997
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Muñoz Domínguez, C. (1997). Base Molecular del asesoramiento genético de fibrosis quística. (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla, Sevilla.
http://hdl.handle.net/11441/23876
https://idus.us.es/xmlui/handle/11441/23876
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 España
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2018-04-17T08:52:46Z
urn:hdl:11441/73098
Análisis ultraestructural del efecto neuroprotector de la melatonina sobre las lesiones del cortex cerebeloso del embrión de pollo inducidas por glutamato monosódico
Prada Elena, Francisco Andrés
Espinar García, Auxiliadora
Guerrero Montávez, Juan Miguel
Universidad de Sevilla. Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular e Inmunología
2018-04-17T08:52:46Z
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1998
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
García de la Oliva, Alejandro (1998). Análisis ultraestructural del efecto neuroprotector de la melatonina sobre las lesiones del cortex cerebeloso del embrión de pollo inducidas por glutamato monosódico (Tesis Doctoral Inédita). Universidad de Sevilla,
https://hdl.handle.net/11441/73098
spa
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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